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lncRNA ENSRNOT00000093006.1调控大鼠肛门直肠畸形胚胎发育过程中细胞增殖、细胞凋亡及作用机制的初步研究

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lncRNA ENSRNOT00000093006.1调控大鼠肛门直肠畸形胚胎发育过程...

作者：戈舞中国医科大学

学位级别：硕士

目的:肛门直肠畸形（Anorectal malformations,ARM）是儿外科多见的先天畸形,发病几率在1/5000-1/1500,手术可以治疗大部分与ARM相关的疾病,但术后长期并发症影响患儿的生长发育及生活质量,因此探究ARM发病机制十分重要。目前的研究主... 详细信息

目的:肛门直肠畸形（Anorectal malformations,ARM）是儿外科多见的先天畸形,发病几率在1/5000-1/1500,手术可以治疗大部分与ARM相关的疾病,但术后长期并发症影响患儿的生长发育及生活质量,因此探究ARM发病机制十分重要。目前的研究主要注重在基因表达的水平,需要更加深入研究基因对ARM的具体调控机制。因此前期研究将乙烯硫脲（Ethylenethiourea,ETU）诱导先天性肛门直肠畸形大鼠胚胎模型的末端后肠组织进行了高通量测序,从结果中筛选出差异表达的lncRNA ENSRNOT00000093006.1,探究其在正常组和畸形组的表达改变,并且改变表达（过表达/干扰）后,研究该lncRNA ENSRNOT00000093006.1在大鼠小肠隐窝上皮细胞中的功能变化,进而研究它对疾病发生发展的影响。研究方法:①造模（动物模型）和取材。Wistar大鼠共30只,雌雄大鼠以4:1比例晚上合笼,第二天早上进行阴道涂片,看到精子或阴道栓时定义为妊娠0天（GDO,gestational day 0）。随机把孕鼠分成ARM组和正常组,在GD10时灌胃给药,ARM组给予ETU（生理盐水溶解,125mg/kg）,正常组给予相同量生理盐水。GD16、GD17、GD19时取出胎鼠,ARM组胎鼠存在肛门闭锁、短尾或无尾畸形,正常组胎鼠尾部及肛门开口正常。GD16、GD17通过显微镜观察,GD19可在肉眼下观察胎鼠骶尾部形态,无菌取出胎鼠的后肠组织,并统计致畸率。②用qRT-PCR技术检测ARM组和正常组胎鼠后肠组织中的lncRNA ENSRNOT00000093006.1表达水平差异,通过核质分离,qRT-PCR验证lncRNA ENSRNOT00000093006.1在核内外的表达水平差异进行初步定位。③采用lncRNA ENSRNOT00000093006.1的特异性干扰序列siRNA及过表达质粒下调或上调IEC-6细胞中其表达,通过CCK-8（Cell Counting Kit-8）测定细胞增殖水平,流式细胞技术检测细胞凋亡水平。④Western blot检测干扰及过表达IEC-6细胞中的lncRNA ENSRNOT00000093006.1后提取的细胞总蛋白中Wnt5a蛋白的表达水平变化。⑤统计学分析,qRT-PCR结果用2-△△CT表示相对表达量,Western blot条带用ImageJ软件进行半量分析,实验数据用Prism 8.0进行分析,每个实验都设置三个生物学重复,两样本比较采取独立样本T检验,P＜0.05时认为结果差异具有统计学的意义。结果:①ARM组的胎鼠对比于正常组的胎鼠,在GD16、GD17、GD19时lncRNA ENSRNOT00000093006.1表达下调,其中GD16、GD19时下调显著,而且差异具有统计学意义（P＜0.01）;②lncRNA ENSRNOT00000093006.1 在IEC-6细胞浆及细胞核中表达一致,差异无统计学意义（P＞0.05）;③干扰lncRNA ENSRNOT00000093006.1表达后抑制细胞增殖,促进细胞凋亡（P＜0.01）,过表达lncRNA ENSRNOT00000093006.1表达后促进细胞增殖,抑制细胞凋亡（P＜0.01）;④干扰lncRNA ENSRNOT00000093006.1 表达后,Wnt5a蛋白表达下降（P＜0.01）,过表达lncRNA ENSRNOT00000093006.1 表达后,Wnt5a蛋白表达增加（P＜0.01）。结论:综上所述,本研究通过动物实验验证lncRNA ENSRNOT00000093006.1在大鼠肛门直肠组织中ARM组较正常组表达下调,细胞实验验证干扰IEC-6细胞中lncRNA ENSRNOT00000093006.1的表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制Wnt5a的表达来参与ARM的发生发展。

