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基于方证相应原理——以不同配比的Poly(I:C)-LPS组合尝试建立桂枝汤汤证模型的研究

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基于方证相应原理——以不同配比的Poly(I:C)-LPS组合尝试建立桂...

作者：战晓玲中国中医科学院

学位级别：硕士

实验目的:方证相应,是现代中医药临床遣药用方和基础理论研究的基本思维和基本原则。中医证候模型是中医药基础研究的重要工具,也是连接基础研究和临床实践的重要纽带。目前,中医证候模型研究进展十分缓慢,在一定程度上可以说该方面的... 详细信息

实验目的:方证相应,是现代中医药临床遣药用方和基础理论研究的基本思维和基本原则。中医证候模型是中医药基础研究的重要工具,也是连接基础研究和临床实践的重要纽带。目前,中医证候模型研究进展十分缓慢,在一定程度上可以说该方面的不足是限制方剂、证候等基础研究进一步发展的桎梏和瓶颈之一。桂枝汤,被誉为“群方之冠、万方之祖”,主治太阳中风表虚证,是我们课题组近30年来致力研究的经方。基于方证相应原则和课题组前期探索,借鉴现代医学的内环境和微环境学说,吸收近年来免疫学发展成果,以病毒模拟物{聚肌胞[Polyinosinic polycytidylic Acid,Poly(I:C)]}-细菌模拟物[脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)]不同配比组合刺激大鼠肺巨噬细胞NR8383,以桂枝汤含药血清干预,观察其下游通路元件和效应分子——Toll样受体(Toll-Like Receptors,TLRs)和细胞因子的表达和分泌,旨在探索一种针对桂枝汤的体外细胞汤证模型,并为进一步建立桂枝汤汤证动物模型积累数据。将体外细胞汤证模型所得的Poly(I:C)-LPS配比,对SD大鼠进行体内实验验证,同时用桂枝汤、麻黄汤、桑菊饮、银翘散进行干预,利用肛温、脑和肺的系数、肺组织中的蛋白表达及其Toll样受体mRNA的表达等指标进行评价,旨在探索尝试建立桂枝汤汤证的动物模型,为进一步更好的揭示经方桂枝汤功效以及其对应证——太阳中风表虚证的现代科学内涵服务,同时也为其他汤证研究提供可资参考的方法和思路。实验内容1.桂枝汤含药血清对不同配比的Poly(I:C)-LPS组合刺激大鼠肺巨噬细胞(NR8383)的干预效应采用大鼠肺的巨噬细胞(NR8383)进行体外实验,通过CCK-8法(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测桂枝汤含药血清对NR8383细胞活性的影响,确定适宜的体外干预浓度。通过酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)分别测定 Poly(I:C)、LPS 对 NR8383 细胞刺激分泌肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1 β)的时效、量效关系,依此确定的适宜的刺激时间以及合适的浓度区间[为进行后面的体内实验,采用国产注射剂Poly(I:C)与美国InvivoGen公司、美国Sigma公司的Poly(I:C)进行比较]。通过 Elisa 法和实时荧光定量 PCR 法(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)分别测定 Poly(I:C)-LPS(50:1、40:1、30:1、20:1、10:1)五个比例组合刺激NR8383细胞的TNF-α、IL-1β的蛋白表达以及TLR-2、3、4、6 mRNA的表达,以及桂枝汤含药血清干预后的表达情况。通过主成分分析法、系统聚类法分析上述数据,得出刺激效果最好或者桂枝汤含药血清干预最好的 Poly(I:C)-LPS 比例。2.解表四方对不同配比Poly(I:C)-LPS组合的造模大鼠干预作用的研究采用SD大鼠作为体内实验对象,分别利用50:1、30:1、10:1三个配比组合(这三个比例组合也是体外实验刺激反应较优的组合,10:1是桂枝汤含药血清干预最好的组合,50:1是刺激效应最显著的组合,30:1的刺激效应和干预效应次于前两者)进行体内实验,同时进行桂枝汤、麻黄汤、桑菊饮、银翘散等四方的干预,通过对体温、肺和脑组织系数、肺组织中的IL-1 β、TNF-α蛋白表达的含量,Toll-3、4 mRNA的表达等指标进行评价,并通过主成分分析法进行分析,旨在尝试得到桂枝汤汤证模型的Poly(I:C)与LPS的造模比例(或区间),或者是麻黄汤汤证模型、桑菊饮汤证模型、银翘撒汤证模型的造模比例。实验结果1.通过CCK-8法确定桂枝汤含药血清的无毒剂量是9.4g · kg 1 · U-(即细胞总体积的20%)。2.Elisa法确定的造模时间为6h,三个公司的Poly(I:C)刺激浓度为50μg·mL-1以下,LPS刺激浓度为1μg·mL-1。3.采用 Poly(I:C)-LPS 浓度比为 50:1、40:1、30:1、20:1、10:1 刺激 NR8383细胞,通过主成分分析法和系统聚类法得出,50:1为刺激效应最为显著的浓度比,10:1为桂枝汤干预效应最好的浓度比。4.用Poly(I:C)与LPS比例组合为50:1、30:1、10:1,进行大鼠体内模型复制,采用肛温、肺和脑指数、肺上清中IL-1 β和TNF-α蛋白表达情况、肺组织中TLR-3、4 mRNA表达等七个指标评价,利用主成分分析法对结果进行综合分析,结果表明银翘散对于50:1的组合有较好的干预性,麻黄汤对30:1的组合干预性显著,桂枝汤对10:1的

