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川芎嗪对长春新碱诱导的骨髓基质细胞生长抑制和凋亡的干预

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中华中医药杂志 2010年第12期25卷 2176-2179页

作者：文珠胡国柱何丹俞火戎吉平江西省医学科学研究所血液学研究室南昌330006 江西省人民医院临床医学研究所干细胞研究室南昌330006

目的:探讨川芎嗪(ligustrazine hydrochloride,LH)对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长的促进及干预长春新碱(VCR)诱导的凋亡作用。方法:①LH(5、10、20、40μg/mL)及VCR(2.5、5、10、15μg/mL)分别与BMSCs培养14d,应用MTT法测定细胞增殖;②不同浓度LH与BMSCs培养1h后再加入5μg/mL VCR继续培养14d,测定细胞增殖;③BMSCs培养14d后再加入不同浓度VCR继续培养24h,应用Hoechst33342荧光染色及Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)方法测定细胞凋亡。④不同浓度LH与BMSCs培养14d后再加入5μg/mL VCR继续培养24h测定细胞凋亡。结果:①随LH的浓度增加BMSCs增殖率升高,其中20μg/mL和40μg/mL两组OD值与正常对照组比较差异显著(P<0.05)。而VCR组随浓度增加BMSCs增殖率下降,10μg/mL和15μg/mL两组OD值显著低于正常对照组(P<0.05)。②BMSsC与LH孵育1h后再加入5μg/mL VCR,培养14d后10μg/mL、20μg/mL、40μg/mLLH三组OD值与单用5μg/mLVCR组比较差异均有显著性(P<0.05)。③BMSCs培养14d再加VCR继续培养24h后FACS测定5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL VCR三组凋亡率与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。④LH与BMSCs培养14d再加入5μg/mL VCR继续培养24h后,FACS测定20μg/mL和40μg/mL LH两组凋亡率显著低于凋亡诱导组(P<0.05);Hoechst33342检测,则10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL LH3组凋亡率依次为(30.67±8.02)%、(20.33±4.16)%、(19.0±4.58)%,显著低于VCR5μg/mL凋亡诱导组(47.0±6.00)%(P<0.05)。结论:川芎嗪可促进BMSCs增殖,干预长春新碱对BMSCs生长的抑制;川芎嗪能干预长春新碱诱导的BMSCs凋亡。

关键词：川芎嗪长春新碱骨髓基质细胞增殖凋亡

当归多糖促进慢性粒细胞白血病细胞性树突状细胞的诱导生成

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中草药 2004年第5期35卷 531-535页

作者：陈国安肖希斌袁利亚戎吉平江西医学院第一附属医院血液科江西南昌330006 江西省医学科学研究所血液研究室江西南昌330006

目的　探讨当归多糖 (APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞 (DCs)的影响。方法　取慢性粒细胞白血病 (CML )患者骨髓单个核细胞 ,分别予粒 -巨噬集落刺激因子 (GM- CSF) /白介素 - 4 (IL - 4 )培养或GM- CSF/ IL- 4联合各浓度... 详细信息

目的　探讨当归多糖 (APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞 (DCs)的影响。方法　取慢性粒细胞白血病 (CML )患者骨髓单个核细胞 ,分别予粒 -巨噬集落刺激因子 (GM- CSF) /白介素 - 4 (IL - 4 )培养或GM- CSF/ IL- 4联合各浓度 APS(5 0 ,10 0 ,2 0 0 mg/ L)培养 ,普通光镜和电镜观察细胞形态 ,台盼蓝拒染法检测细胞成活率 ,流式细胞仪检测 DCs的免疫表型 (CD80 ,CD86 ,CD83) ,自体或异体混合淋巴细胞反应检测 DCs刺激 T淋巴细胞的增殖能力。结果　 GM- GSF/ IL - 4或 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱导培养的慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞均表现出典型的树突状形态而且表达高水平的免疫表型。GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的细胞成活率和增殖能力显著提高 ,CD83,CD80 ,CD86 表达显著升高 ,APS组慢性粒细胞白血病细胞诱导的树突状细胞 (CML - DCs)刺激 T淋巴细胞的增殖能力更强。结论　 GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的 CD83、CD80 、CD86 表达率明显高于 GM-CSF/ IL - 4组。 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱生的 CML - DCs刺激 T淋巴细胞增殖能力强于 GM- CSF/ IL - 4组。 APS能促进 IL- 4和 GM- CSF对 CML- DCs的诱生与成熟。

