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用于质谱分析的微量蛋白样品在线一体化处理的方法研究

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用于质谱分析的微量蛋白样品在线一体化处理的方法研究

作者：刘心怡东南大学

学位级别：硕士

生物样品中蛋白质的存在和丰度高低都是蛋白组学的研究重点,基于质谱的蛋白质组学可以用来检测和发现各种疾病的生物标志物,但是仍存在一些挑战:临床样品的有限性和单细胞研究的需求,都要求质谱蛋白组学技术实现对微量样品的高精度检测... 详细信息

生物样品中蛋白质的存在和丰度高低都是蛋白组学的研究重点,基于质谱的蛋白质组学可以用来检测和发现各种疾病的生物标志物,但是仍存在一些挑战:临床样品的有限性和单细胞研究的需求,都要求质谱蛋白组学技术实现对微量样品的高精度检测。和质谱技术相比,针对微量样品处理的技术相对落后,样品的处理步骤一般包括:蛋白质提取、蛋白质变性、蛋白质还原反应、蛋白质烷基化反应、蛋白质酶切以及在处理过程中涉及到的除盐、转移、冻干等操作,这些操作会引起样品处理过程中的损失。而在许多的生物组织样品中,能够获得的蛋白质量是非常有限的,这些微量蛋白在实验过程中损失会导致较差的蛋白鉴定结果。为了解决上述提及的问题,我们选用了毛细管微反应器,进一步减小了样品扩散,提高生物反应速率,毛细管的选择则是先进在色谱和质谱中具有优势的整体柱材料。整体柱材料的高孔隙率可以提供更多的比表面积,较大程度地富集生物分子,并且整体柱的低背压和高流速特性有利于样品处理过程中蛋白质的富集和盐成分的去除。本论文利用“一锅法”制备的功能化整体柱,开发了针对微量样品的在线一体化处理方法,样品在整体柱中完成了在线裂解、酶解、除盐等步骤实现低损耗的样品处理,提高了酶切效率,与液相色谱串联质谱结合的直接一体化分析最终提高了蛋白的质谱鉴定数,解决了样品进入质谱效率低的问题。具体内容如下:1.功能化整体柱的制备将含有多甲基丙烯酸酯取代的POSS试剂(MA-POSS)作为交联剂,加入有机功能单体甲基丙烯酸丁酯(C4),用热引发的“一锅法”巯基-丙烯酸酯聚合反应快速制备POSS基质杂化整体柱。发现通透性越差、孔径越小的C4功能化整体柱的蛋白质富集能力越强;随着整体柱长度的增加,蛋白的富集效率也随之增加;通过电子显微镜和质谱分析仪对整体柱进行表征,发现最适宜一体化处理方法的整体柱的内部孔径约为1μm,该整体柱的柱容量可达50ng蛋白量。2.在线一体化处理微量样品方法建立利用整体柱上修饰的功能单体对蛋白的富集能力,构建了在整体柱中在线一体化处理和分析微量蛋白的体系,并对实验步骤中直接进样分析所涉及的液相参数进行调节,通过45min的流动相平衡使质谱分析方法达到最优;设计不同在线消化的酶解条件,发现1μg/μL的Trypsin酶解液可在2h快速酶解柱中蛋白,使得一体化方法的酶解效率进一步提升;通过和离心管处理方法结果对比,一体化方法更高的鉴定数证明了该方法可有效提高微量蛋白的质谱分析效率。3.在线一体化处理单细胞并进行评价通过对小鼠TKR-CT26细胞样品进行三次技术重复,并将其结果与大量TKR-CT26细胞蛋白的结果进行对比,发现其GRAVY的值和分子量的分布相似,证明一体化方法有较好的重复性;通过加入i RT肽段建立质量-峰面积线性曲线,并将其作为实验前后质量损失的内标,计算出一体化方法的平均损失率为41.02%,证明了一体化方法在单细胞实验中的低损失的优点;通过设立空白对照组,证明了一体化质谱分析的结果不被污染蛋白所影响,具有高可信度。

关键词：微量样品一体化处理质谱整体柱蛋白质组学

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美国新智库及其对华战略研究

美国新智库及其对华战略研究

作者：刘心怡外交学院

学位级别：硕士

在美国政治生活中，智库扮演着不可忽视的重要角色。作为美国政府决策的“外脑”，智库提供的政策研究、建议和咨询深刻的影响着美国对外政策的制定。21世纪以来，随着美国面临的国内和国际挑战日益复杂和多样化，以美国进步中心、新美... 详细信息

