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玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞微丝分布及发育潜能的影响

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玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞微丝分布及发育潜能的影响

作者：慈倩倩山东大学

学位级别：硕士

随着辅助生殖技术的广泛开展,卵母细胞的冷冻保存技术越来越受到关注,玻璃化冷冻成为卵母细胞冷冻保存的主要技术之一。而经过冷冻复苏后如何获得更高的移植率和临床受精率成为许多生殖中心关注的焦点。玻璃化冷冻的损伤尤其是对超微结... 详细信息

随着辅助生殖技术的广泛开展,卵母细胞的冷冻保存技术越来越受到关注,玻璃化冷冻成为卵母细胞冷冻保存的主要技术之一。而经过冷冻复苏后如何获得更高的移植率和临床受精率成为许多生殖中心关注的焦点。玻璃化冷冻的损伤尤其是对超微结构的冷冻损伤成为各实验室研究的重点,它也成为卵母细胞冷冻成败的关键。近年来,许多科研中心相继研究了玻璃化冷冻对动物卵母细胞超微结构的冷冻损伤如微管、纺锤体结构和发育潜能、皮质颗粒、线粒体、胞内膜电位等。而关于人类卵母细胞超微结构的实验研究相对缺乏。鉴于此,本研究主要讨论了玻璃化冷冻对体外成熟卵母细胞超微结构—微丝的影响,对比分析了冷冻前后卵母细胞微丝分布的变化;同时按照冷冻后不同的复苏时间对各组卵母细胞微丝形态的恢复情况进行了比较分析,选出最佳的复苏时间并在最佳时间内对玻璃化冷冻前后的卵母细胞行胞浆内单精子注射（Intracytoplasmic sperm injection, ICSI）,进一步分析了玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞发育潜能的影响。第一部分玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞微丝分布的影响 [目的]通过对体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻后不同复苏时间和新鲜卵母细胞的染色分析,发现冷冻对微丝分布的影响及复苏的最佳时间。 [方法]收集未成熟卵母细胞（GV/MI）,经过体外培养为成熟卵母细胞,随机分为新鲜组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组按不同的复苏时间再次随机分为复苏后1h,2h,3h,4h组。所有卵母细胞用罗丹明标记的鬼笔环肽行微丝染色,之后用激光共聚焦显微镜（LSM780）观察。 [结果]经过冷冻复苏后卵母细胞成活率为87.37%。新鲜组卵母细胞微丝分布的正常率为71.11%,复苏1h、2h、3h、4h后卵母细胞微丝分布正常率分别为34.15%、44.18%、69.05%、65.79%。与新鲜组相比,复苏后1h、2h均具有显著性差异（P＜0.01,P=0.02）,复苏后3h、4h均无显著性差异（P=1.00,P=0.64）,1h、2h之间与3h、4h之间相比均无显著性差异（P=0.35,P=0.81）。 [结论]玻璃化冷冻复苏过程改变了人体外成熟卵母细胞的微丝分布,但是经过恰当的复苏时间后微丝分布可恢复至新鲜状态,继续增加复苏时间并不会增加卵母细胞微丝分布的正常率。说明合适的冷冻复苏（约3h以上）并未改变体外成熟卵母细胞的微丝分布。第二部分玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞发育潜能的影响 [目的]通过对比分析体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻前后发育潜能的变化,结合第一部分拟从超微结构方面寻找玻璃化冷冻对人体外成熟卵母细胞发育潜能影响的细胞学机制。 [方法]收集人未成熟（GV/M I）卵母细胞,经体外成熟为MⅡ期卵母细胞。将获得的MⅡ期卵母细胞按随机化原则分组,分为新鲜组和玻璃化冷冻组。将所有卵母细胞均行卵母细胞浆内单精子注射,观察体外成熟卵母细胞的受精数、卵裂数、优胚数及囊胚形成数。 [结果]新鲜组2PN率、优质胚胎率、囊胚率、优质囊胚率分别为73.08%、23.08%、19.23%、6.73%,玻璃化冷冻组2PN率、优质胚胎率、囊胚率、优质囊胚率分别为55.16%、6.74%、9.00%、2.25%。两组之间的2PN率、优质胚胎率、囊胚率均有显著性差异（P=0.01,P＜0.01,P=0.04）;优质囊胚率二者之间无显著性差异（P=0.26）。 [结论]玻璃化冷冻影响了卵母细胞的发育潜能,冷冻后卵母细胞的发育潜能大大降低。

