检索结果-南通市图书馆

基于RT-dd PCR技术的食品中诺如病毒定量检测

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食品科学 2022年第20期43卷 313-320页

作者：徐蕾蕊李丹汪琦马丹魏咏新魏海燕赵晓娟张西萌曾静中国海关科学技术研究中心北京100026

目的:构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)技术的食品中诺如病毒(norovirus,NoV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步法RT-ddPCR检测体系,确定特异性。利用NoV RNA标准物质和MS2噬菌体RNA确认RT-ddPCR检测体系的定量限、准确度和重复性。制备人工阳性样品,分析MS2噬菌体对定量结果的影响。结果:3个RT-ddPCR检测体系具有良好的特异性、准确度和重复性,NoV RT-ddPCR检测体系的定量限包含10~4~10~0拷贝/μL 5个数量级,MS2噬菌体RT-ddPCR检测体系定量限与NoV相当,添加与不添加MS2噬菌体的人工阳性样品的定量结果无显著差异(P≥0.05)。结论:NoV RT-ddPCR检测体系可准确定量NoV RNA,MS2噬菌体不影响定量结果,可作为过程控制的模式病毒被添加到食品中,指示回收率,计算食品中NoV实际载量。

关键词：逆转录微滴式数字聚合酶链式反应诺如病毒 MS2噬菌体回收率

食品中单核细胞增生李斯特菌微滴数字PCR定量检测方法建立

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中国食品卫生杂志 2022年第5期34卷 937-942页

作者：魏咏新马丹董益阳魏海燕李丹张西萌郭云昌李薇薇裴晓燕宋悦谦中国海关科学技术研究中心北京100026 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 国家食品安全风险评估中心北京100021 内蒙古伊利实业集团股份有限公司北京100070

目的建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法。方法筛选单核细胞增生李斯特氏菌的特异性引物和探针,通过对目标菌纯菌液及人工污染样品的检测,比较ddPCR方法和平板计数法的定值效果,对dd... 详细信息

目的建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法。方法筛选单核细胞增生李斯特氏菌的特异性引物和探针,通过对目标菌纯菌液及人工污染样品的检测,比较ddPCR方法和平板计数法的定值效果,对ddPCR结果进行特异性、灵敏性和重复性分析。结果本研究建立的单核细胞增生李斯特氏菌ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。单核细胞增生李斯特氏菌纯菌液中定量限(LOQ)和检出限(LOD)均为136 CFU/mL,在鱿鱼圈和香肠样品中定量限分别为240 CFU/g和155 CFU/g。ddPCR在各梯度水平上变异系数均小于25%,ddPCR和平板计数定值对数值相对偏差均小于30%。结论本研究建立的ddPCR方法能够快速、准确、灵敏、特异地定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌微滴式数字聚合酶链式反应定量限检出限

副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及其活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第7期29卷 734-738页

作者：张蕾张西萌张海予魏海燕马丹刘雪松曹栋曾静北京出入境检验检疫局北京100026 北京农学院北京102206 北京大学实验动物中心北京100871

目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细... 详细信息

目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VpNo.1～VpNo.6,抗体效价高达1∶2×106。对抗体进行了Ig类和亚类检测以及Western blot法鉴定,其Ig亚类依次为IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为42 000并且纯度较高。采用VpNo.6抗体建立了副溶血性弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌进行特异性实验,结果表明134株副溶血性弧菌呈阳性反应,74株非副溶血性弧菌呈阴性反应,VpNo.6抗体具有非常好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为21 CFU/g样品。结论成功制备了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非副溶血性弧菌没有交叉反应。

关键词：副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体双抗夹心ELISA

海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立

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中国食品学报 2015年第2期15卷 168-173页

作者：程晋霞曾静张西萌张蕾刘莉张海予北京出入境检验检疫局北京100026 北京农学院北京102206

目的:采用纳米免疫磁珠分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌环介导等温扩增检测方法,以缩短检测时间。方法:采用本实验室制备的霍乱弧菌单克隆抗体制备纳米免疫磁珠,特异性吸附霍乱弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立霍乱弧菌快速检测方法。结果:... 详细信息