关键词：当归多糖慢性粒细胞白血病树突状细胞 T淋巴细胞

黄精多糖干预长春新碱诱导的骨髓基质细胞生长抑制及凋亡

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中药药理与临床 2012年第6期28卷 79-82页

作者：胡微煦文珠戎吉平俞火胡国柱复旦大学附属肿瘤医院上海200032 江西省医学科学研究所南昌330006 江西省人民医院临床医学研究所南昌330006

目的:探讨黄精多糖(PSP,polygonatum sibiricum polysaccharides)干预长春新碱(VCR)诱导的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长抑制及凋亡的作用。方法:①PSP浓度(500、1000、2000、4000mg/L)及VCR浓度(2.5、5、10、15mg/L)分别与骨髓细胞共同培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。②PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞预培养2h后再分别加入终浓度为5mg/L的VCR继续培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。③BMSCs培养14d后再加入VCR(2.5、5、10、15mg/L)继续培养24h,经Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。④PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与BMSCs培养14d后再加入5mg/LVCR继续培养24h,经Hoechst 33342荧光染色及Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。结果:①PSP(1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞培养14d后OD值(3.80、4.48、4.05)均高于正常对照组(3.70),其中PSP 2000mg/L组OD值差异具有显著性(P<0.05);VCR(5、10、15mg/L)组OD值(2.36、1.83、1.67)均显著低于正常对照组(3.70)。②骨髓细胞与PSP孵育2h后再加入5mg/L VCR继续培养14d,PSP 2000mg/L+VCR 5mg/L组OD值(3.51)与VCR 5mg/L组OD值(2.62)比较差异有显著性。③BMSCs培养14d再加VCR继续培养24h后FACS测定VCR(5mg/L、10mg/L、15mg/L)组凋亡率分别为31.12%、39.37%、64.10%,与正常对照组(7.70%)比较差异有显著性。④PSP与BMSCs培养14d再加入5mg/L VCR继续培养24h后,FACS测定PSP(1000mg/L、2000mg/L和4000mg/L)组凋亡率依次为27.77%、24.33%和25.20%,与凋亡诱导组(35.93%)比较差异均有显著性;Hoechst 33342检测,PSP(2000mg/L、4000mg/L)组凋亡率为29.0%和29.67%,与凋亡诱导组(40.33%)比较差异均有显著性。结论:黄精多糖可促进BMSCs增殖,有效地阻止长春新碱对BMSCs生长的抑制及凋亡作用。

关键词：黄精多糖长春新碱骨髓基质细胞增殖凋亡

人参皂苷Rb1干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

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中药药理与临床 2011年第3期27卷 12-14页

作者：文珠胡炜华胡国柱何丹俞火戎吉平江西省医学科学研究所血液学研究室南昌大学医学院江西省人民医院临床医学研究所南昌330006

目的:探讨人参皂苷Rb1(GS Rb1)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(VCR)抑制小鼠BMSCs增殖的作用。方法:正常对照组,GS Rb1(1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml)诱导BMSCs增殖组,VCR(2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml)抑制BM-SCs增殖组,GS Rb1干预VCR抑制BMSCs增殖组,应用MTT法测定BMSCs增殖。结果:①与正常对照组比较,GS Rb1 1.0～10.0μg/ml随浓度升高其促进BMSCs增殖也增加,GS Rb1为10.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);VCR 2.5～15.0μg/ml随浓度的升高抑制BMSCs增殖也增强,VCR 5.0～15.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);GS Rb1 1.0～15μg/ml各组与VCR 5.0～15.0μg/ml各组比较,以及GS Rb1 10.0μg/ml组与VCR 2.5μg/ml组比较其BMSCs增殖显著增加(P均<0.05)。②GS Rb1 5.0μg/ml、10.0μg/ml1、5.0μg/ml分别与VCR 5.0μg/ml培养,其能显著干预VCR对BMSCs增殖的抑制(P均<0.05)。结论:长春新碱明显抑制骨髓基质细胞生长;人参皂苷Rb1可促进骨髓基质细胞生长且具有干预长春新碱对骨髓基质细胞增殖的抑制作用。

关键词：人参皂苷Rb1 长春新碱骨髓基质细胞

肝素对人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

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实用临床医学（江西） 2007年第3期8卷 5-7页

作者：胡微煦文珠俞火戎吉平南昌大学医学院 2003级南昌330006 江西省医学科学研究所血液研究室南昌330006

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖... 详细信息

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖的影响，DNA琼脂糖凝胶电泳检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：肝素各组的细胞数量与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05），肝素各组的OD值与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05）；肝素在5～200U／mL的浓度时能够抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡及DNA凋亡梯带的形成。结论：不同浓度肝素对K562细胞无毒，无刺激或抑制作用，但可抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。