关键词：肛门直肠畸形长链非编码RNA 细胞增殖细胞凋亡 Wnt5a

先天性肺气道畸形中SOX10及COL2A1的差异表达分析

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中华小儿外科杂志 2021年第4期42卷 294-298页

作者：刘丹曹正浓戈舞贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的通过对SOX10及COL2A1在先天性肺气道畸形(congenital pulmonary airway malformation,CPAM)病变组织及正常组织中的表达分析,探讨SOX10及COL2A1在CPAM的发育过程中的作用。方法2018年11月至2020年11月,中国医科大学附属盛京医院收治... 详细信息

目的通过对SOX10及COL2A1在先天性肺气道畸形(congenital pulmonary airway malformation,CPAM)病变组织及正常组织中的表达分析,探讨SOX10及COL2A1在CPAM的发育过程中的作用。方法2018年11月至2020年11月,中国医科大学附属盛京医院收治的30例CPAM患儿中,男19例,女11例;年龄为(44.67±37.42)个月;术前诊断为CPAM 1型17例,2型13例。收集所有患儿术中的病变肺组织及病变周围正常肺组织,将术中收集的病变肺组织作为CPAM组,将病变周围正常肺组织作为对照组。将CPAM组和对照组分别进行免疫组织化学染色、蛋白质印迹法检测及实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测,使用t-test统计学方法对蛋白质印记法及qRT-PCR结果进行统计学分析。结果免疫组织化学染色的结果显示SOX10及COL2A1在CPAM组的表达相对于正常组织中,主要高表达于病变肺组织中的囊壁、血管壁、肺间质及异常支气管壁上,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法及qRT-PCR检测结果显示病变肺组织中SOX10及COL2A1的表达量明显高于在对照组中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论SOX10及COL2A1在CPAM组织中存在高表达,可能参与CPAM发育过程中的囊壁、血管及异常支气管的形成过程。

关键词： SOX10 先天性肺气道畸形 COL2A1

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频率选择表面天线罩研究现状与发展趋势

物理学报 2013年第19期62卷 1-10页

作者：鲁戈舞张剑杨洁颖张天翔寇元北京大学化学与分子工程学院北京100871 航天特种材料及工艺技术研究所北京100074

由于雷达天线系统自身工作的特点,他必须保证自身雷达波的正常接收和发射,常用的隐身措施无法简单地在雷达天线隐身中获得应用.采用频率选择表面(FSS)技术与天线罩技术相结合形成FSS天线罩,可以使天线罩获得频率选择的功能.即FSS天线罩... 详细信息

由于雷达天线系统自身工作的特点,他必须保证自身雷达波的正常接收和发射,常用的隐身措施无法简单地在雷达天线隐身中获得应用.采用频率选择表面(FSS)技术与天线罩技术相结合形成FSS天线罩,可以使天线罩获得频率选择的功能.即FSS天线罩对雷达的工作频段提供带通的传输特性,同时改变雷达工作频段以外的雷达散射截面(RCS)特性,可以实现带外隐身.本文分析了FSS天线罩制备的基本思路,综述了国内外FSS天线罩在结构设计、制造工艺等方面的研究状况,并从多频FSS天线罩、智能FSS天线罩、厚屏FSS天线罩、微型化FSS天线罩以及各技术的组合等方面对FSS天线罩的发展进行了展望.

