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金荞麦水提物通过调控RIG-Ⅰ信号通路与细胞自噬抑制甲型流感病毒H1N1的复制

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中药药理与临床 2022年第1期38卷 103-110页

作者：张哲雯冯燕徐昌平高见吴巧凤浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江省疾病预防控制中心杭州310057

目的:探讨金荞麦水提物体外抗甲型流感病毒H1N1的效果及其作用机制。方法:考察金荞麦水提物抗H1N1感染犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞的活性及作用方式;转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析金荞麦水提物处理后感染细胞... 详细信息

目的:探讨金荞麦水提物体外抗甲型流感病毒H1N1的效果及其作用机制。方法:考察金荞麦水提物抗H1N1感染犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞的活性及作用方式;转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析金荞麦水提物处理后感染细胞的基因差异表达,筛选与抗病毒相关的信号通路;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测LC3Ⅱ的表达水平,荧光显微镜观察自噬流,分析金荞麦水提物对感染细胞自噬水平的影响。结果:金荞麦水提物具有良好的抑制细胞内H1N1复制的活性,细胞对MDCK 1.25 mg/mL抑制率为51.02%,5 mg/mL抑制率为98.22%。与模型对照组比较,金荞麦水提物处理感染细胞后,引起2682个基因差异表达。KEGG通路富集分析表明,差异表达基因富集在RIG-Ⅰ和细胞自噬信号通路。金荞麦水提物1.25、2.5、5 mg/mL处理的感染细胞中,LC3Ⅱ蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于模型对照组(P<0.01),且出现自噬溶酶体。结论:金荞麦水提物具有显著体外抗H1N1的活性,其作用机制与对宿主细胞RIG-Ⅰ信号通路的调控,以及抑制感染诱导的细胞自噬相关。

关键词：金荞麦水提物甲型流感病毒转录组测序差异表达基因 RIG-Ⅰ信号通路细胞自噬

牛蒡苷元通过调控宿主基因表达和细胞凋亡抑制寨卡病毒复制的研究

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中药药理与临床 2023年第4期39卷 40-46页

作者：陈雨露冯燕张哲雯徐昌平吴巧凤浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江省疾病预防控制中心杭州310051

目的:探讨牛蒡苷元抗寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)的药效及其作用机制。方法:采用qRT-PCR及CPE法考察在非洲绿猴肾(Africa green monkey kidney cells, Vero)细胞上,牛蒡苷元抗ZIKV的活性及作用方式;转录组测序(RNA-sequencing, RNA-seq)分析正常Vero细胞、ZIKV感染的Vero细胞,以及牛蒡苷元作用的感染细胞在转录组水平上的差异;采用ELISA和荧光染色法检测细胞凋亡水平。结果:牛蒡苷元具有抑制细胞内ZIKV复制的活性,其抗病毒效果在一定浓度范围内呈量效关系,IC_(50)为(1.95±0.32)μg/mL。与ZIKV感染细胞相比,牛蒡苷元处理后的感染细胞共有4 612个基因表达发生显著改变,差异表达基因富集于凋亡相关信号通路,如Hippo和P53信号通路。ZIKV感染后表达上调而牛蒡苷元作用后表达下调(先上调后下调)的基因共376个。在前10个先上调后下调基因中,5个凋亡相关基因的mRNA表达水平验证了RNA-seq结果。细胞凋亡检测结果表明,牛蒡苷元降低了由ZIKV感染诱导的细胞凋亡水平。结论:牛蒡苷元可能通过调节宿主基因表达水平,抑制ZIKV感染诱导的细胞凋亡,发挥体外抗ZIKV活性。

关键词：牛蒡苷元寨卡病毒转录组测序细胞凋亡

含内质控多重荧光RT-PCR同时检测麻疹病毒和风疹病毒的研究

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病毒学报 2010年第2期26卷 109-114页

作者：余蓓蓓冯燕徐昌平卢亦愚钱景浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310058 浙江省公共卫生应急检测关键技术重点实验室杭州310051

由于从临床症状上难以区分麻疹病毒或风疹病毒引起的人群急性发热出疹性传染病,故而分别设计针对麻疹病毒和风疹病毒的特异性引物和荧光标记探针,建立含内质控的多重荧光RT-PCR以同时检测麻疹病毒和风疹病毒的核酸。结果表明:建立的多... 详细信息

由于从临床症状上难以区分麻疹病毒或风疹病毒引起的人群急性发热出疹性传染病,故而分别设计针对麻疹病毒和风疹病毒的特异性引物和荧光标记探针,建立含内质控的多重荧光RT-PCR以同时检测麻疹病毒和风疹病毒的核酸。结果表明:建立的多重荧光RT-PCR方法特异性好,试验验证没有出现假阳性和假阴性现象;该方法的灵敏度高,对麻疹病毒和风疹病毒的最低检出限分别达到0.1TCID50/mL和1TCID50/mL,可从疑似患者咽拭子等标本中直接检测到病毒核酸;同时该方法具有良好的稳定性,当分别用0.1～103TCID50/mL麻疹和风疹病毒的样本进行重复试验时,其CT值变异系数均在0.9%以下。此外,以人核糖核酸酶P(RNaseP)作为内质控,可以有效监控临床标本的采样质量及因操作失误等所致的假阴性结果出现。本方法尤其适用于疑似麻疹或风疹暴发疫情的临床快速诊断。

