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λ拟操纵基因的克隆

微生物学报 1985年第2期25卷 141-145页

作者：张其玖中国科学院生物物理研究所

以HindⅢ和EcoRI双重酶解pDG51质粒DNA制备了29个硷基对DNA片段。该DNA片段含有17个硷基对λ拟操纵基因(pseudooperator),其一端为HindⅢ接头,另一端为EcoRI接头。29个硷基对片段与pBR325质粒连接、转化、筛选获得克隆pQH100(AP~r Tc~r ... 详细信息

以HindⅢ和EcoRI双重酶解pDG51质粒DNA制备了29个硷基对DNA片段。该DNA片段含有17个硷基对λ拟操纵基因(pseudooperator),其一端为HindⅢ接头,另一端为EcoRI接头。29个硷基对片段与pBR325质粒连接、转化、筛选获得克隆pQH100(AP~r Tc~r Cm~3)。pQH100DNA分别以HindⅢ,EcoRI单独酶解或双重酶解,经凝胶电泳分析,其结果表明,pQH100DNA含有两个λ拟操纵基因,这两个DNA片段在HindⅢ位点上,以头对头的方式相连。

关键词：拟操纵基因克隆

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化学修饰对青霉素G酰化酶活性的影响

生物化学杂志 1991年第6期7卷 667-670页

作者：陈红颜茂恭张其玖中国科学院生物物理研究所北京100080

为进一步阐明大肠杆菌AE 109青霉素G酰化酶(PA,E.C.3.***.1.11)的结构与功能关系,研究了数种修饰剂对酶活性的影响;同时测定了四种作用物存在下对各修饰剂修饰酶的影响。结果表明Ser残基处于酶的活性部位,Met残基可能处于与底物结合的部位... 详细信息

为进一步阐明大肠杆菌AE 109青霉素G酰化酶(PA,E.C.3.***.1.11)的结构与功能关系,研究了数种修饰剂对酶活性的影响;同时测定了四种作用物存在下对各修饰剂修饰酶的影响。结果表明Ser残基处于酶的活性部位,Met残基可能处于与底物结合的部位,His和Cys残基与酶的活性无关。

关键词：青霉素酰化酶 PA 化学修饰酶活性

大肠杆菌青霉素G酰化酶Trp^(572)残基的定点突变研究

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科学通报 1992年第10期37卷 939-942页

作者：费俭张懋弧王应魁郭礼和张其玖中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031 中国科学院生物物理研究所北京100101

大肠杆菌青霉素G酰化酶(PGA,EC3、5、1、11)催化青酶素G侧链的水解,是半合成抗生素工业中的重要应用酶。生物合成的PGA由一个α亚基和一个β亚基共同组成,它的一级结构已全部搞清,但其空间结构尚未见报道。

关键词：青霉素酰化酶定点突变 PGA

青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响

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实验生物学报 1991年第1期24卷 51-54页

作者：王敏费俭郭礼和张其玖中国科学院上海细胞生物学研究所中国科学院生物物理研究所

用盒式突变和定点突变对大肠杆菌青霉素G酰化酶α亚基177位ser进行了突变研究,结果发现所挑选的突变体均无酶的活力,这一结果可能可以用来解释Ser 177附近肽段和一些青霉素结合蛋白青霉素结合区在一级结构上保持同源性的原因。

关键词：青霉素酰化酶 α亚基点突变

大肠杆菌AE109青霉素G酰化酶的分离纯化及性质研究

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生物化学杂志 1990年第4期6卷 327-333页

作者：张其玖颜茂恭陈红赵武玲中国科学院生物物理研究所北京农业大学生物工程学院

由发酵培养液所得大肠杆菌AE109菌体,先经高渗休克处理,继经D-苯甘氨酸-Sepharose 4B和DEAE-纤维素柱层析分离纯化得到青霉素G酰化酶,酶制品在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带,而且可以结晶。在SDS变性条件下解离为α和... 详细信息