关键词：频率选择表面(FSS) 多频FSS天线罩智能FSS天线罩厚屏FSS天线罩

长链非编码RNA在先天性肛门直肠畸形发生发展中的作用机制研究

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中华小儿外科杂志 2021年第2期42卷 145-151页

作者：曹正浓刘丹廉鹏戈舞贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)发生发展中的作用机制。方法采用随机数字表法将42只健康SPF级Wistar孕鼠分为ARM组和对照组,孕10 d时分别予1%乙烯硫脲(ethylene t... 详细信息

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)发生发展中的作用机制。方法采用随机数字表法将42只健康SPF级Wistar孕鼠分为ARM组和对照组,孕10 d时分别予1%乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)及生理盐水灌胃,并分别于孕16、17、19 d取7只大鼠剖宫取胎。分别对ARM组及对照组胎鼠在孕16、17、19 d三个时间点末端直肠组织lncRNA进行高通量测序分析,对具有显著差异的lncRNA进行靶基因预测,筛选出可能与ARM发生相关的lncRNA进行进一步验证与研究。采用实时荧光定量PCR检测ARM组及对照组胎鼠末段肛门直肠组织中的lncRNA AARB07048878.1表达水平差异,通过特异性干扰试剂及过表达质粒转染大鼠小肠隐窝上皮细胞系(IEC-6细胞系)细胞,采用CCK-8试剂法检测细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,采用Western blot检测细胞中Wnt5a蛋白的表达水平。实验数据两两比较采用独立样本t检验,多组间比较采用ANOVA。结果高通量测序及靶基因预测分析显示lncRNA AARB07048878.1可能与ARM发生相关。荧光定量PCR检测显示,相较对照组,ARM组胎鼠在孕16、17、19 d时lncRNA AARB07048878.1表达均下调,其中17 d时ARM组(0.48±0.13)与对照组(1.00±0.24)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA AARB07048878.1表达后,干扰组与对照组比较,IEC-6细胞增殖能力下降(加入试剂后2 h:1.90±0.01比2.04±0.04;4 h:3.18±0.03比3.27±0.02),细胞凋亡率上升[(18.34±4.20)%比(11.57±3.54)%],Wnt5a蛋白表达降低(0.77±0.12比1.00±0.17),且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01或<0.05)。过表达lncRNA AARB07048878.1后,过表达组与空白组比较,细胞增殖能力提高(加入试剂后2 h:1.96±0.04比1.80±0.03;4 h:3.44±0.06比3.16±0.03),细胞凋亡率下降[(8.48±2.89)%比(12.19±0.40)%],Wnt5a蛋白表达增加(1.29±0.07比1.00±0.12),且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA AARB07048878.1可能通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡影响先天性肛门直肠畸形发生发展,其作用可能通过抑制Wnt5a表达实现。

关键词：长链非编码RNA 先天性肛门直肠畸形机制

三氟化硼乙醚及其混合电解质中导电高分子的电化学合成

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自然科学进展 2006年第1期16卷 1-6页

作者：鲁戈舞陈凤恩吴旭峰石高全清华大学化学系北京100084

电化学沉积是制备导电高分子材料的有效途径．三氟化硼乙醚(BFEE)溶液用作电化学聚合芳香性化合物的电解质能有效地降低单体的氧化聚合电位,制得各种高性能导电高分子材料．文中综述了十多年来在BFEE及其混合电解质溶液体系中导电高分... 详细信息

电化学沉积是制备导电高分子材料的有效途径．三氟化硼乙醚(BFEE)溶液用作电化学聚合芳香性化合物的电解质能有效地降低单体的氧化聚合电位,制得各种高性能导电高分子材料．文中综述了十多年来在BFEE及其混合电解质溶液体系中导电高分子电化学合成的研究进展,并介绍了在该体系中制备的各种导电高分子的应用前景．

关键词：三氟化硼乙醚电化学聚合导电高分子芳香性化合物

TXNIP/NLRP3通过调控Wnt/β-catenin通路促进大鼠先天性肛门直肠畸形的发生

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中华小儿外科杂志 2023年第5期44卷 439-446页

