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惠州日报

作者：黄尉宏彭灼芳

走进惠阳区三和街道，一边是热火朝天的高标准厂房建设场面;一边是马力全开的智能化生产景象，让人感受到这片土地制造业发展奋进的力量。三和街道是惠阳（象岭）智慧科技产业园的主阵地，是惠阳区重点打造的“3+7”千亿级产业园组团，... 详细信息

走进惠阳区三和街道，一边是热火朝天的高标准厂房建设场面;一边是马力全开的智能化生产景象，让人感受到这片土地制造业发展奋进的力量。三和街道是惠阳（象岭）智慧科技产业园的主阵地，是惠阳区重点打造的“3+7”千亿级产业园组团，在实施“百千万工程”中充分结合自身优势

关键词：经营性收入都市圈惠阳区行政村科技产业园

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分泌型PD-1抗体可提高c-Met CAR-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

引用

南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1976-1984页

作者：闵静婷彭上杜娜娜安然甄翔程曹佳威周陈航李正红蚌埠医科大学基础医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学公共基础学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学临床医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学口腔医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学生命科学学院安徽蚌埠233000

目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、... 详细信息

目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达,流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后,构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒,慢病毒感染至活化T细胞内,通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群;Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在;体外功能试验中,通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率,CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果生信分析结果显示,胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织(P<0.01);c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关(P<0.01)。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示,胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织(P<0.01);流式细胞术结果显示,Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%,琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子;流式细胞术和Western blotting显示,成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示,PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示,靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01);ELISA结果显示,PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建,并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。

关键词：嵌合抗原受体T细胞 c-Met PD-1分泌型抗体胰腺癌

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