在美国政治生活中，智库扮演着不可忽视的重要角色。作为美国政府决策的“外脑”，智库提供的政策研究、建议和咨询深刻的影响着美国对外政策的制定。21世纪以来，随着美国面临的国内和国际挑战日益复杂和多样化，以美国进步中心、新美国安全中心、全球发展中心等为代表的新智库应运而生，并迅速崛起。新智库虽然在经验和规模上还稍显不足，但在对政府的影响力上却堪与老牌智库比肩，并逐渐成为奥巴马执政期间美国对华决策中的一股新力量。随着中美关系的深入发展，涉华研究成为新智库的重点研究方向。美国新智库的对华认知和对华战略充分体现了中美两国高度依存又相互竞争的复杂关系。不论是在经济、政治、军事与安全还是气候与能源变化领域，新智库对华政策建议都大体遵循了“保持接触”、“规则约束”和“建立平衡”三种思路，这一战略很大程度上为奥巴马政府所接受。在这一新思路的指引下，奥巴马对华政策实践展现出“全面合作”和“有限制约”的特征。可以说，新智库为我们更好理解当今美国对华政策提供了有益的途径。

关键词：美国新智库中美关系美国对华战略奥巴马对华政策

OATP1B1和OATP1B3在依折麦布及其葡萄糖醛酸代谢物的肝脏摄取中的重要作用

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OATP1B1和OATP1B3在依折麦布及其葡萄糖醛酸代谢物的肝脏摄取中的...

作者：张心怡苏州大学

学位级别：硕士

有机阴离子转运多肽(OATPs)是重要的肝脏转运蛋白,其中OATP1B1和OATP1B3主要在人肝细胞中的基底膜侧表达,可以主动摄取不同底物药物由血液进入肝细胞内;同时可转运内源性物质如雌二醇-17-β-D-葡糖醛酸、鹅去氧胆酸葡糖醛酸等。依折麦... 详细信息

有机阴离子转运多肽(OATPs)是重要的肝脏转运蛋白,其中OATP1B1和OATP1B3主要在人肝细胞中的基底膜侧表达,可以主动摄取不同底物药物由血液进入肝细胞内;同时可转运内源性物质如雌二醇-17-β-D-葡糖醛酸、鹅去氧胆酸葡糖醛酸等。依折麦布是一种肠道胆固醇吸收抑制剂,在降低人体总胆固醇、低密度脂蛋白、载脂蛋白B和非高密度脂蛋白中具有重要作用。到目前为止,对于肝脏OATP摄取依折麦布及其葡萄糖醛酸代谢物的研究比较有限。小鼠肝脏中特异表达Oatp1b2转运体,由Slco1b2基因编码,与人OATP1B1和1B3同源。Slco1b2基因敲除小鼠模型是用于研究人肝脏转运蛋白对药物处置作用的重要工具。本研究首先在基因及功能方面验证用CRISPR/Cas9技术得到的Slco1b2基因敲除小鼠纯合子(Slco1b2-/-)。通过转录组测序对基因敲除及野生型小鼠的不同表达基因(DEGs)进行差异分析,相比于野生型小鼠,敲除鼠一系列基因表达发生了变化;实时定量PCR结果也发现敲除小鼠中Slco1b2基因表达可忽略不计。Oatp1b2特征性底物2’-7’-二氯荧光素的药代动力学研究发现,口服及尾静脉给药方式下,基因敲除小鼠的血浆AUC相比于野生小鼠显著升高,而肝脏AUC显著降低,验证了敲除鼠Oatp1b2转运体功能的缺失。对依折麦布的代谢机制研究发现,其在人、小鼠、大鼠肝微粒体及大鼠肠微粒体中均可快速生成葡萄糖醛酸代谢物,其中小鼠肝微粒体具有最高催化效率;而大鼠肝微粒体的固有清除率明显高出肠微粒体15.7倍。同时UGT1A1、1A3在依折麦布葡萄糖醛酸化反应中起主导作用,而UGT1A1、1A3主要在人肝脏表达,均说明肝脏是发生该反应的主要代谢清除器官。进一步研究发现拉帕替尼对UGT1A3介导的依折麦布的葡萄糖醛酸化具有较强抑制作用,IC50值为5.1±1.3μM。对依折麦布的主动转运研究发现,稳定表达OATP1B1、1B3的CHO细胞主动摄取依折麦布葡萄糖醛酸而不摄取依折麦布原型,这种选择性转运可能与葡萄糖醛酸中的羧基有关。根据内在摄取清除率(Vmax/Km值)得知,OATP1B3具有更强的主动转运依折麦布葡萄糖醛酸的能力。另外,药物-药物相互作用研究发现,依折麦布及其葡萄糖醛酸代谢物可不同程度抑制OATP1B1、1B3特征性底物瑞舒伐他汀的摄取。对依折麦布在Slco1b2-/-及野生型小鼠体内进行药代动力学研究发现,Slco1b2-/-小鼠血浆中依折麦布葡萄糖醛酸的AUC显著高于野生型小鼠(1.6倍),而肝血比降低。但两者间依折麦布AUC无差别,表明野生型小鼠中存在Oatp1b2转运体将依折麦布葡萄糖醛酸主动转运至肝脏中从而导致血浆暴露量降低,这与体外研究结果一致。综上所述,我们通过转录组测序、实时定量PCR及特征性底物的药代动力学从基因、转运功能层面验证了 Slco1b2-/-基因敲除小鼠的成功构建。之后UGT酶介导依折麦布的代谢和OATP1B1、1B3介导的依折麦布葡萄糖醛酸的转运研究表明了 UGT和OATP在依折麦布的肝脏处置中的作用。体内研究进一步验证肝脏转运蛋白OATP1B1、1B3在依折麦布体内药代动力学行为的重要作用,也为临床上预测依折麦布与OATP底物的药物-药物相互作用提供理论依据。