作者：沈苗苗刘丹曹正浓戈舞廉鹏贾慧敏中国医科大学盛京医院小儿外科沈阳110004

目的研究胎鼠肛门直肠发育过程中硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)轴在泄殖腔发育中的作用。方法50只Wistar孕鼠被随机分为先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)组和正常组,每组各25只,孕10 d分别按125 mg/kg给予乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)及等量生理盐水灌胃,孕14 d、孕15 d和孕16 d剖宫取胎,显微镜下收集胎鼠的后肠组织。通过蛋白印迹法和免疫组织化学检测NLRP3炎性小体和TXNIP蛋白的表达量。进一步在IEC-6中转染si-NC/TXNIP,通过实时定量PCR和蛋白印迹法检测TXNIP在mRNA和蛋白水平的敲减效率,用蛋白印迹法、细胞免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测si-NC组和si-TXNIP组NLRP3炎性小体、β-catenin的蛋白变化及细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。采用2^(-△△CT)法分析目的基因mRNA相对表达量变化,观察各组细胞目的基因表达量的变化趋势,Western blot条带和免疫组织化学图片用ImageJ软件进行半定量分析,P<0.05表示有统计学意义。结果与正常组相比,TXNIP和NLRP3炎性小体的蛋白表达在ARM胎鼠的孕15 d和孕16 d时增加(P=0.0012、P=0.0081);与si-NC组相比,si-TXNIP组NLRP3活化受到抑制(P=0.0131),cleaved-caspase-1的蛋白表达降低(P=0.0386),细胞上清液中的IL-1β和IL-18含量减少(P=0.0035、P=0.0259),以及β-catenin的蛋白表达量降低(P=0.018)。结论TXNIP/NLRP3轴可能通过调控Wnt/β-catenin通路参与ARM的发生。

关键词：肛门直肠畸形硫氧还蛋白质类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1

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新型界面助剂的合成及性能研究

中国塑料 2002年第10期16卷 71-73页

作者：朱锦涛邓剑如鲁戈舞龙泽均盛亚俊湖南大学化学化工学院湖南长沙410082 湖南大学材料学院湖南长沙410082

设计合成了一类新型界面助剂 ,对该类助剂的性能进行了研究 ,估算出了界面助剂的性能参数。结果表明 ,该类界面助剂能提高Al(OH) 3/环氧树脂复合材料的冲击强度及耐热性能。

关键词：新型界面助剂合成性能研究聚合物复合材料冲击强度

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耐高温可溶性聚酰亚胺树脂及其复合材料

高等学校化学学报 2021年第6期42卷 2041-2048页

作者：王献伟柯红军袁航鲁戈舞李丽英孟祥胜宋书林王震中国科学院宁波材料技术与工程研究所高分子与复合材料实验室宁波315201 航天特种材料及工艺技术研究所北京100074

制备了2种耐高温可溶型聚酰亚胺树脂(PI-1, PI-2)及其复合材料,系统研究了树脂的工艺性,纯树脂固化物的热性能及其复合材料的界面形貌、介电性能和力学性能.研究结果表明,树脂低聚物在极性非质子溶剂中具有良好的溶解性,且熔体黏度较低... 详细信息

制备了2种耐高温可溶型聚酰亚胺树脂(PI-1, PI-2)及其复合材料,系统研究了树脂的工艺性,纯树脂固化物的热性能及其复合材料的界面形貌、介电性能和力学性能.研究结果表明,树脂低聚物在极性非质子溶剂中具有良好的溶解性,且熔体黏度较低,表明其具有优异的加工性能.两种树脂固化物在空气中的5%热失重温度均高于550℃, PI-1树脂的玻璃化转变温度(Tg)为430℃, PI-2树脂的Tg为380℃.石英纤维/PI-1和石英纤维/PI-2复合材料具有较低的介电常数和介电损耗.碳纤维/PI-1复合材料在420℃下的弯曲强度保持率可达62%,层间剪切强度保持率可达48%,具有较优异的高温力学性能.采用普通模压工艺制备了厚度高达45 mm的复合材料制件,进一步证明这2种树脂具有优异的工艺性.