目的:采用纳米免疫磁珠分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌环介导等温扩增检测方法,以缩短检测时间。方法:采用本实验室制备的霍乱弧菌单克隆抗体制备纳米免疫磁珠,特异性吸附霍乱弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立霍乱弧菌快速检测方法。结果:霍乱弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度103CFU/m L水平,对霍乱弧菌的捕获率最高达70%。免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌的情况下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L菌液。通过测试102株霍乱弧菌和101株非目标菌,该检测方法均具有良好的特异性。在食品基质添加试验中,其检测限为1 CFU/25g样品,增菌时间缩短到8 h。结论:霍乱弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术缩短了增菌时间。目标菌纯培养、无需增菌条件下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L增菌液。人工添加样品,8 h增菌条件下,检测低限达到1 CFU/25 g样品。

关键词：免疫磁分离霍乱弧菌环介导等温扩增

食品中致泻大肠埃希氏菌多重实时荧光PCR检测方法的建立与验证

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中国口岸科学技术 2023年第S2期 89-100页

作者：魏咏新张西萌李二鹏马丹汪琦赵晓娟李丹魏海燕中国海关科学技术研究中心拉萨海关技术中心

本研究建立了食品中致泻大肠埃希氏菌的多重实时荧光PCR定性检测方法，通过检测多种类人工污染样品进行方法验证。设计并筛选致泻大肠埃希氏菌14个目标基因的引物和探针，确定多重实时荧光PCR反应条件，同时用PCR和多重实时荧光PCR方法... 详细信息

本研究建立了食品中致泻大肠埃希氏菌的多重实时荧光PCR定性检测方法，通过检测多种类人工污染样品进行方法验证。设计并筛选致泻大肠埃希氏菌14个目标基因的引物和探针，确定多重实时荧光PCR反应条件，同时用PCR和多重实时荧光PCR方法检测208株菌的14个目标基因，对不同浓度的阳性样本进行多重实时荧光PCR重复性检测，对结果进行灵敏度、特异性、准确度及重复性分析。PCR和多重实时荧光PCR方法检测7种食品类别的15种人工污染食品基质，验证多重实时荧光PCR方法在食品检测致泻大肠埃希氏菌的可行性。多重实时荧光PCR方法的灵敏度为100%,uidA特异性为97.1%，准确度为99.5%,eae特异性为94.8%，准确度为95.2%，其余12个目标基因的特异性、准确度均100%，两种检测方法的结果判定一致。多重实时荧光PCR方法在检测范围内各浓度水平上变异系数均小于2%，线性关系良好。结果表明，建立的多重实时荧光PCR方法能够灵敏、特异、准确、高效地定性检测食品中致泻大肠埃希氏菌。

关键词：致泻大肠埃希氏菌(DEC) 多重实时荧光PCR 方法建立方法验证

进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株耐药性研究

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中国食品卫生杂志 2013年第4期25卷 320-323页

作者：张西萌曾静魏海燕付溥博韩笑北京出入境检验检疫局北京100026

目的对进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株的耐药性进行研究。方法采用纸片扩散法对99株克罗诺阪崎肠杆菌分离株和1株标准菌株进行药敏性试验,共选择7大类20种抗生素。结果所测试的100株菌株对美洛西林、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素... 详细信息

目的对进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株的耐药性进行研究。方法采用纸片扩散法对99株克罗诺阪崎肠杆菌分离株和1株标准菌株进行药敏性试验,共选择7大类20种抗生素。结果所测试的100株菌株对美洛西林、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、氯霉素、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星和诺氟沙星敏感;对苯唑西林产生耐药;对头孢噻吩、氨苄西林、头孢唑啉、和四环素具有不同程度的耐药性,耐药率分别为65.0%、17.0%、3.0%和2.0%;对头孢唑啉、头孢噻吩、氨苄西林、头孢曲松和四环素中介率分别为25.0%、23.0%、6.0%、2.0%和1.0%;13株对3种抗生素耐药,4株表现多重耐药性。结论进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株对所测试的大多数抗生素敏感,但对苯唑西林全部耐药,对部分抗生素出现较高的耐药和多重耐药性,因此克罗诺阪崎肠杆菌的耐药性应引起广泛的社会关注。