关键词：有机阴离子转运多肽 Slco1b2-/-基因敲除小鼠药代动力学依折麦布依折麦布葡萄糖醛酸

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镁对热浸镀锌铝合金层耐蚀性的影响

腐蚀与防护 2013年第8期34卷 686-689页

作者：何斐骆心怡胡玉冰凌娟南京航空航天大学材料科学与技术学院南京210016

采用热浸镀法在一定的助镀条件下制备了不同镁含量的Zn-Al-Mg合金镀层。利用扫描电镜、能谱仪及X射线衍射仪(XRD)分析了镀层的组织结构;采用NaCl溶液全浸试验和电化学试验评价镀层的耐蚀性能。结果表明,在一定范围内,随着镀液中镁含量... 详细信息

采用热浸镀法在一定的助镀条件下制备了不同镁含量的Zn-Al-Mg合金镀层。利用扫描电镜、能谱仪及X射线衍射仪(XRD)分析了镀层的组织结构;采用NaCl溶液全浸试验和电化学试验评价镀层的耐蚀性能。结果表明,在一定范围内,随着镀液中镁含量的增加,镀层组织更加均匀、致密,镀层耐蚀性能也随之提高;当镀液中加入0.7%镁时制备的镀层耐蚀性最好,超过0.7%时镀层的耐蚀性能反而下降。

关键词：热浸镀 Zn-Al-Mg合金镀层耐蚀性

提高微小孔放电-电解复合加工表面完整性研究

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提高微小孔放电-电解复合加工表面完整性研究

作者：张心怡南京航空航天大学

学位级别：硕士

气膜孔结构常用于先进航空发动机的叶片冷却,气膜孔的加工精度与加工质量极大影响着航空发动机的性能及寿命。放电-电解复合穿孔工艺通过控制工作液浓度,将放电熔融和电解腐蚀现象结合在一个工步中。管电极与孔壁间微弱的电解反应能够... 详细信息

