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作者：徐银海浙江大学

学位级别：硕士

白血病是最常见的恶性肿瘤之一，是一组异质性起源的恶性克隆性疾病，年发病率3-4／10万。目前治疗白血病的方法主要是化疗，化疗主要是通过促进白血病细胞凋亡来达到治疗白血病的目的。随着化疗方案的不断改进和新化疗药物的出现，白... 详细信息

白血病是最常见的恶性肿瘤之一，是一组异质性起源的恶性克隆性疾病，年发病率3-4／10万。目前治疗白血病的方法主要是化疗，化疗主要是通过促进白血病细胞凋亡来达到治疗白血病的目的。随着化疗方案的不断改进和新化疗药物的出现，白血病的预后已有非常明显的改善，但仍然存在白血病耐药及停药后白血病复发等问题。例如，多种肿瘤细胞可对抗肿瘤药物诸如长春新碱(VCR)、丝裂霉素C(MMC)和柔红霉素(DAM)等产生耐药性。因此，寻找抗肿瘤新药、探索相关治疗新方案具有重要意义。近年来，某些中药及其有效组分因具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用备受关注。雷公藤泛指卫矛科雷公藤属植物，是我国传统中药材之一。雷公藤红素是雷公藤单体之一，属三萜类色素，分子式为CHO，分子量为450。有文献报道，雷公藤红素不仅具有免疫抑制和抗炎作用，也可显示体外抗肿瘤活性，但其机制尚未完全明了。本研究以人急性髓系白血病HL-60细胞为靶细胞，采用流式细胞术和透射电镜法等方法，探讨了雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡的量效及时效关系，此外还检测了雷公藤红素处理前后对HL-60细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达水平的影响，以期了解雷公藤红素诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。材料和方法 ***-60细胞培养及处理： 24孔细胞培养板中每孔接种1×10／ml的HL-60细胞，37℃、5％CO条件下预培养24 h。试验组加入终浓度分别为0.5、1.0、1.5和2.0μmol／L的雷公藤红素，实验中同时设置不加药物的对照组，37℃、5％CO培养24 h后收集细胞。另将HL-60细胞与终浓度为1.5μmol／L雷公藤红素分别培养0、4、8、12、16、24 h。所收集的细胞用PBS洗涤2次后重悬，调整细胞浓度为1×10／ml。 2．肿瘤细胞杀伤试验采用台盼兰染色活细胞计数法。取30μl不同浓度雷公藤红素处理前后细胞悬液，用台盼蓝染色后镜检100个细胞并计算活细胞百分率，其中拒染细胞为活细胞，染成蓝色的细胞为死细胞。 3．肿瘤细胞凋亡检测采用FITC-annexin V／PI流式细胞法。取上述不同浓度雷公藤红素处理及同一浓度雷公藤红素作用不同时间的HL-60细胞悬液100μl，分别加入10μlFITC-annexin V，37℃孵育10 min，PBS洗涤后重悬细胞，加入PI终止液50μl，用流式细胞仪检测。 4．透射电镜观察取1.5μmol／L雷公藤红素处理0和24 h的细胞离心后弃上清，沉淀用预冷的0.01 mol／LPBS(pH 7.4)离心洗涤细胞2次，2.5％戊二醛磷酸缓冲液4℃固定细胞4 h，超薄切片后用透射电镜观察细胞形态学变化。 ***和FasL检测分别取1.5μmol／L雷公藤红素处理0、12和24 h的细胞悬液100μl，分别加入FITC标记的Fas或FasL单克隆抗体10μl，以IgG1-FITC为阴性对照，37℃孵育30 min后用流式细胞仪检测，分别定量分析不同标本中Fas和FasL阳性细胞百分率。 ***-κBP65活性的检测分别取1.5μmol／L雷公藤红素处理0、12和24 h的细胞悬液100μl，加入兔抗人NF-κBP65单克隆抗体100μl，室温孵育30 min后用PBS洗涤2次，然后加入FITC标记鼠抗兔单克隆抗体，室温避光孵育30 min，PBS洗涤2次，用1％副醛固定细胞后用流式细胞仪检测，定量分析不同标本中NF-κBP65阳性细胞百分率。结果 1．不同药物浓度及作用时间与细胞凋亡率变化的关系台盼蓝染色结果表明，0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μmol／L雷公藤红素作用24 h后，HL-60活细胞百分率分别为93.1±1.4、92.1±1.1、86.4±1.4、84.1±1.7、80.2±1.5，未受雷公藤红素作用的正常HL-60活细胞百分率为98.3±0.6。流式细胞术检测结果表明，HL-60细胞凋亡率分别为6.13±0.83、14.31±1.35、36.71±2.28、31.85±2.06、20.17±2.19，与对照组1.97±0.64相比其差异有统计学意义(P＜0.05)。其中药物浓度为0.5～1.5μmol／L时，细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高，药物浓度≥2.0μmol／L时，细胞凋亡率随药物浓度增加而下降。1.5μmol／L雷公藤红素分别作用4、8、12、16、24 h时，其凋亡率分别为2.67±0.26、7.44±0.66、12.68±1.15、22.10±0.95、38.53±1.83，与对照组1.92±0.26相比差异有统计学意义(P＜0.05)。 2．细胞形态学观察结果正常HL-60细胞呈较为均一的圆形或椭圆形。1.5μmol／L雷公藤红素分别处理16和24 h后，均可见细胞圆缩、大量胞浆内空泡，并出现