由发酵培养液所得大肠杆菌AE109菌体,先经高渗休克处理,继经D-苯甘氨酸-Sepharose 4B和DEAE-纤维素柱层析分离纯化得到青霉素G酰化酶,酶制品在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带,而且可以结晶。在SDS变性条件下解离为α和β两个亚基。酶性质的研究结果表明,由大肠杆菌工程菌AE109菌株所得青霉素G酰化酶与其亲本大肠杆菌AS1.76菌株所得青霉素G酰化酶性质相同。

关键词：大肠杆菌青霉素酰化酶分离纯化

大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达

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Acta Genetica Sinica 1990年第5期17卷 390-397页

作者：谭华荣何松庄增辉薛禹谷张其玖中国科学院微生物研究所中国科学院生物物理所

本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化*** HB101(Xy1^-,Neo(?)),得到的... 详细信息

本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化*** HB101(Xy1^-,Neo(?)),得到的重组质粒被命名为pX1203(7.2kb);将pX1203与穿梭质粒载体pSE-3分别用HindⅢ酶解,T_4DNA连接酶连接,转化*** HB101,在含有新霉素的木糖培养基上筛选到转化重组体,其重组质粒被命名为pSE×100(10.6kb);把pSE×100转化变铅青链霉菌TK54的原生质体,在硫链丝菌肽(50μg/ml)和新霉素(50μg/ml)的平皿上得到了重组体。经质粒提取,酶切分析,再转化和葡萄糖异构酶活性测定,结果表明,大肠杆菌的葡萄糖异构酶基因确实已在链霉菌中克隆和表达。

关键词：基因克隆葡萄糖异构酶全连霉菌

大肠杆菌AS1.76青霉素G酰化酶基因的克隆和定位

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微生物学报 1988年第1期28卷 40-44页

作者：张其玖张兰芳韩恒湘陈兰香韩建洪刘琼中国科学院生物物理研究所宜昌市生物技术开发中心

通过DNA体外重组,由E. coli As 1.76菌株染色体DNA获得了青霉素G酰化酶基因克隆。测定了pPGA20质粒的限制性内切酶图谱,并构建了若干个pPGA20的变种。这些变种的酶活力及其酶切位点关系的分析结果表明,青霉素G酰化酶基因定位在HindⅢ和... 详细信息

通过DNA体外重组,由E. coli As 1.76菌株染色体DNA获得了青霉素G酰化酶基因克隆。测定了pPGA20质粒的限制性内切酶图谱,并构建了若干个pPGA20的变种。这些变种的酶活力及其酶切位点关系的分析结果表明,青霉素G酰化酶基因定位在HindⅢ和SmaⅠ酶切位点之间小于2.8Kb DNA片段上。

关键词：青霉素G酰化酶限制性内切酶图谱基因定位

产蛋白酶枯草杆菌的选育及应用研究——Ⅰ.菌种筛选及产酶条件初步试?

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微生物学通报 1987年第4期 163-165页

作者：李传友张其玖中国科学院微生物研究所中国科学院微生物研究所北京北京中国科学院生物物理所

从沟泥等土样中分离筛选到四株蛋白酶高产菌株,进行了产酶条件复筛试验,其中枯草杆菌N1025在45℃摇瓶培养24小时酶活可达3400u/ml,该酶具有良好的脱丝胶性能。此菌培养温度高,生长周期短,具有较大的生产潜力。

关键词：枯草杆菌蛋白酶蚕丝脱胶

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大肠杆菌D-木糖异构酶基因的序列分析

生物工程学报 1990年第4期6卷 300-306页

作者：侯永敏张其玖王书锦中国科学院应用生态研究所中国科学院生物物理研究所

大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包... 详细信息

大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包括长度为1320bp编码440个氨基酸的蛋白质。此外,在其5'端尚有209个核苷酸和3'端82个核苷酸,它们分别含有核糖体结合位点SD序列和D-木糖异构酶基因转录终止区。

关键词： D-木糖异构酶酶基因序列分析