关键词：麻疹病毒风疹病毒 RNase P 多重荧光RT-PCR 内质控

一季度九江经开区财政投资评审节约资金1.3亿余元 002

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一季度九江经开区财政投资评审节约资金1.3亿余元

九江经开区前三季度财政投资评审节约资金5亿余元 002

九江日报

作者：徐昌平黄安

经开区讯（徐昌平特约记者黄安）今年以来，九江经开区把加强财政投资评审工作作为节约政府投资、提高财政资金使用效益、从源头防治腐败的重要举措来抓，通过“注重评审理念、注重全程参与、注重评审实效”等措施，不断强化财政投资... 详细信息

经开区讯（徐昌平特约记者黄安）今年以来，九江经开区把加强财政投资评审工作作为节约政府投资、提高财政资金使用效益、从源头防治腐败的重要举措来抓，通过“注重评审理念、注重全程参与、注重评审实效”等措施，不断强化财政投资评审职能，切实提高财政资金使用效益。据

关键词：经开区投资评审节约资金

来源： cnki报纸评论

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九江经开区前三季度财政投资评审节约资金5亿余元

猪流感病毒及其基因重配对人类流感流行的影响

九江日报

作者：徐昌平黄安

关键词：投资评审节约资金经开区

来源： cnki报纸评论

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中华流行病学杂志 2009年第5期30卷 426-430页

作者：卢亦愚陈寅徐昌平冯燕浙江省疾病预防控制中心杭州310051

2009年4月13日自墨西哥出现第一例人感染猪流感（H1N1）的死亡病例以来，至5月5日全球确认猪流感病例已上升至1490例，死亡人数30例。除墨西哥与美国外，其他有19个国家也报告了A／H1N1的确认病例。为此WHO在4月27日将全球流感大流行的... 详细信息

2009年4月13日自墨西哥出现第一例人感染猪流感（H1N1）的死亡病例以来，至5月5日全球确认猪流感病例已上升至1490例，死亡人数30例。除墨西哥与美国外，其他有19个国家也报告了A／H1N1的确认病例。为此WHO在4月27日将全球流感大流行的警告级别提升到4级，并在2天后又进一步提高到5级，并把该流感称为甲型（H1N1）流感，

关键词：甲型(H1N1)流感病毒猪流感病毒基因重配

浙江省麻疹病毒流行株血凝素基因的变异及其与国内外流行株的差异

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中华预防医学杂志 2013年第7期47卷 616-621页

作者：冯燕钟淑玲徐昌平卢亦愚浙江省疾病预防控制中心病毒所浙江省公共卫生应急检测关键技术重点实验室杭州310051

目的探讨浙江省麻疹病毒（measlesvirus，MV）流行株血凝素基因的变异情况，及其与国内外流行株的差异。方法选取浙江省1999-2011年分离保存的麻疹病毒流行株33株，提取病毒核酸，采用RT-PCR法扩增其血凝素（H）基因全序列，并与GenBan... 详细信息

目的探讨浙江省麻疹病毒（measlesvirus，MV）流行株血凝素基因的变异情况，及其与国内外流行株的差异。方法选取浙江省1999-2011年分离保存的麻疹病毒流行株33株，提取病毒核酸，采用RT-PCR法扩增其血凝素（H）基因全序列，并与GenBank上下载的中国麻疹疫苗株沪191，以及95株国内外各基因型麻疹毒株的H基因序列进行比较分析。结果从浙江省1999-2011年麻疹患者咽拭子标本中分离麻疹病毒株33株，与1993-2007年我国其他地区麻疹流行株构建H基因系统进化树，结果表明33株浙江麻疹流行株均属于H1a亚型，流行株分布无明显时间和地域特征。以疫苗株沪191为参考株，我国2003-2011年H1a亚型流行株H基因的核苷酸、氨基酸平均变异率以及进化率分别为5．15％、4．44％和5．81％，分别高于1965-1993年（4．75％、3．86％和5．30％），以及1994-2002年（4．80％、4．08％和5．37％）流行株平均变异率与进化率；3个时间段流行株H基因非同义替换率与同义替换率的比值（dn／ds）分别为0．19、0．21和0．23，表明1993-2011年我国H1a型麻疹流行株尚未受到明显的正向选择作用。我田2003-2011年H1a亚型毒株与沪191之间，在H基因上共存在24个稳定的氨基酸变异位点；H1a亚型流行株与A基因型疫苗株间差异最大，遗传距离为0．053，氨基酸差异数为26～28个，而B3、D4型代表株与沪191间稳定的氨基酸差异仪为15个。另外，H1a型流行株与B、D基因型毒株间差异明显，组间遗传距离分别为0．074和0．071，氨基酸差异数达27～33个。结论麻疹病毒H1a亚型流行株与疫苗株以及其他基因型麻疹病毒株，在H基因上存在明显差异，且该差异随时间累积而增大，应该引起足够的重视。