关键词：玻璃化冷冻体外成熟卵母细胞微丝人体外受精

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试论信息技术在高中数学教学中的应用

教育教学论坛 2014年第12期 205-206页

作者：慈倩倩河北衡水中学河北衡水053000

信息技术与高中数学教学相结合是新课程改革的热点,二者的结合一改传统的单一的教学方式,创造了一种新颖的教学手段。另外,利用现代信息技术开展高中数学教学可以使课堂教学变得轻松活泼,促使学生积极主动地去学习,让学生爱上学习。因此... 详细信息

信息技术与高中数学教学相结合是新课程改革的热点,二者的结合一改传统的单一的教学方式,创造了一种新颖的教学手段。另外,利用现代信息技术开展高中数学教学可以使课堂教学变得轻松活泼,促使学生积极主动地去学习,让学生爱上学习。因此,笔者将从信息技术与数学教学的结合、具体应用以及运行策略三个方面对信息技术在高中数学中的应用进行探讨,以供读者参考。

关键词：信息技术高中数学应用策略

产前细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术在染色体非整倍体及微缺失/微重复综合征诊断中的应用

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中华检验医学杂志 2022年第12期45卷 1240-1244页

作者：张健张燕孔德红慈倩倩赵玉洁马运荣山东省济宁市妇幼保健计划生育服务中心济宁272125

目的探讨细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术在产前诊断中的适应证及应用价值。方法采集2016年4月至2020年12月在济宁市妇幼保健计划生育服务中心进行产前诊断的3579例单胎:高龄产妇(年龄≥35岁)、血清学产前筛查高风险/临界风险、... 详细信息

目的探讨细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术在产前诊断中的适应证及应用价值。方法采集2016年4月至2020年12月在济宁市妇幼保健计划生育服务中心进行产前诊断的3579例单胎:高龄产妇(年龄≥35岁)、血清学产前筛查高风险/临界风险、无创基因检测(NIPT)高风险、超声指标异常、不良妊娠史的羊水样本进行细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术(BoBs)检测,同步进行G显带染色体核型分析检测。核型分析或BoBs检测出的非整倍体异常/微缺失/微重复样本根据需要进行荧光原位杂交(FISH)/单核苷酸多态性(SNP)微阵列验证。结果(1)高龄、NIPT高风险、血清学筛查高风险指征样本占比89.44%(3201/3579),非整倍体异常检出率96.19%(202/210),微缺失/微重复异常检出率87.5%(28/32),合计异常检出率95.04%(230/242);超声指标异常、不良妊娠史、中孕期血清学筛查临界风险指征样本占比10.66%,检出非整倍体及微重复/微缺失的异常占4.96%。(2)BoBs检出198份常见染色体非整倍体(13/18/21/X/Y)异常,12例≥20%的嵌合体,与核型结果一致;2份21-三体、3份X/Y、7份探针检测范围外的2、7、8、9、10、20、mar染色体核型嵌合、8份臂间倒位和5份易位由染色体核型分析检出。BoBs检测对5种非整倍体的敏感度为94.6%(210/222),特异度为100%,假阴性率5.4%(12/222)。BoBs检出32份微缺失/微重复,染色体核型分析检出9份。G显带染色体核型分析与BoBs检测联合应用相较于单一的染色体核型分析,额外检出9.4%(23/244)阳性样本。结论单纯高龄、NIPT高风险、血清学筛查高风险指征的样本更适合作为BoBs在产前诊断应用的适应证。

