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姜黄素与MMC联用对胃癌MGC-803细胞存活率和凋亡率的影响

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中国医院药学杂志 2015年第6期35卷 499-503页

作者：刘骥徐云丹赵刚湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065 中药复方与中药资源省部共建教育部重点实验室湖北武汉430065

目的:探索姜黄素与低剂量或中剂量化疗药丝裂霉素C(MMC)联用对胃癌MGC-803细胞存活率和凋亡率的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药MMC的增效剂,以减少MMC使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法:将姜黄素和MMC作用于体外培养... 详细信息

目的:探索姜黄素与低剂量或中剂量化疗药丝裂霉素C(MMC)联用对胃癌MGC-803细胞存活率和凋亡率的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药MMC的增效剂,以减少MMC使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法:将姜黄素和MMC作用于体外培养的胃癌MGC-803细胞24 h,采用MTT方法检测药物作用对MGC-803细胞存活率的影响;应用基于FITC-Annexin V/PI双染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞凋亡的影响。结果:姜黄素(25μmol·L-1)与低剂量MMC(5.98μmol·L-1)联用组的细胞存活率显著低于中剂量MMC(11.96μmol·L-1)单用组(P<0.05);姜黄素与中剂量MMC(11.96μmol·L-1)联用组的细胞存活率小于高剂量MMC(23.92μmol·L-1)单用组,差异具有显著性(P<0.05)。而姜黄素与低剂量MMC联用组的细胞凋亡率显著高于中剂量MMC单用组(P<0.05);姜黄素与中剂量MMC联用组的凋亡率显著大于高剂量MMC单用组(P<0.05)。结论:姜黄素与与较低剂量MMC联用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用显著大于较高剂量MMC单独作用的效果,姜黄素对MMC抗胃癌细胞的作用具有增强效应。

关键词：姜黄素 MMC MGC-803细胞生长抑制细胞凋亡

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氯硝柳胺对斑马鱼幼鱼的神经毒性研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第5期37卷 588-592页

作者：朱璧然李博冯秋珍徐云丹湖北中医药大学基础医学院武汉430065 湖北省疾病预防控制中心武汉430079

目的研究氯硝柳胺(NIC)对斑马鱼幼鱼的神经毒性。方法以模式动物斑马鱼为研究对象,将7200颗发育正常的斑马鱼胚胎随机分为0、5、10、20、40和80μg/L NIC暴露组,每组设4个平行。各组连续暴露于不同浓度的NIC环境下,至胚胎受精后120 h,... 详细信息

目的研究氯硝柳胺(NIC)对斑马鱼幼鱼的神经毒性。方法以模式动物斑马鱼为研究对象,将7200颗发育正常的斑马鱼胚胎随机分为0、5、10、20、40和80μg/L NIC暴露组,每组设4个平行。各组连续暴露于不同浓度的NIC环境下,至胚胎受精后120 h,期间统计斑马鱼胚胎和幼鱼的存活率、畸形率、孵化率、体质量。暴露结束后收集斑马鱼幼鱼,采用乙酰胆碱酯酶(AChE)活力试剂盒检测幼鱼体内AChE活力,利用ZebraLab行为监测系统观察幼鱼运动速度变化,通过实时荧光定量PCR检测幼鱼微球蛋白前体(mbp)和α-微球蛋白(α-tubulin)mRNA的相对表达量。实验数据应用SPSS 16.0软件进行单因素方差分析,选择Tukey’s多重比较法进行延后检验。结果与0μg/L NIC暴露组斑马鱼幼鱼存活率[(86.8±0.2)%]相比,40μg/L和80μg/L NIC暴露组幼鱼存活率分别为(81.9±0.8)%和(80.5±0.9)%(P0.05)。与0μg/L NIC暴露组幼鱼AChE活力[838.4 nmol/(mg·min)]相比,40μg/L和80μg/L NIC暴露组幼鱼AChE活力分别为1048.6和1202.4 nmol/(mg·min)(P<0.05,P<0.01)。与黑暗环境中0μg/L NIC暴露组幼鱼运动速度[(2.7±0.2)mm/s]相比,40μg/L和80μg/L NIC暴露组幼鱼运动速度分别为(2.3±0.2)和(2.1±0.2)mm/s(P<0.05,P<0.01);与光照环境中0μg/L NIC暴露组幼鱼运动速度[(1.9±0.1)mm/s]相比,40μg/L和80μg/L NIC暴露组幼鱼运动速度分别为(1.5±0.1)和(1.4±0.1)mm/s(P<0.05,P<0.01)。与0μg/L NIC暴露组幼鱼mbp和α-tubulin mRNA的相对表达量相比(1.0±0.0),40μg/L和80μg/L NIC暴露组幼鱼mbp mRNA的相对表达量分别为0.8±0.1和0.7±0.1(P<0.05,P<0.01);α-tubulin mRNA的相对表达量分别为0.7±0.1和0.6±0.1(P<0.05,P<0.01)。结论40μg/L和80μg/LNIC暴露可对斑马鱼幼鱼产生神经毒性,降低其存活率、运动速度、mbp和α-tubulin mRNA的相对表达量,提高其畸形率和AChE活力。

关键词：氯硝柳胺斑马鱼幼鱼神经毒性环境相关浓度

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一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院医学生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用技术,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要...