关键词： Poly(I:C) LPS 桂枝汤汤证模型 10:1 IL-1β TNF-α TLR-3 TLR-4

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表证模型研究概况与展望

中国实验方剂学杂志 2018年第19期24卷 213-220页

作者：战晓玲李沧海姜廷良中国中医科学院中药研究所

针对目前中医证候模型研究的整体不足和进展缓慢,立足本课题组对表证方证的几十年研究经验基础上,结合现代科学技术最新进展,综合梳理表证模型相关研究,拟在新型表证模型的建立方面寻找新的切入点。通过检索知网、Pubmed等数据库查阅有... 详细信息

针对目前中医证候模型研究的整体不足和进展缓慢,立足本课题组对表证方证的几十年研究经验基础上,结合现代科学技术最新进展,综合梳理表证模型相关研究,拟在新型表证模型的建立方面寻找新的切入点。通过检索知网、Pubmed等数据库查阅有关表证模型（或上呼吸道感染）的相关文献,按照造模方法进行了较为详细的阐述、分析和总结,展现进展、不足和可能突破口;近年来表证模型在造模方法、方剂反证、方剂研究、生化表征等方面均取得了长足发展,但也存在与临床联系不紧密、方证对应不理想、成模指标不一致、表证评定标准模糊等诸多不足;提出表证病理模型研究应突破原有的思想羁绊,大胆借鉴现代生命科学进展,努力建立多层次的、更加精细的表证病理模型体系。紧密结合临床加强模型研究,充分吸纳生命科学以及其他学科进展,建立多层次更精细的表证病理模型研究系统是目前亟待解决的核心命题,这关乎表证理论、解表方药及其临床实践的深入研究,也是面对日益严重的疫情下人民健康的迫切需求,同时也可为其他证候模型的研究提供借鉴和参考。

关键词：表证证候模型细胞因子造模方法

桂枝汤含药血清对不同比例Poly(I∶C)-LPS组合刺激肺巨噬细胞的干预效应

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中国实验方剂学杂志 2018年第14期24卷 84-90页

作者：战晓玲唐恬徐文慧马冀李兰芳李沧海姜廷良中国中医科学院中药研究所

目的：基于方证相应原理,旨在探索建立一种模拟病毒-细菌共感染的桂枝汤汤证体外细胞模型,为进一步桂枝汤汤证动物模型的建立积累数据。方法：研究桂枝汤含药血清对不同浓度比例的聚肌胞苷酸[polyinosinic polycytidylic acid,Poly（I∶... 详细信息