关键词：乳制品克罗诺阪崎肠杆菌耐药性食源性致病菌

食品中Escherichia coli O157:H7微滴数字PCR绝对定量检测方法的建立

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食品科学 2020年第16期41卷 259-265页

作者：魏咏新马丹李丹徐蕾蕊魏海燕张西萌刘莉曾静北京海关技术中心北京100026

为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对E.coli O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时... 详细信息

为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对E.coli O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时通过人工污染三文鱼样品的检测,比较平板计数法、real-time PCR和ddPCR方法的测定值效果。结果表明,所建立的E.coli O157:H7 ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液中定量限为105 CFU/mL,检出限为25 CFU/mL,人工污染三文鱼样品中检出限为110 CFU/g。对不同人工污染水平的三文鱼样品,ddPCR与平板计数的测定值结果无显著性差异(P>0.05),比real-time PCR方法的测定值结果更加稳定、准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够更加快速、准确、灵敏、特异地绝对定量检测食品中E.coli O157:H7。

关键词： Escherichia coli O157:H7 微滴数字聚合酶链式反应实时聚合酶链式反应定量限检出限

3D人工皮肤模型用于化学品皮肤刺激性实验的评估

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卫生研究 2014年第1期43卷 149-151页

作者：马丹赵晓娟付溥博张西萌魏海燕刘莉曾静北京出入境检验检疫局北京100026

目的采用"EpiSkin"3D人工皮肤模型,对20种化学品的刺激性进行评价。方法 20种化学品(固体10 mg、液体10μl)局部接触检测模型表面15 min,用MTT方法测定细胞活力。结果以相对细胞活力值为判定刺激性的依据,在20种化学品中,检测模型特异性... 详细信息

目的采用"EpiSkin"3D人工皮肤模型,对20种化学品的刺激性进行评价。方法 20种化学品(固体10 mg、液体10μl)局部接触检测模型表面15 min,用MTT方法测定细胞活力。结果以相对细胞活力值为判定刺激性的依据,在20种化学品中,检测模型特异性为70%,灵敏度为90%。结论 "EpiSkin"3D人工皮肤模型能正确分类所测试的化学品,可以尝试用于化学品皮肤刺激性测试。

关键词： EpiSkin 刺激性化学品替代实验

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星状病毒核酸检测标准物质的研制

食品科学 2016年第6期37卷 172-177页

作者：徐蕾蕊魏海燕林长军马丹汪琦张西萌李丹付溥博刘莉魏永新赵晓娟曾静北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心北京100026 辽宁出入境检验检疫局辽宁大连116001

目的：研制用于食品中星状病毒核酸检测的c RNA标准物质。方法：利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒c RNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2种标准物质样品。采用实... 详细信息

目的：研制用于食品中星状病毒核酸检测的c RNA标准物质。方法：利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒c RNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2种标准物质样品。采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应（real-time-polymerase chain reaction,RTPCR）方法检验2种标准物质样品均匀性和稳定性。样品中RNA浓度（拷贝/μL）通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果：均匀性结果显示2种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义（P〉0.05）。稳定性检验表明20-25℃10 d、4℃14 d、-20℃3个月及-80℃和液氮6个月2种样品c RNA含量无显著变化。RNAsafe（-）标准物质定值为：（1.652±0.143）×10^8拷贝/μL（-80℃）和（1.652±0.135）×10-8拷贝/μL（液氮）。结论：RNAsafe（-）标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质。

关键词：星状病毒核酸定量实时聚合酶链式反应数字聚合酶链式反应标准物质