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基于AKP、OCT-4染色技术的新生牛精原干细胞多能性的确定

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中国畜牧杂志 2013年第19期49卷 29-32页

作者：郑鹏于娜田亚光黄贺张贵学东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030

用AKP、OCT-4染色技术鉴定精原干细胞的多能性,以期为牛精原干细胞的深入研究奠定基础。将新生牛睾丸解离成单细胞悬液,差速贴壁法纯化精原干细胞,并用RT-PCR和免疫组化的方法鉴定分离的细胞;分离后的精原干细胞进行体外培养,形成集落... 详细信息

用AKP、OCT-4染色技术鉴定精原干细胞的多能性,以期为牛精原干细胞的深入研究奠定基础。将新生牛睾丸解离成单细胞悬液,差速贴壁法纯化精原干细胞,并用RT-PCR和免疫组化的方法鉴定分离的细胞;分离后的精原干细胞进行体外培养,形成集落后转移到支持细胞饲养层上继续培养,形成集落后进行AKP、OCT-4染色鉴定多能性。结果表明:分离纯化后的精原干细胞表达精原干细胞的标志基因PGP9.5,不表达GDNF的受体基因GFRa1,精原干细胞的AKP、OCT-4染色呈阳性;精原干细胞体外培养可形成葡萄串状细胞集落和类ES细胞集落,葡萄串状细胞集落转移到支持细胞饲养层上能在GDNF培养液中增殖,类ES细胞集落转移到支持细胞饲养层上能在LIF培养液中增殖,细胞集落AKP、OCT-4染色呈阳性。

关键词： OCT-4 鉴定精原干细胞体外培养牛

肉桂醛对小鼠U14宫颈癌组织中PI3K表达的影响

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中成药 2017年第1期39卷 188-191页

作者：尹兴忠赵冬梅刘蕾王培军张贵学东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 佳木斯大学基础医学院黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154003

目的研究肉桂醛对小鼠U14宫颈癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)表达的影响。方法建立U14宫颈癌移植瘤小鼠模型,随机分为4组,每组20只,即阴性对照组,环磷酰胺组,肉桂醛低(60 mg/kg)、高剂量组(240 mg/kg),不间断给药14 d。用HE染色法、免... 详细信息

目的研究肉桂醛对小鼠U14宫颈癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)表达的影响。方法建立U14宫颈癌移植瘤小鼠模型,随机分为4组,每组20只,即阴性对照组,环磷酰胺组,肉桂醛低(60 mg/kg)、高剂量组(240 mg/kg),不间断给药14 d。用HE染色法、免疫组化法、RT-PCR以及Western blot方法检测。结果灌胃14 d后肉桂醛组小鼠肿瘤较阴性对照组明显受到抑制,生命体征较阴性对照组和环环磷酰胺组得到明显的改善,肿瘤抑制率分别为肉桂醛低、高剂量组40.17%、49.32%,环磷酰胺组65.06%,同时肿瘤组织中PI3K表达下降。结论肉桂醛能抑制U14荷瘤鼠瘤体生长,提高小鼠的生存质量。

关键词：肉桂醛宫颈癌 PI3K

大学生创业意识形成的影响因素研究——以东北农业大学动物科学技术学院为例

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第9期 232-234页

作者：杨波张晗王岩王博书黄恩东张贵学东北农业大学高等教育研究所哈尔滨150036 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150036

为了对动物科学技术学院大学生的创业意识影响因素进行研究,对人才培养方案的制订和修订提供理论和实践依据,笔者使用SPSS 22.0软件的主成分分析的方法进行数据整理和主成分提取。结果表明:成熟创业意识主要形成于大四学生群体。在影响... 详细信息

为了对动物科学技术学院大学生的创业意识影响因素进行研究,对人才培养方案的制订和修订提供理论和实践依据,笔者使用SPSS 22.0软件的主成分分析的方法进行数据整理和主成分提取。结果表明:成熟创业意识主要形成于大四学生群体。在影响大学生创业意识的原因中,个人的综合因素影响较大;同时家人、亲友的支持,以及及时有效的政策支持能更好地鼓励学生创业。说明创业课程应主要设在大四学年,同时要对学生进行创业动机的激发和引导。