目的：基于方证相应原理,旨在探索建立一种模拟病毒-细菌共感染的桂枝汤汤证体外细胞模型,为进一步桂枝汤汤证动物模型的建立积累数据。方法：研究桂枝汤含药血清对不同浓度比例的聚肌胞苷酸[polyinosinic polycytidylic acid,Poly（I∶C）]与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）混合物刺激的大鼠肺的巨噬细胞（NR8383）Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）及其下游信号转导通路的影响。采用大鼠肺巨噬细胞株NR8383,分别用25,50,100 mg·L^-1的Poly（I∶C）与1,5,10 mg·L^-1LPS刺激NR8383细胞,前者于3,6,12,24 h后取细胞上清,后者于6,12,24,48 h后取细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定方法（ELISA）测定炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）的含量,通过上述2个指标选择Poly（I∶C）与LPS合适的浓度区间与反应的最适时间。利用其Poly与LPS配比为10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1来探讨其对NR8383细胞的TNF-α,IL-1β的含量和TLR-2,3,4,6 mRNA表达的影响,以及桂枝汤含药血清的干预作用,通过上述TNF-α,IL-1β,TLR-2,TLR-3,TLR-4,TLR-6 6个指标对实验结果进行综合评价,筛选刺激效应和桂枝汤干预效应最为明显的Poly（I∶C）-LPS比例。结果：选择刺激时间为6 h,Poly（I∶C）在50 mg·L^-1以下,LPS在1 mg·L^-1时作为合适的刺激浓度。在所用Poly（I∶C）-LPS（10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1）中,与正常组比较,Poly（I∶C）-LPS 50∶1组合刺激效应显著（P〈0.01）,与相对应的模型组比较,桂枝汤含药血清对Poly（I∶C）-LPS 10∶1组合干预效果最为显著（P〈0.01）。结论：Poly（I∶C）-LPS 10∶1刺激NR8383巨噬细胞株NR8383可以作为一种桂枝汤汤证细胞模型,用于桂枝汤及其类方的基础研究。

关键词：聚肌胞苷酸内毒素桂枝汤 Toll样受体(TLRs) 白细胞介素-1β(IL-1β) 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)

桂枝汤挥发油的成分归属分析及其对认知障碍小鼠学习记忆的影响

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国际中医中药杂志 2017年第5期39卷 435-441页

作者：冉庆森战晓玲李晓东谷丽维李兰芳郭淑英李沧海姜廷良中国中医科学院中药研究所北京100700 北京唐氏中药研究中心北京100700

目的探讨桂枝汤挥发油成分归属及其对认知障碍模型小鼠学习记忆的影响.方法采用水蒸气蒸馏法分别提取生姜、桂枝及桂枝汤挥发油,采用气相色谱-质谱联用法分析挥发油成分.小鼠按体重分层随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组、桂枝汤挥... 详细信息

目的探讨桂枝汤挥发油成分归属及其对认知障碍模型小鼠学习记忆的影响.方法采用水蒸气蒸馏法分别提取生姜、桂枝及桂枝汤挥发油,采用气相色谱-质谱联用法分析挥发油成分.小鼠按体重分层随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组、桂枝汤挥发油低剂量组、桂枝汤挥发油高剂量组.多奈哌齐组灌胃2 mg/kg多奈哌齐溶液,桂枝汤挥发油低、高剂量组灌胃桂枝汤挥发油溶液5、20 mg/kg,药品均以0.5%的羧甲基纤维素钠悬浮至所需浓度,正常组与模型组灌胃等体积0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,1次/d,连续给药15 d.除正常组外,其余各组小鼠于给药第8天腹腔注射东莨菪碱1 mg/kg制备小鼠记忆障碍模型.采用Morris水迷宫、跳台法检测学习记忆行为学,ELISA法测定小鼠血清中胆碱酯酶（cholinesterase,chE）、乙酰胆碱酯酶（acetyl cholinesterase,AchE）、丁酰胆碱酯酶（butyryl cholinesterase,BchE）、乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）含量.结果从桂枝汤挥发油中共鉴定38个化合物,来源于桂枝的9个成分加权占比约44%,来源于生姜的13个成分约占全方挥发油的18%.与模型组比较,桂枝汤挥发油低剂量组在目标象限游泳距离比例[（26.74±16.42）%比（9.42±8.50）%]、目标象限滞留时间的比例[（43.51±25.12）%比（14.50±12.23）%]增加（P〈0.05）,穿台次数[（1.63±1.19）比（0.25±0.46）]明显增加（P〈0.05）,跳台试验中犯错误次数[（0.57±0.98）比（4.43±2.40）]降低（P〈0.05）;桂枝汤挥发油低、高剂量组小鼠血清chE[（140.90±3.27）U/ml、（144.79±6.71）U/ml比（134.49±3.36）U/ml]、AchE[（3.30±1.31）U/ml、（3.94±0.78）U/ml比（8.52±3.39）U/ml]、BchE[（3.22±0.45）U/ml、（3.66±0.53）U/ml比（7.99±0.79）U/ml]水平降低（P〈0.05）,Ach[（4.10±0.38）ng/ml、（3.03±0.25）ng/ml比（1.72±0.50）ng/ml]水平升高（P〈0.05）.结论桂枝汤挥发油主要来源于桂枝和生姜,该部位可通过拟胆碱效应改善东莨菪碱所致小鼠学习认知障碍.

