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抗核心脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放IL-1及其mRNA表达的影响

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中国免疫学杂志 1997年第5期13卷 262-265页

作者：俞晓峰黄策彭善云军事医学科学院微生物流行病研究所军事医学科学院基础医学研究所

采用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ等方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＩＬ－１及其ｍＲ－ＮＡ表达水平的影响。结... 详细信息

采用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ等方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＩＬ－１及其ｍＲ－ＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＩＬ－１的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能降低ＩＬ－１ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ作用于效应细胞，从而降低或阻碍了效应细胞中ＩＬ－１ｍＲＮＡ的表达，达到抑制细胞释放ＩＬ－１的作用。

关键词：脂多糖 PCR McAb 白细胞介素1

血管生成素相互作用蛋白的发现及其在哺乳动物细胞中的验证

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 429-433页

作者：徐东刚马百坤李莉邹民吉彭善云王嘉玺军事医学科学院基础医学研究所北京100850 南京军区总医院全军医学检验中心南京210002 大连医科大学第二附属医院血液科大连116023

通过RT PCR从人外周血白细胞中钓取血管生成素 (angiogenin ,Ang)cDNA ,构建诱饵蛋白载体 pAS 2 1 Ang ,对其自身转录激活活性进行鉴定后 ,通过酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库 ,获得两个双阳性克隆 .序列分析和同源检索表明所获... 详细信息

通过RT PCR从人外周血白细胞中钓取血管生成素 (angiogenin ,Ang)cDNA ,构建诱饵蛋白载体 pAS 2 1 Ang ,对其自身转录激活活性进行鉴定后 ,通过酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库 ,获得两个双阳性克隆 .序列分析和同源检索表明所获候选蛋白分别为人上皮细胞素和λ晶体蛋白 .构建Ang及候选蛋白标签融合表达载体并共转染COS 7细胞 ,利用免疫共沉淀和蛋白质印迹方法在哺乳动物细胞中验证了Ang与候选蛋白间的相互作用 .

关键词：血管生成素相互作用蛋白哺乳动物细胞验证酵母双杂交免疫共沉淀肿瘤新生血管生成

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APAAP—ELISA试验条件的优选

中国免疫学杂志 1991年第5期7卷 298-302页

作者：卢秀桂白炎彭善云军事医学科学院基础医学研究所北京100850

报导了APAAP—ELISA的影响因素,优选了实验最佳条件,在此基础上完成了与传统ELISA的平行对比实验,指出了APAAP—ELISA之优缺点,强调了发展和推广该技术急需克服的问题。

关键词： APAAP ELISA 试验条件

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF－α和IL－6及其mRNA表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第5期16卷 363-366页

作者：俞晓峰黄策彭善云凌世淦军事医学科学院微生物流行病学研究所

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，... 详细信息

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ，从而降低或阻碍了效应细胞炎性细胞因子ｍＲＮＡ的表达，达到降低相应细胞因子的作用。

关键词：脂多糖单克隆抗体细胞因子基因表达

内毒素性急性肺损伤大鼠白细胞介素-6含量改变

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中国病理生理杂志 1997年第6期13卷 729-731页

作者：刘林英孙滨彭善云吕宝璋西安第四军医大学西京医院呼吸内科西安710032 北京军事医学科学院基础医学研究所北京100850

采用白细胞介素-6（Interleukin6，IL－6）依赖细胞株7TD1及MTT比色法，动态观察了正常及内毒素注射后不同时间大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）中IL－6含量的变化；同时，还对各组大鼠的肺体指数和BAL... 详细信息

采用白细胞介素-6（Interleukin6，IL－6）依赖细胞株7TD1及MTT比色法，动态观察了正常及内毒素注射后不同时间大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）中IL－6含量的变化；同时，还对各组大鼠的肺体指数和BALF中蛋白质含量进行了测定。结果显示，大鼠注射内毒素后1、3、6、12h，其血清和BALF中IL－6含量急剧升高（P＜0．01），注射后24h降为正常（P＞0．05）；此外，其肺体指数和BALF中蛋白质含量亦明显高于对照组，尤以3h和6h显著（P＜0．01）；且内毒素致伤后大鼠血清和BALF中IL－6含量的升高与BALF中蛋白质含量的升高呈显著正相关。推测IL－6可能参与了肺水肿的形成，其机制有待进一步探讨.