关键词：肝素 K562 长春新碱细胞凋亡 DNA电泳

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耐受性树突状细胞体外培养的基本特征

中国组织工程研究与临床康复 2009年第31期13卷 6075-6079页

作者：钟志宏陈国安袁利亚鄢俊戎吉平俞火赣南医学院教务处江西省赣州市341000 南昌大学第一附属医院血液科江西省南昌市330006 江西省医学科学研究所江西省南昌市330006 赣南医学院第一附属医院肿瘤科江西省赣州市341000

背景:树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用。目的:探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征。设计、时... 详细信息

背景:树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用。目的:探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征。设计、时间及地点:以细胞为观察对象,随机分组设计,于2006-09/2008-02在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。材料:8周龄的Balb/c纯系雄性小鼠,体质量20～25g,用于分离和制备骨髓单个核细胞。方法:将小鼠骨髓单个核细胞分为5组在不同的培养体系中进行体外诱导培养:空白对照组(不加任何因子)、树突状细胞组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4)、血管活性肠肽组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽)、地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+地塞米松)、血管活性肠肽+地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽+地塞米松)。主要观察指标:光镜下动态观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞CD80、CD86、CD40、CD11c表达,四甲基偶氮唑盐法检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的活性,特异性夹心酶联免疫分析测定树突状细胞上清液中白细胞介素10、白细胞介素12的水平。结果:①利用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4、血管活性肠肽、地塞米松、脂多糖等因子体外培养能生成具有典型树枝状突起的树突状细胞。②树突状细胞组、血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD11c的表达高于空白对照组(P<0.05)。血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD40、CD80和CD86表达,淋巴细胞增殖活性及培养上清液白细胞介素12水平均低于树突状细胞组(P<0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40μg/L、地塞米松组以10μg/L减低明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40μg/L、地塞米松为10μg/L条件下为最低,差异具有显著性意义(P<0.05)。③血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组细胞培养上清液中白细胞介素10水平均高于树突状细胞组(P<0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40μg/L,地塞米松组以10μg/L升高明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40μg/L、地塞米松为10μg/L条件下为最高,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:①小鼠骨髓单个核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽或/和地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成致耐受性树突状细胞。②与常规诱导培养树突状细胞方法比较,耐受性树突状细胞具有CD40、CD80、CD86表达低,刺激淋巴细胞增殖弱的特点;耐受性树突状细胞培养体系上清液白细胞介素10水平高而白细胞介素12水平低。③粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽+地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成耐受性树突状细胞效果较佳,其中以血管活性肠肽40μg/L、地塞米松10μg/L的培养条件为最好。

关键词：树突状细胞免疫耐受小鼠细胞因子

人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡

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中药药理与临床 2014年第2期30卷 40-43页

作者：胡微煦文珠戎吉平俞火胡国柱何丹复旦大学附属中山医院放疗科上海200032 江西省医学科学研究院血液学研究室江西省人民医院临床医学研究所干细胞研究室南昌330006

目的：探讨人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的小鼠骨髓基质细胞凋亡的作用。方法：研究分为正常对照组、长春新碱组、长春新碱凋亡诱导组,不同浓度人参皂苷Rb1（1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml）抗长春新碱（5.0μg/ml）对骨髓基质细胞的生长... 详细信息

目的：探讨人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的小鼠骨髓基质细胞凋亡的作用。方法：研究分为正常对照组、长春新碱组、长春新碱凋亡诱导组,不同浓度人参皂苷Rb1（1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml）抗长春新碱（5.0μg/ml）对骨髓基质细胞的生长抑制和凋亡组;采用MTT法测定骨髓基质细胞增殖,采用Annexin V/PI双染流式细胞术及Hoechst 33342荧光染色法测定细胞凋亡。结果：人参皂苷Rb1在5.0~15.0μg/ml浓度范围内显著地降低了长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制;人参皂苷Rb1在5.0~15.0μg/ml浓度范围内显著地阻断长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制。人参皂苷Rb1抗长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡具有浓度依赖性。结论：人参皂苷Rb1能够抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡。