关键词：桂枝汤挥发油类气相色谱-质谱法记忆障碍乙酰胆碱

TA/SiO_(2)疏水涂层及其对混凝土抗侵蚀性能的影响

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建筑材料学报 2024年第1期27卷 30-36页

作者：来晓鹏王元战王禹迟孙煕平天津大学水利工程仿真与安全国家重点实验室天津300072 交通运输部天津水运工程科学研究所天津300456

基于贻贝仿生原理,成功制备了单宁酸(TA)/SiO_(2)疏水涂层,通过设置22组工艺组合,综合水接触角、电通量和表面微观结构,得到了涂层的最优制备工艺.针对最优制备工艺涂层,通过自然扩散试验研究了其对混凝土抗离子渗透性能的影响,并采用... 详细信息

基于贻贝仿生原理,成功制备了单宁酸(TA)/SiO_(2)疏水涂层,通过设置22组工艺组合,综合水接触角、电通量和表面微观结构,得到了涂层的最优制备工艺.针对最优制备工艺涂层,通过自然扩散试验研究了其对混凝土抗离子渗透性能的影响,并采用磨耗和酸碱腐蚀试验研究了涂层稳定性.结果表明,TA/SiO_(2)疏水涂层表面具有丰富的微纳米结构,水接触角达148.1°,至少能够减少75.31%的离子渗透进入混凝土,且稳定性优良.

关键词：疏水涂层混凝土离子渗透贻贝仿生

多主体博弈下铁路保价运输与货运保险协同定价策略

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铁道科学与工程学报 2024年

作者：冯芬玲战映辰刘承光邹朝辉中南大学交通运输工程学院中国国家铁路集团有限公司宣传部

为提升铁路货运风险保障产品市场化水平，考虑铁路保价运输与铁路货运保险的协同，研究铁路运输企业货运风险保障产品的费率优化问题。根据铁路运输企业、商业保险企业、客户三类市场主体间的博弈关系，建立线性环形市场。构建两阶段双... 详细信息

为提升铁路货运风险保障产品市场化水平，考虑铁路保价运输与铁路货运保险的协同，研究铁路运输企业货运风险保障产品的费率优化问题。根据铁路运输企业、商业保险企业、客户三类市场主体间的博弈关系，建立线性环形市场。构建两阶段双层的多主体博弈定价模型：上层两阶段确定企业最优产品定价，下层确定客户最优购买策略。基于迭代算法和混合人工蜂群算法求解模型，得到企业的最优产品定价。研究结果表明：当铁路保价运输与铁路货运保险协同发展时，铁路运输企业推出保价保险一体化产品是可行的，最优费率取值约为铁路保价运输和铁路货运保险费率之和的六、七成，且货物越易损，客户越倾向于购买保价保险一体化产品，其优势越显著。在此基础上，铁路运输企业市场化调整货运风险保障产品费率，铁路保价运输和铁路货运保险的最优费率均会低于原费率水平，货物越易损，费率下降幅度越小，其中，铁路保价运输对损失概率较高的货物品类定价能力更强，铁路货运保险对损失概率较低的货物品类定价能力更强。为应对市场变化，商业保险企业将采用降价、保障市场份额的行动策略以维持市场竞争力。研究结果为铁路运输企业根据定期调研的市场情况灵活调整其提供的货运风险保障产品费率提供参考。