气膜孔结构常用于先进航空发动机的叶片冷却,气膜孔的加工精度与加工质量极大影响着航空发动机的性能及寿命。放电-电解复合穿孔工艺通过控制工作液浓度,将放电熔融和电解腐蚀现象结合在一个工步中。管电极与孔壁间微弱的电解反应能够去除火花放电残留的熔融凝固层,提高小孔的加工质量。但加工过程中孔口附近的工件表面存在杂散腐蚀现象,破坏了小孔的入口形貌。针对这一问题,本文优化了复合加工中影响电解反应的加工参数,采用屏蔽层、辅助阳极等方法抑制加工过程中工件表面的杂散腐蚀现象,从而在不影响孔壁加工质量的前提下,提高小孔入口处工件的表面完整性。主要研究内容如下:(1)通过软件仿真和实验验证分析了放电-电解复合加工过程中工件表面的电场分布,从加工工件表面完整性的角度对工艺参数进行优化。使用优化后的工艺参数(脉冲宽度12μs、脉冲间隔36μs、峰值电流12A)对镍基单晶材料工件进行了微小孔放电-电解复合加工实验。加工出的小孔入口处形貌大致可分为孔缘区、过渡区和工件表面区域,三种区域的改善需求和改善难度均有所不同。由于合金材料中元素分布存在差异,复合加工中工件表面存在选择性腐蚀现象。难溶解相以颗粒状残余在工件表面,造成工件表面碳元素含量上升。颗粒状残留物随着电解反应的不断进行而剥落,在工件表面留下凹状坑,损害了工件的表面形貌。但另一方面,电解反应去除了火花加工后工件表面残余的拉应力区,这对提高工件的疲劳寿命有积极的意义。(2)依据复合加工中工件表面杂散腐蚀的形成机理,提出了利用绝缘介质将工件与工作液屏蔽,以提高加工工件表面完整性的方法,并尝试了绝缘漆和气流两种屏蔽介质。工件表面绝缘漆保护方法能够在不影响孔壁熔化凝固层充分去除的前提下,确保加工过程中工件表面不受杂散电流腐蚀。该方法操作简单,但能明显地提高微小孔放电-电解复合穿孔后工件的表面完整性,可行性较高。气流屏蔽利用气流冲击工件表面,驱使工作液加快离开工件表面,因而无需对工件表面进行绝缘预处理也能起到屏蔽的效果,从而抑制杂散腐蚀现象,提高加工工件的表面质量。但气流影响了加工状态的稳定性,孔口附近容易出现碳化物残留,该方法仍需进一步完善。(3)针对屏蔽法中屏蔽区域边缘处电流密度突变导致腐蚀加剧的问题,尝试利用正电位差辅助阳极改善加工过程中电场的分布,并结合仿真分析和实验验证对辅助阳极的参数进行了优化。在内径0.7mm,与工件间隙0.05mm,电位差+15V的辅助阳极作用下,加工出的小孔表面完整性和尺寸精度都有所提高。该方法加工状态稳定,但需要外接电路,操作较为复杂,实用性低,目前仅建议用于少量孔的高质量加工中。

关键词：放电-电解复合加工表面完整性杂散腐蚀屏蔽法辅助阳极

AZ31镁合金轧制应力状态分析及边裂损伤研究

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AZ31镁合金轧制应力状态分析及边裂损伤研究

作者：王心怡太原科技大学

学位级别：硕士

镁合金是一种轻质金属,其比强度高、低密度、高阻尼能力在交通、电子通讯和航空航天等领域具有广泛的研究及应用。轧制是镁合金板带生产中常用的方法,轧制过程中材料承受复杂的载荷和剧烈的塑性变形导致边裂损伤是镁合金板带成材率低、... 详细信息

镁合金是一种轻质金属,其比强度高、低密度、高阻尼能力在交通、电子通讯和航空航天等领域具有广泛的研究及应用。轧制是镁合金板带生产中常用的方法,轧制过程中材料承受复杂的载荷和剧烈的塑性变形导致边裂损伤是镁合金板带成材率低、加工成本高的一个重要原因,阻碍了镁合金板带的推广应用。本文采用数值模拟的方法研究了AZ31镁合金板材在不同变形工艺轧制过程中板材轧制变形区的应力状态分布规律。建立镁合金材料本构关系,结合实验和模拟,确定了镁合金GTN模型参数,研究工艺参数对镁合金轧制过程边裂的影响。最终提出抑制轧制边裂的工艺措施,为镁合金轧制生产提供理论依据。论文的主要结论有:(1)轧板中心区域为三向压应力状态,按应力值大小排序:法向压应力>横向压应力>轧向压应力;沿轧板的宽度方向,从板中心到板边部法向压应力和横向压应力逐渐降低,其中板边部横向压应力降为0,轧向正应力由压应力逐渐变为拉应力。(2)摩擦系数、压下量和板厚都会影响轧制区的应力分布规律,对轧制区轧向正应力的分析表明:随着摩擦系数、压下量的增大,轧向正应力由压应力转变为拉应力的拐点从边部向轧板中心移动,且轧向拉应力最大值逐渐增大;随着板厚的增大,轧向正应力拐点由轧板中心向板边部移动,拉应力最大值逐渐减小。因此,增大板厚或减小摩擦系数和压下量可以有效降低边部拉应力,从而减少边部开裂的可能性。(3)通过拉伸实验确定了镁合金的模拟参数,并结合GTN损伤模型建立了合理的镁合金轧制有限元模型。通过ABAQUS有限元软件对轧制成型过程进行了数值仿真,研究表明轧件边部最大损伤值随着压下率的增加而增加,随着轧辊半径的增加而降低,在其他参数条件不变的情况下,300℃-400℃的轧制温度可以有效降低裂纹发生的概率。