关键词：产前诊断核型分析非整倍体微缺失微重复

PD-1/PD-L1拮抗剂在小细胞肺癌治疗中的研究进展

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现代肿瘤医学 2020年第11期28卷 1973-1976页

作者：慈倩倩陈公琰哈尔滨医科大学附属肿瘤医院呼吸肿瘤内科黑龙江哈尔滨150086

小细胞肺癌是以广泛转移和预后不良为特征的一种恶性肿瘤。虽然34%~85%的小细胞肺癌对化疗有效,但疾病进展迅速,后续的二线治疗效果很不理想,并且近几十年的治疗方案没有突破性进展。近几年生物治疗迅速发展,免疫治疗成为继靶向治疗后... 详细信息

小细胞肺癌是以广泛转移和预后不良为特征的一种恶性肿瘤。虽然34%~85%的小细胞肺癌对化疗有效,但疾病进展迅速,后续的二线治疗效果很不理想,并且近几十年的治疗方案没有突破性进展。近几年生物治疗迅速发展,免疫治疗成为继靶向治疗后的又一次飞跃。程序性死亡蛋白-1(PD-1)与程序性死亡受体-配体1(PD-L1)结合,抑制了CD4^+和CD8^+T细胞的增殖和活化,负性调控机体免疫机制应答过程,从而介导肿瘤细胞的免疫逃逸,促进肿瘤生长。PD-1/PD-L1拮抗剂在SCLC中的临床前及临床研究中均获得了良好效果,让更多的小细胞肺癌患者受益,尽可能的延长生存时间。本文就PD-1/PD-L1拮抗剂在小细胞肺癌中的研究进展作一综述。

关键词：小细胞肺癌程序性死亡蛋白-1(PD-1) 程序性死亡受体-配体1(PD-L1)

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生药学教学中关于“主动学习”的思考和探索

中国中医药现代远程教育 2014年第17期12卷 74-76页

作者：贾献慧唐文照慈倩倩济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院济南250062 山东省医学科学院药物研究所济南250062

提高教学质量、促进主动学习是高等教育发展的首要任务。本文基于生药学的特点,结合本校实际,对在生药学教学中如何促进"主动学习"进行了一些思考和探索,总结出重视首讲、生药标本与多媒体课件相结合、理论教学与实践教学相结合、加强... 详细信息

提高教学质量、促进主动学习是高等教育发展的首要任务。本文基于生药学的特点,结合本校实际,对在生药学教学中如何促进"主动学习"进行了一些思考和探索,总结出重视首讲、生药标本与多媒体课件相结合、理论教学与实践教学相结合、加强第二课堂建设和网络课堂建设、加强互动及时沟通、完善考核机制等措施,以激发和保持学生的学习兴趣,促进学生主动学习,提高生药学教学效率。

关键词：生药学教学方法主动学习

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千金子霜质量标准研究

中成药 2015年第12期37卷 2769-2772页

作者：李英霞侯立静高华刘桂霞苏丽君慈倩倩青岛大学药学院山东青岛266021 山东省中医药研究院山东济南250014 山东省医学科学院研究生教育中心山东章丘250202

目的对千金子霜进行质量标准研究。方法以泻下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯为对照品,建立薄层色谱（TLC）法,并对10批不同产地的千金子霜进行鉴别。高效液相色谱（HPLC）法对千金子霜中这两种泻下成分、水分、灰分及脂肪... 详细信息

目的对千金子霜进行质量标准研究。方法以泻下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯为对照品,建立薄层色谱（TLC）法,并对10批不同产地的千金子霜进行鉴别。高效液相色谱（HPLC）法对千金子霜中这两种泻下成分、水分、灰分及脂肪油的含有量进行测定。结果 10批千金子霜在与千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯对应的TLC位置上,均显示出相同颜色的斑点,水分含有量为5.55%-7.22%,总灰分、酸不溶性灰分含有量分别为5.95%-6.82%和0.12%-0.45%,含油量为18.04%-20.00%,千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含有量分别为0.134%-0.182%和0.212%-0.248%。结论该方法可用于千金子霜的定性鉴别及定量分析,为其质量标准的进一步完善提供了实验基础。