关键词：聚酰亚胺树脂可溶性复合材料力学性能热性能

lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲诱导大鼠胚胎肛门直肠畸形中表达的初步研究

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中华小儿外科杂志 2021年第7期42卷 650-658页

作者：戈舞刘丹曹正浓廉鹏沈苗苗贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的验证lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)诱导的大鼠胚胎肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)中的差异表达;研究干扰及过表达lncRNA AC119762.8-201后对大鼠小肠隐窝上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC-6)的细胞增殖、迁移(上皮-间质转换)及Wnt5a蛋白表达水平的影响。方法选用体重250~300 g的健康成年未育的Wistar大鼠30只,其中雌鼠24只,雄鼠6只;雌雄大鼠按4∶1的比例于晚上合笼过夜,次日晨雌鼠做阴道涂片,在光镜下见到精子或阴道栓即确认已交配,当日为孕0 d(E0),选取明确受孕的18只雌鼠按随机数字表法随机分为大鼠ETU-ARM致畸组(9只)和大鼠生理盐水对照组(9只)。孕10 d(E10)时,将大鼠ETU-ARM致畸组一次性灌胃注入1%ETU(125 mg/kg),大鼠生理盐水对照组灌入等量生理盐水。在孕16 d(E16)、17 d(E17)和19 d(E19),对两组孕鼠剖宫并取出胎鼠。无菌操作下,从大鼠ETU-ARM致畸组中共取得162只胎鼠,根据肉眼及解剖显微镜下观察,若胎鼠出现无尾或短尾畸形,且肛门与外界不相通,直肠末端与尿道之间有瘘管连通,则纳入胎鼠ARM组(简称ARM组),ARM组共122只致畸胎鼠,致畸率为75.31%(122/162);从大鼠生理盐水对照组取得141只胎鼠,胎鼠尾部均正常,无肛门直肠畸形,肛门与外界相通且直肠末端与尿道之间无瘘管连通,为胎鼠正常组(简称正常组)。解剖显微镜下,在无菌条件下取出ARM组和正常组胎鼠的直肠末端组织置于-80℃冰箱保存备用。采用实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测lncRNA AC119762.8-201的表达;提取IEC-6细胞质和细胞核RNA,通过qRT-PCR检测lncRNA AC119762.8-201在细胞中的定位;采用siRNA序列或过表达质粒转染的方法下调或上调IEC-6细胞中lncRNA AC119762.8-201的表达,通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞上皮-间质转换及Wnt5a蛋白表达水平的影响。结果通过qRT-PCR验证lncRNA AC119762.8-201在ARM组及正常组胎鼠肛门直肠组织中的表达水平;结果显示在E16、E17及E19时,与正常组相比,lncRNA AC119762.8-201的表达水平分别为(0.47±0.02比1.01±0.08,0.80±0.16比1.00±0.02,0.41±0.06比1.02±0.09),lncRNA AC119762.8-201在ARM组中的表达水平下降,并且在E16和E19,ARM组及正常组之间的差异具有统计学意义(P0.05)。在转染干扰si-RNA(si-NC和si-lnc)和过表达质粒(over-NC质粒和over-lnc质粒)对lncRNA AC119762.8-201表达水平的影响方面,转染si-RNA的结果显示,与转染si-NC的细胞(1.01±0.18)相比,转染si-lnc后,lncRNA AC119762.8-201的表达水平明显下调为(0.43±0.13),差异具有统计学意义(P0.05);12 h为(3.40±0.01比3.26±0.01),差异具有统计学意义(P<0.01);18 h为(3.55±0.01比3.35±0.05),差异具有统计学意义(P<0.01);24 h为(4.02±0.01比4.04±0.02),差

关键词：大鼠肛门直肠畸形长链非编码RNA 细胞增殖细胞迁移