关键词：雷公藤红素 HL-60细胞凋亡机制 Fas和FasL NF-κBP65

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雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究

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浙江大学学报（理学版） 2008年第3期35卷 311-314页

作者：徐银海严杰浙江大学医学院基础医学部

探讨雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用及其机制．采用台盼蓝染色法、透射电镜和流式细胞术，分别检测不同浓度和作用时间下，雷公藤红素诱导HL一60细胞凋亡以及对细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达的影响．结果表明：0．5... 详细信息

探讨雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用及其机制．采用台盼蓝染色法、透射电镜和流式细胞术，分别检测不同浓度和作用时间下，雷公藤红素诱导HL一60细胞凋亡以及对细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达的影响．结果表明：0．5～2．5μmol·L^-1浓度雷公藤红素作用24h，HL-60细胞凋亡率均明显高于不加药物的对照组（P〈0．05）．当雷公藤红素浓度为1．5μmol·L^-1时，细胞凋亡率最高并呈时间依赖效应．雷公藤红素作用的HL-60细胞，可呈现典型的细胞凋亡形态学改变．1．5μmol·L^-1雷公藤红素可明显提高Fas和FasL阳性HL-60细胞百分率（P〈0．05），但抑制细胞NF—κBP65的表达（P〈0．05）．从而得出结论：雷公藤红素可有效地诱导HL-60细胞凋亡，其机制与雷公藤红素可上调Fas、FasL基因及下调NF—κB基因表达有关．

关键词：雷公藤红素 HL-60细胞凋亡机制

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从学校体育教育的现状看学生体质

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体育师友 2008年第6期31卷 42-44页

作者：徐银海广东省佛山市南海区狮山镇官窑第二中学

本文分析了目前基层学校体育教育的一些现状。由于某些学校领导对体育认识的偏差、教育政策制度不能落实、家长的体育观等因素导致学校体育教育的缺失，从而造成学生体质持续下降。建议教育部门加大对学校体育工作的监管力度，加大必要... 详细信息

本文分析了目前基层学校体育教育的一些现状。由于某些学校领导对体育认识的偏差、教育政策制度不能落实、家长的体育观等因素导致学校体育教育的缺失，从而造成学生体质持续下降。建议教育部门加大对学校体育工作的监管力度，加大必要的政策性引导，通过制度、约束、条例等手段来促进各级学校重视学校体育工作。高度重视学生的《国家学生体质健康标准》测试成绩，将体育考核成绩全面纳入学生考核体系，借以引起学校、学生的重视，促进学生体质健康发展。

关键词：学生体质学校体育现状

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高速公路路面工程中沥青混凝土技术的应用

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中文科技期刊数据库（引文版）工程技术 2022年第7期 65-68页

作者：徐银海浙江交工集团股份有限公司第一分公司浙江杭州310000

在现代高速公路路面工程施工建设的过程中,为了对施工效率与质量进行保障,同时提高路面自身的防水性,施工单位大多采用了沥青混凝土技术,并借助大量机械设备,对完成铺设的混凝土进行压实,提高公路路面的强度与紧密度,确保高速公路路面... 详细信息

在现代高速公路路面工程施工建设的过程中,为了对施工效率与质量进行保障,同时提高路面自身的防水性,施工单位大多采用了沥青混凝土技术,并借助大量机械设备,对完成铺设的混凝土进行压实,提高公路路面的强度与紧密度,确保高速公路路面工程能够长期稳定的运转下去。下面主要对我国高速公路路面工程中沥青混凝土技术的应用进行分析探究。