关键词：东北农业大学动物科学技术学院大学生创业意识影响因素主成分分析法

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新生牛睾丸支持细胞的体外培养及鉴定分析

吉林农业大学学报 2013年第1期35卷 63-66页

作者：于磊郑鹏荣恩光于娜田亚光张贵学东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

为探究支持细胞的体外培养特性,以新生牛睾丸组织为试验材料,利用组合酶消化法将其解离成单细胞悬液,并采用差速贴壁法纯化支持细胞后进行体外培养与鉴定。结果表明:支持细胞体外培养能够传至第20代,并且随着传代次数的增加,支持细胞的... 详细信息

为探究支持细胞的体外培养特性,以新生牛睾丸组织为试验材料,利用组合酶消化法将其解离成单细胞悬液,并采用差速贴壁法纯化支持细胞后进行体外培养与鉴定。结果表明:支持细胞体外培养能够传至第20代,并且随着传代次数的增加,支持细胞的增殖速度越来越慢;添加2%血清浓度的DMEM/F-12的培养基即可用于支持细胞的体外培养;免疫组化染色显示,所培养的细胞内波形蛋白呈阳性;RT-PCR检测结果可见支持细胞标志基因SCF和GDNF的表达;第15代的支持细胞内含有正常的二倍体核型。

关键词：牛睾丸支持细胞体外培养鉴定

孕酮和雌二醇对Hela细胞防御素DEFA1和DEFB1的影响

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中国畜牧杂志 2018年第11期54卷 63-65页

作者：张晗马铭钧黄富硕王皓郑鹏张贵学东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

实验旨在通过雌二醇和孕酮处理Hela细胞,模拟卵泡期和黄体期体内生理变化,探究细胞防御素α1(DEFA1)与防御素β1(DEFB1)表达与发情周期变化的关系。使用不同浓度的雌二醇(0、0.1、5、10ng/mL)和孕酮(0、20、40、60ng/mL)处理细胞,荧光定... 详细信息

实验旨在通过雌二醇和孕酮处理Hela细胞,模拟卵泡期和黄体期体内生理变化,探究细胞防御素α1(DEFA1)与防御素β1(DEFB1)表达与发情周期变化的关系。使用不同浓度的雌二醇(0、0.1、5、10ng/mL)和孕酮(0、20、40、60ng/mL)处理细胞,荧光定量PCR检测DEFA1与DEFB1基因的表达,Western-Blot检测DEFA1蛋白的表达。结果表明:雌二醇能促进Hela细胞DEFA1和DEFB1的表达,浓度为10 ng/mL时促进效果较强(P<0.05);孕酮能抑制Hela细胞DEFA1和DEFB1的表达,60 ng/mL孕酮抑制效果较强(P<0.05)。综上,Hela细胞的防御素DEFA1和DEFB1随卵泡期雌二醇的升高而增加,随黄体期孕酮的升高而降低。

关键词：雌二醇孕酮 Hela细胞发情周期防御素

鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达

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中国兽医学报 2002年第4期22卷 365-367页

作者：刘颖施振旦黄运茂于迎春张细权张贵学东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 华南农业大学动物科学学院广东广州510642

将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,... 详细信息

将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p PRL- RSET。鸡 INB- α片段经扩增后分别被克隆到质粒 p RSET A和 p PRL- RSET的 Nhe 和 Xho 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p INB- RSET和 p INB- PRL。以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的 PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒 p PRL- RSET和 p INB- PRL 转化 E.coli BL2 1(DE3)株 ,IPTG诱导后所表达的产物经 SDS- PAGE显示 ,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符。质粒 p PRL - RSET和 p INB- PRL的表达产物和用 Ni- NTA凝胶纯化的 2重组蛋白产物都可与抗鸡 PRL 抗体产生特异的免疫印迹 ,并且表达菌裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。结果说明 ,试验已成功完成了鸡 PRL、INB-α及 2者融合蛋白的构建。