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用技术,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要项目。然而,目前国内医学院校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象。制备微核标本时,一般两人一组处死1只经过诱变剂作用的小鼠,剥离股骨收集骨髓进行细胞涂片再用甲醇固定后染色,按两个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。传统方法存在明显的弊端,其一是动物消耗量较大,不符合现代有关动物实验的新理念3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,实验中使用的甲醇对人体有毒,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核试验的这两个弊端,使该项目符合当今的实验新理念,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾部血液正染性红细胞(normochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。方法①小鼠微核的诱导:每个学生实验室分配2～3只小鼠,每只小鼠按2mg/kg的剂量腹腔注射丝裂霉素C溶液,作用48h;②尾巴取血:先用手从小鼠尾巴的近端捋向远端,使尾巴充血。剪去尾巴的2～3mm的尾尖,让流出血滴(5～10μL)直接粘附到一张载玻片上;③血涂片制备:按常规方法制备小鼠血液的涂片。重新捋动小鼠的尾巴,挤出血液制备第二张涂片;如此重复进行,使一只小鼠的尾血制备出10张以上的血涂片;④干燥与固定:在空气中挥动血涂片使其快速干燥。再浸入无水乙醇中固定5min左右,取出晾干;⑤染色:用Giemsa染液染色3min左右;⑥观察:在显微镜的高倍镜下观察并计数1000个NCE细胞,记录含有微核的NCE细胞数,计算微核率。转换油镜仔细观察微核大小和形态。镜下可见,NCE细胞呈现淡桔黄色,所含微核呈小球形,紫红色。讨论PCE细胞是NCE细胞的前身,当小鼠骨髓中的红系干细胞经过数次分裂后会逐渐脱去细胞核(但会保留染色体断片形成的微核)转变成PCE细胞,再进一步发育成NCE,如果PCE中含有微核,则由PCE发育而来并最终进人外周血的NCE也会保留该微核。因此,在开展小鼠微核的教学实验时,完全可以用外周血NCE细胞替代骨髓PCE细胞作为微核观察的靶细胞。利用小鼠尾巴微量全血制备微核标本,既可大幅减少小鼠使用量,又可在不处死动物的前提下持续利用同一只动物,用于不同时间的不同处理条件下小鼠细胞微核率的检测。甲醇是小鼠骨髓细胞微核实验中传统的细胞固定剂,但对人体有毒且挥发性强,对实验者的身体有一定影响。本着在教学实验中倡导绿色与环保的理念,我们用乙醇替代了甲醇作为细胞固定剂,所得到的微核标本质量与用甲醇作固定剂的完全相同。另外,本方法较为简便,明显减少了实验操作步骤,使得学生在实验课上有较多时间在显微镜下寻找辨认含有微核的NCE细胞,观察微核的形态与大小。而且实验成本也得到大幅度降低。

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一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

一种基于实验新理念的小鼠微核实验方法

湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要...

微核试验(micronucleus test,MNT)是遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物或药物遗传毒性或诱变性的快速初筛方面具有重要应用价值。因此,小鼠红细胞微核标本的制备与观察是医学遗传学实验教学中的一个重要项目。然而,目前国内高等医学院校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象,在制备微核标本时,一般是2人一组使用1只经过诱变剂作用的小鼠,经过处死动物、剥离股骨、收集骨髓、细胞涂片、甲醇固定和Giemsa染色后在显微镜下观察。按两个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。按照有关实验的现代理念,这种传统的小鼠微核教学实验设计存在明显弊端。其一是动物消耗量较大,不符合动物实验新理念的3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,在实验中使用的甲醇对人体具有一定毒性,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核教学实验的这两个弊端,使该项目的实施符合当今国际上倡导的有关动物实验的新理念,经过摸索,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾部血液正染性红细胞(normochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。该方法操作简便,动物消耗量小、对实验室空气无明显影响,适合于医学遗传学或普通遗传学教学中有关微核的观察实验。

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《医学分子细胞生物学》的教学实践与探索

湖北中医学院学报 2009年第4期11卷 71-73页

作者：赵刚倪娅徐云丹湖北中医学院基础医学院医学生物学教研室湖北武汉430065

医学分子细胞生物学(Medical Molecular Cell Biology,MMCB)是我院近三年来在七年制各专业本科生中开设的一门现代基础医学课程,内容涉及细胞生物学和分子生物学两大学科.