关键词：麻疹病毒血凝素类基因遗传变异

2002～2004年浙江省无菌性脑膜炎暴发疫情的病原学研究

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病毒学报 2011年第5期27卷 462-468页

作者：严菊英卢亦愚徐昌平余昭龚黎明陈寅张严峻浙江省疾病预防控制中心杭州310051

2002～2004年浙江省发生了无菌性脑膜炎暴发疫情,为了及时查明病因,分析病原的分子特征并进行病原溯源,我们采集患者脑脊液和粪便样本271份,用RD和Hep-2细胞同时分离病毒,对分离株VP1和VP4/VP2基因测序,进行同源性与进化分析。结果从27... 详细信息

2002～2004年浙江省发生了无菌性脑膜炎暴发疫情,为了及时查明病因,分析病原的分子特征并进行病原溯源,我们采集患者脑脊液和粪便样本271份,用RD和Hep-2细胞同时分离病毒,对分离株VP1和VP4/VP2基因测序,进行同源性与进化分析。结果从271份样本中分离到埃柯病毒30型(E30)78株;对31株分离株VP1区核苷酸(nt)序列测定,其长度均为876nt,推导编码292个氨基酸(aa)。浙江E30株与原型株Bastianni在VP1区的nt和aa同源性分别为84.7%～86.3%和92.1%～94.2%;浙江E30株之间nt和aa的同源性分别为87.1%～99.4%和96.2%～100%。在VP1基因进化树上浙江E30株分别位于G和H基因亚型分支上,与浙江E30G亚型株亲缘关系最近的国内外毒株分别为2003年江苏、山东株和1999年乌克兰株;与浙江E30H亚型株亲缘关系最近的毒株为2008年韩国株。VP4/VP2区同源性与进化分析结果与VP1相似。结果表明2002～2004年浙江省无菌性脑膜炎暴发疫情由E30G和H二类不同基因亚型流行株引起;H基因亚型株推测为新的E30变异株,首先分离于2002年浙江省。

关键词：暴发无菌性脑膜炎埃柯病毒30型序列分析系统发生树

麻疹病毒核酸等温扩增试纸条快速检测技术的研究与应用

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麻疹病毒核酸等温扩增试纸条快速检测技术的研究与应用

作者：徐昌平浙江理工大学

学位级别：硕士

麻疹是由麻疹病毒引起的以发热、出疹为特征的急性呼吸道传染病,该病传染性强,致死率高,是目前导致发展中国家儿童死亡的重要原因。20世纪60年代以来,麻疹疫苗开始广泛使用,使麻疹的发病率、死亡率大幅度降低,但据世界卫生组织（World H... 详细信息

麻疹是由麻疹病毒引起的以发热、出疹为特征的急性呼吸道传染病,该病传染性强,致死率高,是目前导致发展中国家儿童死亡的重要原因。20世纪60年代以来,麻疹疫苗开始广泛使用,使麻疹的发病率、死亡率大幅度降低,但据世界卫生组织（World Health Organization,WHO）统计,全球每年仍有超过2千万麻疹病例。WHO制定的全球控制与消除麻疹计划中,麻疹的实验室检测是麻疹监测的重要组成部分。本研究将逆转录环介导等温扩增技术（Reverse-transcriptase loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）与带防污染装置的横向流动试纸条检测技术（lateral flow dipstick,LFD）相结合,建立了一种麻疹病毒核酸快速检测的新方法。研究针对麻疹病毒血凝素基因设计6条RT-LAMP扩增引物与1条特异性检测探针,其中上游内引物与探针的5’端分别标记生物素（biotin）与异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate,FITC）,进行带biotin标记的RT-LAMP反应,同时进行与FITC-探针的杂交,最后利用LFD对等温扩增产物完成可视化核酸试纸条检测。通过对检测体系的优化,建立的麻疹病毒RT-LAMP-LFD快速检测技术能在1 h内完成对样本的检测（包括核酸提取）,方法检测敏感性与荧光RT-PCR方法相同,达到10个RNA copies/μL,同时与其他常见呼吸道传染病病毒无交叉反应,具有良好的检测特异性。收集494份疑似麻疹患者咽拭子标本,用本研究建立的RT-LAMP-LFD快速方法进行检测,同时与荧光RT-PCR法进行比较,结果显示两种方法对494份临床样本的检测结果无显著性差异。结果表明,本研究研发的麻疹病毒核酸RT-LAMP-LFD检测技术对疑似麻疹患者临床样本的检测速度快,而且灵敏度高、特异性好、操作简单、仪器依赖程度低,有望发展成为麻疹病毒核酸快速检测的有效手段。

关键词：麻疹病毒快速检测逆转录环介导等温扩增横向流动试纸条