关键词： AZ31镁合金轧制工艺参数数值模拟 GTN模型

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跨国公司的人权义务及其规制

跨国公司的人权义务及其规制

作者：张心怡外交学院

学位级别：硕士

作为联合国人权理事会第26/9号决议目标的阶段性成果,工商业与人权工作组拟定的《零草案》为日后可能形成的有法律拘束力的国际文书提供了一个谈判和磋商的起点。该草案共用15个条款就跨国公司及其他工商企业与人权有关的问题予以了详... 详细信息

作为联合国人权理事会第26/9号决议目标的阶段性成果,工商业与人权工作组拟定的《零草案》为日后可能形成的有法律拘束力的国际文书提供了一个谈判和磋商的起点。该草案共用15个条款就跨国公司及其他工商企业与人权有关的问题予以了详尽的规定。在当今国际社会,跨国公司在某些特定的领域下被赋予了有限的法律资格。尤其是,跨国公司在日常经营活动中切实影响着几乎一切作为人权的国际公认权利,因此国际人权文书大多认可,跨国公司负有尊重、保护甚至促进国际人权的义务,但此种义务被证明是自愿而不具有强制力的。在目前的法律环境下,对跨国公司侵犯人权的行为进行规制的路径主要有三种:其一是依靠投资东道国或跨国公司母国的国内法进行规制;其二是依靠国际法直接规制跨国公司的行为,或通过约束跨国公司的母国而间接对跨国公司予以规制;其三是依靠虽不具有法律拘束力但往往更具效率的社会约束机制对跨国公司的行为予以规范。上述三种规制路径因各自都存在一定的缺陷,在具体独立实施的过程中往往收效甚微。因此对跨国公司侵犯人权的行为进行有效的规制需要多路径并行,互为补充,互相配合发挥作用。

关键词：跨国公司工商业与人权规制《零草案》

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税务组织绩效管理理论与实践

2004年

作者：戚鲁

本书反映了南京地税在绩效管理方面的探索、实践和认识的过程，集中讨论了现代绩效管理在税务组织的应用，把握“理论——实践——效果”的主线。

ISBN: (纸本)7801177533

关键词：税务部门组织管理学研究中国

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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颜料粒子的改性及聚合法墨粉的制备研究

颜料粒子的改性及聚合法墨粉的制备研究

作者：赵心怡南京理工大学

学位级别：硕士

为了克服熔融粉碎法制备墨粉的不足，本文采用悬浮聚合法和分散聚合法制备墨粉，使用激光粒度测试仪、扫描电镜和热分析技术表征所制得产品的粒径分布、形貌特征以及玻璃化转变温度;在聚合法制备墨粉的基础上，采用硅烷偶联剂与钛酸酯... 详细信息

为了克服熔融粉碎法制备墨粉的不足，本文采用悬浮聚合法和分散聚合法制备墨粉，使用激光粒度测试仪、扫描电镜和热分析技术表征所制得产品的粒径分布、形貌特征以及玻璃化转变温度;在聚合法制备墨粉的基础上，采用硅烷偶联剂与钛酸酯偶联剂对颜料粒子(炭黑)进行表面改性，研究改性工艺对改性效果的影响，并对改性效果进行了表征;同时为了使墨粉具有更好的荷电性能，本文制备了添加电荷调节剂(CCA)的复合墨粉，并对复合墨粉的粒径、粒形及玻璃化转变温度进行了测试与表征。研究结果表明：悬浮聚合法可制备出平均粒径小于10μm、粒径分布窄的球形墨粉;分散聚合法制得的墨粉比用悬浮聚合法制得的墨粉平均粒径更小，但墨粉的粒径分布较宽且存在树脂微球，这限制了分散聚合法制备墨粉的应用;偶联剂改性炭黑可提高炭黑在单体及树脂中的分散性及相容稳定性，本文采用悬浮聚合法，用钛酸酯偶联剂JSTC-401改性后的炭黑制得的墨粉表面比用未改性炭黑制得的墨粉表面聚集炭黑显著减少，表面更加光滑;添加CCA后，用悬浮聚合法可制得形态较为均一的球形复合墨粉，但墨粉产品的平均粒径比未添加CCA产品的平均粒径大，粒径分布较宽。用悬浮聚合法、分散聚合法及加入CCA用悬浮聚合法所制得的墨粉的玻璃化转变温度都低于粉碎法制备的商用墨粉的玻璃化转变温度，比商用墨粉具有节能优势。

关键词：墨粉悬浮聚合分散聚合炭黑偶联剂表面改性电荷调节剂