关键词：医学分子细胞生物学课程教学改革实践

四君子汤对肝癌细胞株Bel-7402生长抑制作用的研究

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湖北中医杂志 2007年第6期29卷 5-6页

作者：徐云丹赵刚湖北中医学院湖北武汉430061

目的:探讨四君子汤对人肝癌细胞株Bel-7402的生长抑制作用,为临床上应用该药治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法:以3种不同剂量的四君子汤药物分别作用于不同实验组培养中的人肝癌Bel-7402细胞株24小时,用基于酶标仪的MTT法检测活细胞中甲... 详细信息

目的:探讨四君子汤对人肝癌细胞株Bel-7402的生长抑制作用,为临床上应用该药治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法:以3种不同剂量的四君子汤药物分别作用于不同实验组培养中的人肝癌Bel-7402细胞株24小时,用基于酶标仪的MTT法检测活细胞中甲瓒形成所产生的光密度值,从而判断四君子汤药物对癌细胞生长的影响。结果:四君子汤对人肝癌细胞株Bel-74002的生长具有明显的抑制作用,而且这种抑制效应呈现浓度的依赖性。结论:四君子汤能抑制肝癌细胞株Bel-7402的生长,并在一定浓度范围内呈现出剂量效应。

关键词：四君子汤肝癌细胞生长抑制

四君子汤与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞生长的抑制效应

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湖北中医药大学学报 2017年第4期19卷 16-19页

作者：徐云丹赵刚湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065

目的探索传统中药复方四君子汤与临床常用化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)联用对体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,为临床上应用四君子汤作为5-FU的增效剂联合治疗结肠癌提供实验依据。方法将体外培养的结肠癌HT-29细胞分成不含药血清... 详细信息

目的探索传统中药复方四君子汤与临床常用化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)联用对体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,为临床上应用四君子汤作为5-FU的增效剂联合治疗结肠癌提供实验依据。方法将体外培养的结肠癌HT-29细胞分成不含药血清对照组、5-FU组、高剂量四君子汤血清加5-FU组、中剂量四君子汤血清加5-FU组和低剂量四君子汤血清加5-FU组5组。将制备好的四君子汤含药血清和5-FU按所需的剂量分别加入到各组培养瓶中作用于细胞24h,应用基于酶标仪的MTT方法检测各组细胞的OD值,计算不同浓度药物处理对细胞生长的抑制率。结果四君子汤血清与5-FU联用能显著抑制结肠癌HT-29细胞的生长(均P<0.01),且高剂量四君子汤血清与5-FU合用组细胞生长抑制率显著高于5-FU单用组(P<0.01)。四君子汤血清与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞周期的运行产生显著的影响。结论四君子汤可以增强5-FU对结肠癌HT-29细胞的生长作用和细胞周期的干扰作用。

关键词：结肠癌HT-29细胞生长抑制四君子汤氟尿嘧啶细胞周期

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符合实验教学新理念的小鼠微核实验

符合实验教学新理念的小鼠微核实验

姜黄素与5-FU联用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：徐云丹倪娅赵刚湖北中医药大学-基础医学院-医学生物学教研室

微核试验(micronucleus test,MNT)是细胞遗传学和遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物遗传毒性的快速检测中具有重要应用价值。因此,小鼠骨髓细胞微核标本制备与观察是细胞生物学或遗传学实验教学中的一个... 详细信息