关键词：千金子霜质量标准千金子甾醇千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯 TLC HPLC

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香附的本草考证

四川中医 2010年第4期28卷 50-51页

作者：慈倩倩李英霞张文邵新山东中医药大学山东省中医药研究院山东济南250014

目的:为研究香附的品种来源提供文献依据。方法:考证历代本草著作,从品名、生境与分布、品种与药用部位、采收与加工、性味归经以及功效等方面加以考证。并结合现代对香附品种来源的认识,进行分析研究。结果:考证出香附的原植物是莎草... 详细信息

目的:为研究香附的品种来源提供文献依据。方法:考证历代本草著作,从品名、生境与分布、品种与药用部位、采收与加工、性味归经以及功效等方面加以考证。并结合现代对香附品种来源的认识,进行分析研究。结果:考证出香附的原植物是莎草科莎草Cyperus rotundus L。宋朝前期,香附的苗和花用于除胸中热,益气充皮毛。"根下子"(即今根茎)可治一切气,霍乱吐泻腹痛,肾气膀胱冷气。明清时期则多用地下根茎,侧重于理气解郁、调经止痛,多用于胸脘胀满、两胁疼痛,妇女月经不调、胎产诸病。古代以湖南、广东、四川所产香附为佳,而现今以山东、浙江、湖南、福建等地为主产地。结论:古代香附在品种、药用部位、采收加工及功效方面与现今基本一致,在主产地、性味归经方面存在一定变迁。

关键词：香附本草考证

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香附炮制前后总皂苷含量比较研究

内蒙古中医药 2010年第11期29卷 141-142页

作者：李英霞曲永胜慈倩倩山东省中医药研究院 250014 山东中医药大学药学院

目的:研究香附炮制前后总皂苷含量的变化。方法:采用高氯酸显色法,以紫外-可见分光光度法进行测定。结果:香附醋炙后总皂苷含量比生品提高28.21%,酒炙提高22.48%。结论:香附炮制后总皂苷含量明显升高,醋炙比酒炙香附总皂苷含量高。总皂... 详细信息

目的:研究香附炮制前后总皂苷含量的变化。方法:采用高氯酸显色法,以紫外-可见分光光度法进行测定。结果:香附醋炙后总皂苷含量比生品提高28.21%,酒炙提高22.48%。结论:香附炮制后总皂苷含量明显升高,醋炙比酒炙香附总皂苷含量高。总皂苷是否为香附中的有效成分有待于进一步研究。

关键词：香附炮制总皂苷含量

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不同片型规格对醋炙香附总黄酮含量的影响

四川中医 2011年第5期29卷 58-59页

作者：武玉婷李英霞慈倩倩山东中医药大学药学院山东长清250355 山东省中医药研究院山东济南250014

目的:研究不同片型规格对醋炙香附总黄酮含量的影响。方法:将香附药材加工成不同片型,经醋炙后,以总黄酮含量为指标,考察不同片型对醋炙香附总黄酮含量的影响。结果:醋炙后总黄酮含量均有不同程度的升高,以醋中厚片和醋薄片提高率最高,... 详细信息

目的:研究不同片型规格对醋炙香附总黄酮含量的影响。方法:将香附药材加工成不同片型,经醋炙后,以总黄酮含量为指标,考察不同片型对醋炙香附总黄酮含量的影响。结果:醋炙后总黄酮含量均有不同程度的升高,以醋中厚片和醋薄片提高率最高,醋小粒提高率最低,醋切片比醋颗粒含量提高幅度大。结论:不同片型规格对醋制香附中总黄酮含量有一定影响,醋中厚片和醋薄片中总黄酮含量较高。

关键词：香附醋炙香附厚度(或粒度) 总黄酮含量