关键词：铁路货物运输铁路保价运输货物运输保险协同定价多主体博弈

电针结合膀胱功能训练治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的临床疗效:meta分析

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中国康复医学杂志 2024年第5期39卷 712-717页

作者：王琼陈小聪马迎歌刘黎礼铁晓玲西安市儿童医院康复科西安市710002

神经源性膀胱(neurogenic bladder,NB)是脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)最常见的并发症之一[1],可导致尿潴留、反复泌尿系感染,严重者甚至导致肾衰竭,严重威胁患者生命安全[2]。目前,国际上对SCI后NB的治疗主要以间歇清洁导尿、行为... 详细信息

神经源性膀胱(neurogenic bladder,NB)是脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)最常见的并发症之一[1],可导致尿潴留、反复泌尿系感染,严重者甚至导致肾衰竭,严重威胁患者生命安全[2]。目前,国际上对SCI后NB的治疗主要以间歇清洁导尿、行为疗法、药物治疗、盆底生物电反馈和手术治疗等。但因脊髓损伤机制的复杂性,疗效不佳。因此,寻求有效的治疗方法,是目前临床研究的热点和难点[3]。

关键词： meta分析神经源性膀胱膀胱功能训练行为疗法脊髓损伤肾衰竭临床疗效生物电反馈

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锑化物超晶格红外探测器研究进展与发展趋势

红外与激光工程 2024年第3期53卷 61-71页

作者：张杰黄敏党晓玲刘益新陈颖超陈建新装备发展部某中心北京100034 中国科学院上海技术物理研究所上海200083

锑化物超晶格红外探测器具有均匀性好、暗电流低和量子效率较高等优点,其探测波长灵活可调,可以覆盖短波至甚长波整个红外谱段,是实现高均匀大面阵、长波、甚长波及双色红外探测器的优选技术,得到了国内外相关研究机构的关注和重视,近... 详细信息

锑化物超晶格红外探测器具有均匀性好、暗电流低和量子效率较高等优点,其探测波长灵活可调,可以覆盖短波至甚长波整个红外谱段,是实现高均匀大面阵、长波、甚长波及双色红外探测器的优选技术,得到了国内外相关研究机构的关注和重视,近年来取得了突破性的进展。文中从锑化物超晶格的基本技术原理出发,梳理总结了超晶格红外探测器的发展历程和当前进展,结合超晶格技术特点的分析,初步探讨了超晶格红外焦平面后续发展趋势。

关键词：锑化物超晶格红外探测器焦平面

在地域史及全球史研究视野下重新定义“日本学”——兼谈日文研构建“国际日本研究”联盟的新尝试

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日本学研究

日本学研究 2024年第1期 41-58+365页

作者：刘建辉战晓梅国际日本文化研究中心

本文旨在介绍国际日本文化研究中心（日文研）创立36年来所走过的历程，在回顾和确认其创立的背景和理念的基础上，力图梳理日文研发展过程中研究倾向的变迁并探讨其原因。同时也将就日文研的学术活动与中国日本学研究发展的关系，以及... 详细信息

本文旨在介绍国际日本文化研究中心（日文研）创立36年来所走过的历程，在回顾和确认其创立的背景和理念的基础上，力图梳理日文研发展过程中研究倾向的变迁并探讨其原因。同时也将就日文研的学术活动与中国日本学研究发展的关系，以及正在进行中的“国际日本研究”联盟等新的学术尝试做一简要的说明。希望通过梳理日文研的日本研究及其对外交流的历程，反映出20世纪80年代在日本勃兴的日本学的发展状况及所面临的问题，为构建具有中国特色的日本学研究提供一些有益的借鉴。

关键词：国际日本研究日本学国际日本文化研究中心国际日本研究联盟