关键词：人参皂苷Rb1 长春新碱骨髓基质细胞凋亡

JAK2V617F基因突变在骨髓增生性疾病中的发生率及其临床意义

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浙江大学学报（医学版） 2010年第2期39卷 202-206,220页

作者：袁利亚李红陈国安纪德香高琳琳戎吉平俞火江西省医学科学研究所血液研究室江西南昌330006 南昌大学第一附属医院血液科江西南昌330006

目的:探讨JAK2V617F基因突变在骨髓增生性疾病(MPD)中的发生率及其与血液学变化的相关性。方法:68例MPD患者骨髓及外周血细胞抽提DNA,应用等位基因特异性PCR技术,检测JAK2V617F基因突变,对突变基因进行序列分析,结合临床资料以及外周血... 详细信息

目的:探讨JAK2V617F基因突变在骨髓增生性疾病(MPD)中的发生率及其与血液学变化的相关性。方法:68例MPD患者骨髓及外周血细胞抽提DNA,应用等位基因特异性PCR技术,检测JAK2V617F基因突变,对突变基因进行序列分析,结合临床资料以及外周血细胞计数作进一步分析。结果:68例MPD患者中JAK2V617F突变的阳性率为65.28%,其中真性红细胞增多症(PV)患者阳性率为77.77%(28?36例),原发性血小板增多症(ET)患者阳性率为56.52%(13?23例),慢性骨髓纤维化(IMF)患者阳性率为44.44%(4?9例)。各组患者骨髓及外周血JAK2V617F基因突变阳性率大致相同。PV突变阳性患者的白细胞计数及血红蛋白较突变阴性患者高,差异具有统计学意义(P<0.05);ET突变阳性患者的白细胞计数较突变阴性患者的高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:JAK2V617F基因突变有助于BCR/ABL阴性的MPD的诊断。JAK2V617F突变对血液学特征有一定影响。

关键词：骨髓增殖性疾病红细胞增多症,真性骨髓纤维化血小板增多突变基因聚合酶链反应 JAK2V617F DNA突变检测

骨髓基质培养上清作用下脐血造血细胞体外生长与表面标志的关系

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江西医学院学报 2004年第5期44卷 9-12页

作者：文珠石庆之李洁戎吉平俞火江西省医学科学研究所血液研究室江西南昌330006 江西医学院第二附属医院血液科江西南昌330006

目的　探讨骨髓基质细胞培养上清 (SN)协细胞因子对人脐血造血细胞体外生长的影响。方法　使用rIL 3,rI 1β ,rIL 6 ,和SCF等细胞因子或SN或者两者联用长期培养人脐血造血细胞 ,进行细胞增殖和表面标志测定。结果　培养 7d细胞已开始增... 详细信息

目的　探讨骨髓基质细胞培养上清 (SN)协细胞因子对人脐血造血细胞体外生长的影响。方法　使用rIL 3,rI 1β ,rIL 6 ,和SCF等细胞因子或SN或者两者联用长期培养人脐血造血细胞 ,进行细胞增殖和表面标志测定。结果　培养 7d细胞已开始增殖 ,14d达高峰 ,细胞总数在细胞因子组 (1)增加了 134.5倍和SN组 (3)增加 81.5倍 ,两者联用 (2 )增加了 171.3倍 ,2 1d开始下降 ,(3)组下降最明显 ,35d时细胞总数为培养前的 (3)组 2 6 .6 5倍 ,(1)组 5 4 .15倍 ,(2 )仍组有 92 .2 5倍。CD34+ 细胞第 7天已升高 ,14d达高峰 ,(1)、(3)组和 (2 )组分别比培养前增加了 6 8.4 3%、6 9.77%和 82 .4 7% ,2 1d开始减少 ,分别比培养前增加 5 6 .16 %、12 .33%和 71.72 % ;CD33+ 细胞 7天时均显著增加 ,14d达高峰 ,分别比培养前增加了 80 .6 7%、82 .14 %和 6 9.6 9% ,2 1d时维持在 14d水平 ;CD38+细胞 7d时均有显著增加 ,分别比培养前增加了 6 6 .6 5 %、70 .4 2 %和 73.8% ,14～ 2 1d均在该水平维持 ,三组间无显著性差异。结论　骨髓基质细胞培养上清可促进脐血造血细胞的增殖 ,但比细胞因子作用弱 ,两者联用时作用明显强于两者分别使用 ,提示骨髓基质细胞还可产生其它物质刺激造血细胞增殖。

关键词：骨髓基质细胞上清脐血造血细胞体外扩增表面标志