关键词：催乳素抑制素-α亚基鸡重组基因融合蛋白基因表达

专业兴趣和培养环境是提升高等农业教育质量的关键

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东北农业大学学报（社会科学版） 2012年第6期10卷 32-34页

作者：张贵学东北农业大学哈尔滨黑龙江150030

文章探讨了"专业兴趣和培养环境"在人才成长过程中的作用。农业院校在人才培养过程中,要考虑学生的专业兴趣,在高考录取时应按志愿录取到相应专业,或者按大类招生再分专业,允许学生选专业、调专业、转学或退学;对专业进行新陈代谢,根据... 详细信息

文章探讨了"专业兴趣和培养环境"在人才成长过程中的作用。农业院校在人才培养过程中,要考虑学生的专业兴趣,在高考录取时应按志愿录取到相应专业,或者按大类招生再分专业,允许学生选专业、调专业、转学或退学;对专业进行新陈代谢,根据社会人才需求增加专业或淘汰专业;依据教师的特长对教师进行分类,即教学型、科研型和推广型教师。院校联合通过"网上授课互认学分"以拓展选修课平台;校—企、校—场联合办学,建立教学、科研基地,为学生创新创业等能力提高提供平台。

关键词：专业兴趣培养环境农业院校

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干扰素α对离体奶牛黄体细胞孕酮合成的影响

东北农业大学学报 2015年第6期46卷 56-60页

作者：张金友曾申明赵栓张贵学东北农业大学动物科技学院哈尔滨150030 黑龙江省农垦科学院畜牧兽医研究所哈尔滨150038 中国农业大学动物科技学院北京100193

奶牛黄体合成的孕酮对于维持妊娠至关重要。机体感染后产生的抗炎活性成分干扰素α(IFN-α)对奶牛妊娠产生不利影响。文章旨在研究干扰素α对奶牛黄体细胞合成孕酮功能的影响。奶牛中期黄体经机械分离和酶消化处理后分离出黄体细胞,在... 详细信息

奶牛黄体合成的孕酮对于维持妊娠至关重要。机体感染后产生的抗炎活性成分干扰素α(IFN-α)对奶牛妊娠产生不利影响。文章旨在研究干扰素α对奶牛黄体细胞合成孕酮功能的影响。奶牛中期黄体经机械分离和酶消化处理后分离出黄体细胞,在体外培养条件下,添加IFN-α对黄体细胞基础孕酮和促黄体素(LH)刺激后的孕酮合成水平进行研究。结果表明,IFN-α可降低牛黄体细胞基础孕酮合成水平,还减弱LH对黄体细胞孕酮合成的刺激作用。结果显示,体内的IFN-α可通过直接作用于黄体细胞影响奶牛黄体孕酮分泌水平。

关键词：干扰素黄体细胞孕酮奶牛

两类农业院校动物科学专业人才培养方案比较研究

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黑龙江畜牧兽医 2016年第11期 255-256页

作者：王博书王立秋张贵学东北农业大学高等教育研究所哈尔滨150030

文章以两个层次四所农业院校的动物科学专业的人才培养方案为研究对象,探讨不同层次院校课程体系和学分分配的差异,以期为动物科学专业人才培养方案的制订和修订提供理论和实践依据。211院校动物科学专业的人才培方案应提高实验实践课... 详细信息

文章以两个层次四所农业院校的动物科学专业的人才培养方案为研究对象,探讨不同层次院校课程体系和学分分配的差异,以期为动物科学专业人才培养方案的制订和修订提供理论和实践依据。211院校动物科学专业的人才培方案应提高实验实践课程比重,增加专业创业课程设置,相对压缩专业基础教育比重,以提升学生的实践能力和创业意识。

关键词：农业院校动物科学专业人才培养方案课程体系学分对策