微核试验(micronucleus test,MNT)是细胞遗传学和遗传毒理学研究中快速检测染色体损伤的一种常用方法,在各种化合物遗传毒性的快速检测中具有重要应用价值。因此,小鼠骨髓细胞微核标本制备与观察是细胞生物学或遗传学实验教学中的一个重要项目。目前,国内高校开设的小鼠微核实验多以骨髓多染性红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)作为观察对象,在微核实验时,一般2人一组使用1只经过诱变剂处理的小鼠,经过处死动物、剥离股骨、收集骨髓、细胞涂片、甲醇固定、Giemsa染色等环节完成制片、然后在显微镜下观察。按2个学生一只小鼠计算,一个50人的班级做一次微核实验需要消耗25只小鼠。按照有关实验的现代理念,这种传统的小鼠微核教学实验设计存在明显弊端。其一是动物消耗量较大,不符合动物实验新理念的3R原则(reduction减少、replacement替代、refinement优化)。该原则的第一要求就是在实验中尽可能减少动物的使用量,提高实验动物的利用率。其二,在实验中使用的甲醇对人体具有一定毒性,且挥发性强,易污染实验室的空气。为了克服传统小鼠微核教学实验的这两个弊端,使该项目的实施符合当今国际上倡导的有关动物实验的新理念,经过摸索,我们建立了无需处死动物,不使用甲醇的小鼠尾血正染性红细胞(norrnochromatic erythrocyte,NCE)微核实验方法。该方法操作简便,动物消耗量小、对实验室空气无明显影响,适合作为细胞生物学或遗传学的微核教学实验。方法:①小鼠微核的诱导:每个学生实验室分配2～3只小鼠,每只小鼠按2mg/kg的剂量腹腔注射丝裂霉素C溶液,作用48h;②尾部取血:先用手从小鼠尾巴的近端捋向远端,使尾巴充血。剪去尾巴的2～3mm的尾尖,让流出血滴(5～10μL)直接粘附到一张载玻片上;③血涂片制备:按常规方法制备小鼠血液的涂片。重新捋动小鼠的尾巴,挤出血液制备第二张涂片;如此重复进行,使一只小鼠的尾血制备出10张以上的血涂片;④干燥与同定:在空气中挥动血涂片使其快速干燥。再浸入无水乙醇中固定5min左右,取出晾干;⑤染色:用Giemsa染液染色3min左右;⑥观察:在显微镜的高倍镜下观察并计数1000个NCE细胞,记录含有微核的NCE细胞数,计算微核率。转换油镜仔细观察微核大小和形态。镜下可见,NCE细胞呈现淡桔黄色,所含微核呈小球形,紫红色,与同一玻片标本中有核细胞的细胞核在着色性上一致。讨论:PCE细胞是NCE细胞的前身,当小鼠骨髓中的红系干细胞经过数次分裂后会逐渐脱去细胞核转变成PCE细胞,再进一步发育成NCE细胞。在此过程中,如果细胞的染色体在有害理化因子的作用下发生断裂等畸变,则受累细胞会保留由染色体断片形成的微核。如果PCE细胞含有微核,则由PCE发育而来并最终进入外周血的NCE细胞也会保留该微核。因此,在开展小鼠微核的教学实验时,完全可以用外周血NCE细胞替代骨髓PCE细胞作为微核观察的靶细胞。在小鼠外周血液中,NCE细胞有较大比例,容易辨认,观察方便,是微核教学实验中一种较为理想的靶细胞。而PCE细胞在外周血中的比例很小,不易寻找,辨认相对困难。利用小鼠尾巴微量全血制备微核标本,既可大幅减少小鼠使用量,又可在不处死动物的前提下重复利用同一只动物,可用于不同时间的不同处理条件下小鼠细胞微核率的检测。实验成本也得到大幅度降低。甲醇是小鼠骨髓细胞微核实验中传统的细胞固定剂,但对人体有毒且挥发性强,对实验者的身体会产生一定影响。本着在教学实验中倡导绿色与环保的理念,我们用对人体无明显危害的乙醇替代了甲醇作为细胞固定剂。实验结果表明,乙醇作固定剂所制备的的微核标本质量与用甲醇作固定剂的完全相同。另外,本方法的程序较为简便,明显减少了实验操作步骤,可使学生在实验课上能较快地制备好微核标本,从而有较多时间在显微镜下寻找辨认含有微核的NCE细胞,并仔细观察微核的形态与大小。

关键词：微核实验新理念实验教学

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世界科学技术-中医药现代化 2015年第6期17卷 1203-1209页

作者：刘骥徐云丹赵刚湖北中医药大学基础医学院/中药复方与中药资源省部共建教育部重点实验室武汉430065

目的:探索姜黄素与中低剂量化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对胃癌MGC-803细胞生长、细胞凋亡和细胞周期的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药5-FU的增效剂,以减少5-FU使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法:应用MTT检测法检测药... 详细信息

目的:探索姜黄素与中低剂量化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对胃癌MGC-803细胞生长、细胞凋亡和细胞周期的影响,为临床上应用姜黄素作为胃癌化疗药5-FU的增效剂,以减少5-FU使用剂量、降低其毒副作用提供实验依据。方法:应用MTT检测法检测药物作用对MGC-803细胞的抑制作用;应用基于AO/EB双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞凋亡的影响;应用基于PI单染的流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞周期的影响。结果:姜黄素(25μmol·L-1)分别与低剂量(2.4μmol·L-1)和中剂量(4.8μmol·L-1)的5-FU联合作用能有效地抑制MGC-803细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期,并呈剂量-时间的依赖关系。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果显著优于中剂量(4.8μmol·L-1)5-FU单用组(P<0.01),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果显著优于高剂量(9.6μmol·L-1)5-FU单用组(P<0.01),提示姜黄素能显著增强5-FU抗胃癌MGC-803细胞的作用,并呈剂量-时间的依赖关系。结论:本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗胃癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。

关键词：姜黄素 5-FU MGC-803细胞生长抑制细胞凋亡细胞周期