关键词：白细胞介素6 内毒素呼吸窘迫综合征

抗核心糖脂域MAb对脓毒症小鼠存活及其血中LPS、TNF-a和IL-6水平的影响

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中华传染病杂志 1997年第1期15卷 12-15页

作者：俞晓峰黄策彭善云凌世淦何君李云军事医学科学院微生物流行病研究所军事医学科学院基础医学研究所

为进一步探讨抗核心糖脂域单克隆抗体（ＭＡｂ）的免疫保护效果及其可能的作用机制，以小鼠脓毒症为模型，用产色鲎试验法和细胞因子活性检测等方法，研究了抗核心糖脂域ＭＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对实验性脓毒症小鼠的存活及其... 详细信息

为进一步探讨抗核心糖脂域单克隆抗体（ＭＡｂ）的免疫保护效果及其可能的作用机制，以小鼠脓毒症为模型，用产色鲎试验法和细胞因子活性检测等方法，研究了抗核心糖脂域ＭＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对实验性脓毒症小鼠的存活及其血中ＬＰＳ、ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６水平的影响。结果表明，这三株ＭＡｂ均能显著提高受ＬＰＳ及Ｅ．ｃｏｌｉ攻击小鼠的存活率（Ｐ＜０．０５）；且有明显降低小鼠血中ＬＰＳ、ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６水平的作用，提示抗核心糖脂域ＭＡｂ的保护作用与其中和ＬＰＳ的活性，从而达到降低ＬＰＳ诱导小鼠效应细胞释放炎性细胞因子的作用有关。

关键词：脂多糖单克隆抗体细胞因子脓毒症白细胞介素

重组人可溶性B淋巴细胞刺激因子及其突变体的克隆、表达及活性测定

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生物化学与生物物理学报 2002年第6期34卷 731-736页

作者：陈光宇邹民吉彭善云王嘉玺军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所北京100850

采用RT PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (humansolubleBlym phocytestimulator,hsBLyS)的cDNA片段 ,再运用基因重组手段 ,利用通用型质粒pBV2 2 0构建表达载体pBV2 2 0 /hsBLyS。经测序鉴定后 ,以之为模... 详细信息

采用RT PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (humansolubleBlym phocytestimulator,hsBLyS)的cDNA片段 ,再运用基因重组手段 ,利用通用型质粒pBV2 2 0构建表达载体pBV2 2 0 /hsBLyS。经测序鉴定后 ,以之为模板使用重叠PCR法扩增得到hsBLyS的两个点突变体hsBY A(Cys14 6→Ala14 6)和hsBY V (Cys14 6→Val14 6)的基因片段 ,构建表达载体 pBV2 2 0 /hsBY A及 pBV2 2 0 /hsBY V。经测序无误后 ,将上述 3种载体分别转化大肠杆菌DH5α并诱导重组蛋白质表达 ,薄层扫描结果显示 3种蛋白质在DH5α中表达量都在 2 0 %～ 30 %之间。再分别运用变性、凝胶过滤层析及复性等手段纯化目的蛋白质 ,最后通过B淋巴细胞增殖实验检测纯化产物促人B细胞增殖的活性。实验结果表明 ,3种重组蛋白质都能明显刺激人B细胞增殖 ;统计学检验显示 ,突变体rhsBY V较野生型rhsBLyS的促人B淋巴细胞增殖活性显著增强。

关键词： hsBLyS 突变体原核表达包涵体细胞增殖

胶质细胞源性神经营养因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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军事医学科学院院刊 1999年第4期23卷 256-258页

作者：王金惠王嘉玺彭善云段聚宝邹民吉军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的：分离胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）基因，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。方法：从人多形性成胶质细胞瘤细胞株ＢＴ３２５中提取... 详细信息

目的：分离胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）基因，并在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。方法：从人多形性成胶质细胞瘤细胞株ＢＴ３２５中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离ＧＤＮＦ基因，构建表达载体ｐＢＶ－ＧＤＮＦ，转化大肠杆菌，温控诱导ＧＤＮＦ的表达。结果与结论：分离得到的人ＧＤＮＦ基因，在大肠杆菌中得到高效表达，表达产物占全菌总蛋白的２４．７％，初步纯化后纯度达９０％以上。

关键词：基因表达 GDNF 克隆大肠杆菌

KGF-2与PRO2605蛋白相互作用的初步研究

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军事医学科学院院刊 2004年第5期28卷 433-436页

作者：白秉学徐东刚王金凤彭善云邹民吉范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :利用酵母双杂交系统筛选KGF 2的相互作用蛋白 ,为阐明其分子作用机制提供有益线索。方法 :通过聚合酶链反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体pAS2 1 KGF 2 ,并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交... 详细信息

目的 :利用酵母双杂交系统筛选KGF 2的相互作用蛋白 ,为阐明其分子作用机制提供有益线索。方法 :通过聚合酶链反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体pAS2 1 KGF 2 ,并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库 ,挑选双阳性克隆。将KGF 2和候选蛋白分别克隆至哺乳动物细胞双杂交的BD、AD质粒中 ,共同转染COS 7细胞 ,通过CAT分析验证KGF 2和候选蛋白之间的相互作用。结果 :VDNA序列分析和同源检索显示所获候选蛋白为PRO2 6 0 5。以KGF 2和PRO2 6 0 5cDNA共转化酵母宿主Y190后可激活报道基因 ,但共转染COS 7细胞后 ,CAT分析结果阴性。结论 :KGF 2和PRO2 6 0 5在酵母体内存在相互作用 ,但在COS 7细胞中未能检测到两者的相互作用。

关键词：角质细胞生长因子相互作用蛋白酵母双杂交 PRO2605蛋白