关键词：高速公路路面工程沥青混凝土技术

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用橡皮筋发展学生力理素质

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田径 2006年第10期 22-23页

作者：徐银海广东省佛山市南海区狮山镇官窑二中

在一些经济欠发达或一些农村学校由于教育经费紧张,学校体育器材严重短缺,橡皮筋因其具有经济性、实用性、方便性等特点,往往被广大中小学体育教师运用在平时的体育教学与课余训练中,并起到很好的效果。我也经常利用它来辅助教学或进行... 详细信息

在一些经济欠发达或一些农村学校由于教育经费紧张,学校体育器材严重短缺,橡皮筋因其具有经济性、实用性、方便性等特点,往往被广大中小学体育教师运用在平时的体育教学与课余训练中,并起到很好的效果。我也经常利用它来辅助教学或进行课余训练。

关键词：橡皮筋力量素质中小学体育教师学生农村学校课余训练经济欠发达教育经费

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膜结合型抗大鼠FcεRIα单克隆抗体制备及活性鉴定

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第二军医大学学报 2004年第12期25卷 1303-1306页

作者：李莉李先兴徐银海张玲珍孔宪涛仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003 长征医院器官移植中心徐州医学院附属医院检验科徐州220114

目的:建立抗鼠FcεRI单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为靶向诱导肥大细胞凋亡创造条件。方法:大鼠嗜碱性粒细胞细胞系RBL-2H3免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,ELISA筛选鼠血清和融合细胞产生的抗体,有限稀释克隆... 详细信息

目的:建立抗鼠FcεRI单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为靶向诱导肥大细胞凋亡创造条件。方法:大鼠嗜碱性粒细胞细胞系RBL-2H3免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,ELISA筛选鼠血清和融合细胞产生的抗体,有限稀释克隆化培养。SDS-PAGE胶电泳、免疫扩散鉴定抗体性质,IgE竞争结合、组胺释放检测抗体生物活性,125I-细胞膜抗体复合物免疫沉淀放射自显影鉴定抗体识别抗原成分。结果:获得2株抗FcεRIα McAb生产细胞株ER-E5.3、ER-C7.4,均为IgG1。培养上清和小鼠腹水获得的抗体效价均大于10-5。流式细胞术分析抗体与RBL-2H3结合率均大于95％,与大鼠胸腺细胞和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)无交叉反应,并能竞争性抑制IgE与肥大细胞结合。抗体触发RBL-2H3脱颗粒,组胺释放效应与抗原特异性IgE对肥大细胞的激活效应相同。酶切的Fab片段能与RBL-2H3结合,也能竞争抑制IgE与肥大细胞的结合,但不致RBL-2H3脱颗粒。抗体结合的细胞膜成分为α亚单位。结论:大鼠肥大细胞免疫小鼠与骨髓瘤细胞融合得到2株抗体产生杂交瘤克隆ER-E5.3和ER-C7.4,抗体效价和功能活性达到了实验要求,抗原识别成分为膜FcεRlα。

关键词： FcεRIα 抗体,单克隆肥大细胞

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体育运动的八大误区

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体育健康知识画刊 2005年第1期 31-33页

作者：徐银海

如果说容貌和身材可以"引人",举止风度可以"迷人"的话,那么体育运动则可以"塑人"。体育运动能促进人体的生长发育,可以让人拥有迷人的曲线、结实的肌肉、健康的体魄;可以推迟衰老,增进健康,这已经成为人们的共识。然而人们在从事体育运... 详细信息

如果说容貌和身材可以"引人",举止风度可以"迷人"的话,那么体育运动则可以"塑人"。体育运动能促进人体的生长发育,可以让人拥有迷人的曲线、结实的肌肉、健康的体魄;可以推迟衰老,增进健康,这已经成为人们的共识。然而人们在从事体育运动时(特别是一些青少年学生)却存在一些错误的认识。这些误区有些对健康不利,有些会对身体带来伤害。

关键词：青少年学生准备运动运动疲劳体育活动肌肉运动体育教学体育考试生长发育活动性休息呼吸频

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浅谈桥梁工程挂篮悬臂浇筑法施工技术研究

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中文科技期刊数据库（全文版）工程技术 2022年第9期 64-67页

作者：徐银海浙江交工集团股份有限公司第一分公司浙江杭州310000

桥梁工程中挂篮悬臂浇筑施工技术应用较为广泛,适用于较多种类桥梁。桥梁工程中挂篮悬臂浇筑施工技术相较于其他施工技术而言,不受外界因素的影响,能够使施工单位的经济效益达到最高,但想要通过挂篮悬臂浇筑施工技术取得较高的施工质量... 详细信息

桥梁工程中挂篮悬臂浇筑施工技术应用较为广泛,适用于较多种类桥梁。桥梁工程中挂篮悬臂浇筑施工技术相较于其他施工技术而言,不受外界因素的影响,能够使施工单位的经济效益达到最高,但想要通过挂篮悬臂浇筑施工技术取得较高的施工质量,必须要按照相应的程序和规定完成施工作业。桥梁工程的挂篮悬臂浇筑施工技术主要包含准备阶段,施工阶段,竣工验收和后期养护四个阶段。在施工阶段中主要包含挂篮的制作与安装,梁的合拢,混凝土浇筑和监控施工等四个环节。只有按照合理的施工参数制作安装挂篮,合拢梁体,浇筑混凝土,在整个施工阶段通过专业的第三方单位完成施工监控工作才能够取得更好的经济效益,保证桥梁工程施工质量减少施工过程中的安全隐患。

关键词：桥梁工程挂篮悬臂浇筑法施工技术桥梁施工

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食物过敏原特异性IgG检测的临床意义探讨

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第二军医大学学报 2004年第12期25卷 1347-1348页

作者：李莉徐银海吴萍徐玲玲张玲珍仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003 徐州医学院附属医院检验科徐州220114

　　IgE介导的食物过敏反应为一速发过程,症状突出且与食物摄入显著关联,多次发作后患者也能自我诊断,而且其诊断方法也日臻完善.1982年发现IgG主要是IgG4参与了过敏反应,它与IgE分别作用于过敏反应的速发相和迟发相[1].然而,由于检测... 详细信息

　　IgE介导的食物过敏反应为一速发过程,症状突出且与食物摄入显著关联,多次发作后患者也能自我诊断,而且其诊断方法也日臻完善.1982年发现IgG主要是IgG4参与了过敏反应,它与IgE分别作用于过敏反应的速发相和迟发相[1].然而,由于检测手段的滞后、诊断方法不普及、IgE介导的过敏反应在医生和患者中的主导地位导致IgG介导的食物过敏反应尚未被临床充分认知,使得这一领域几为空白.新近由于对IgG介导的食物过敏反应的逐步认识和深入研究,特别是其诊断方法的改进使得一些与IgG相关的过敏反应性疾病得以正确诊断,进而能够获得有效的防治.……

关键词：食物过敏 IgG IgE

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医学检验科住院医师规范化培训教学模式的研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第8期 194-196页

作者：郭毅徐银海徐州医科大学附属医院检验科江苏徐州221006

研究分析医院检验科住院医师规范化培训中应用PDCA循环法联合多模式教学法的价值。方法选择2021年3月至2022年3月在我院医学检验科工作的住院医师40名为研究对象,根据工作时间先后顺序将住院医师分成2组,其中20名住院医师设为对照组,2... 详细信息

研究分析医院检验科住院医师规范化培训中应用PDCA循环法联合多模式教学法的价值。方法选择2021年3月至2022年3月在我院医学检验科工作的住院医师40名为研究对象,根据工作时间先后顺序将住院医师分成2组,其中20名住院医师设为对照组,20名住院医师设为研究组,对照组实施PDCA循环法,研究组在对照组基础上加用多模式教学法,以2组住院医师的理论成绩、操作成绩、对教学法的满意度为观察指标,之后比较2组观察结果。结果针对理论成绩、操作成绩而言,2组培训前比较不存在显著差异(P>0.05),研究组培训后分值均高于对照组,比较存在显著差异(P<0.05)。研究组学习兴趣、自主学习能力、交流沟通能力、团队合作精神分值均比对照组高,差异明显(P<0.05)。结论 PDCA循环法联合多模式教学法在医学检验科住院医师规范化培训中应用后,不仅可以进一步提高住院医师理论成绩与操作成绩,还可以让住院医师更加满意教学方法,从而更加积极的展开学习,值得临床深入研究与借鉴应用。

关键词：检验科住院医师规范化培训教学 PDCA循环法多模式教学法

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