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组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研究

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组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研...

作者：张蕴芳南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种新近发现的具有Kunitz型结构的丝氨酸蛋白酶抑制物,它在人体内主要由构成血管的内皮细胞、平滑肌细胞以及成纤维细胞等合成,并分泌至细胞外基质(extra... 详细信息

背景与目的组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种新近发现的具有Kunitz型结构的丝氨酸蛋白酶抑制物,它在人体内主要由构成血管的内皮细胞、平滑肌细胞以及成纤维细胞等合成,并分泌至细胞外基质(extracellular matrix,ECM)。TFPI-2在体外可强烈抑制纤溶酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等多种蛋白水解酶活性,并能抑制由纤溶酶催化的基质金属蛋白酶原proMMP-1和proMMP-3的活化,但以往的研究证实其对基质金属蛋白酶(MatrixMetalloproteinases,MMPs)如MMP-1的活性并无直接抑制作用。研究还发现某些哺乳动物膀胱上皮可分泌TFPI-2,但其意义尚不清楚。业已证实,ECM被降解是肿瘤细胞浸润转移过程中的关键一步,而肿瘤细胞分泌的纤溶酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等多种丝氨酸蛋白酶则在ECM降解中起重要作用。有研究表明,转TFPI-2基因纤维母细胞瘤细胞在SCID小鼠体内的生长速度明显滞后于未转染的瘤细胞,并且肺内转移率下降。有意义的是,通过实时荧光定量RT-PCR检测发现,转TFPI-2基因肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达水平低于未转染者3-6倍。已知VEGF作为血管新生的正调控因子,特异性作用于血管内皮细胞的有丝分裂,刺激血管内皮细胞增殖和迁移,促进新生血管生长。上述结果说明TFPI-2在体内抑制肿瘤浸润生长和远处转移的作用,可能与其抑制VEGF的表达进而导致肿瘤血管新生减少有关。此后有研究者发现,转染TFPI-2的神经胶质瘤在体内的微血管形成受到抑制,在体外则毛细血管样结构生成减少,进一步提示TFPI-2可能参与肿瘤血管新生的调控。最近,在TFPI-2和VEGF相互关系方面又有新的研究进展,实时定量PCR和蛋白印迹分析显示,VEGF上调血管内皮细胞TFPI-2 mRNA和TFPI-2蛋白的表达,而且该调控作用呈现时间和剂量依赖性。反之,TFPI-2蛋白以剂量依赖方式抑制VEGF刺激内皮细胞增殖的作用以及VEGF诱导的内皮细胞迁移。此结果揭示TFPI-2可能以负反馈机制参与VEGF的调控。综上所述,TFPI-2抑制某些实体肿瘤VEGF的表达以及依赖于VEGF的血管内皮细胞增殖和迁移,具有潜在的抗血管新生作用。多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)作为造血系统常见恶性肿瘤之一,是严重威胁中老年人群健康的恶性疾病。近年来因为其发病率的上升但治疗手段有限而颇受关注。MM的发病机制复杂,其中血管新生是MM发生、发展非常重要的一个方面。血管新生与浆细胞标记指数呈正相关而与骨髓瘤患者的生存期呈负相关。由骨髓瘤细胞产生的促血管新生因子如VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)等与骨髓基质细胞(bone marrowstromal cells,BMSCs)、内皮细胞一起共同参与了多发性骨髓瘤血管新生。研究表明多发性骨髓瘤患者骨髓及外周血VEGF水平升高,而且血清VEGF与疾病分期和预后相关。因此,下调VEGF的表达水平进而抑制骨髓瘤血管新生,已成为治疗多发性骨髓瘤的有效措施之一。本研究旨在通过基因转染技术将TFPI-2基因导入MM细胞株,比较转染TFPI-2基因的细胞与转空质粒的细胞VEGF和VEGFmRNA的表达以及影响BMSCs分泌VEGF的差异,为MM的治疗提供新思路。研究方法 1.细胞转染取对数生长期U266细胞,接种于用纤连蛋白包被的24孔培养板,每孔5×10个,培养24小时后用无血清RPMI-1640培养基洗涤2次转染前备用。用Lipofectamine 2000脂质体介导的基因转染技术将重组表达载体pcDNA3.0/TFPI-2和单纯表达载体pcDNA3.0转染到U266细胞。将前者设为实验组,后者为对照组。分别用含200 mg/L、400 mg/L、600 mg/L、800mg/L G418的全培养液抗性筛选,浓度为600 mg/LG418的全培养液筛选良好,阳性克隆继续在含400mg/L G418的培养液中传代培养,约经6周后,即可获得稳定筛选,用于下述体外试验。 2.细胞培养 ①实验组和对照组的U266细胞以1×10细胞/ml/孔接种于48孔板中,在1%FBS的RPMI-1640中培养72小时后,收集上清,1500rpm离心5分钟,上清保存于-20℃冰箱,ELISA法检测VEGF浓度,细胞保存于-80℃冰箱中,供RT-PCR实验用。 ②BMSCs消化后,以1×10细胞/ml/孔接种于48孔板,以含10%FBS的DMEM培养液培养24h后弃去

关键词：多发性骨髓瘤组织因子途径抑制物-2 血管内皮生长因子骨髓间质细胞

组织因子途径抑制物-2影响多发性骨髓瘤血管内皮生长因子表达的研究

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广东医学 2010年第5期31卷 546-547页

作者：张蕴芳杜新许云陶小梅李明卓家才广东省深圳市第二人民医院血液科 518035 南方医科大学

目的研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法通过脂质体转染技术将pcDNA3.0/TFPI-2或pcDNA3.0导入多发性骨髓瘤细胞株,分别设为实验组和对照组,用ELISA法测定实验组和对照... 详细信息

目的研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法通过脂质体转染技术将pcDNA3.0/TFPI-2或pcDNA3.0导入多发性骨髓瘤细胞株,分别设为实验组和对照组,用ELISA法测定实验组和对照组上清液中VEGF水平以及骨髓基质细胞(BMSCs)与实验组和对照组细胞共同培养分泌的VEGF蛋白的差异,以实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RQ-PCR)法测定实验组和对照组细胞内VEGF mRNA的表达。结果实验组VEGF、细胞内VEGF mRNA的表达未见明显差异,实验组与骨髓基质细胞共同培养的VEGF水平低于对照组。结论TFPI-2基因可能间接抑制BMSCs产生和分泌VEGF。

关键词：多发性骨髓瘤组织因子途径抑制物-2 血管内皮生长因子骨髓基质细胞

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新生儿20项神经行为测定的相关因素

中国临床康复 2004年第18期8卷 3570-3571页

作者：陈光福蔡茵莎欧文闻张蕴芳深圳市第二人民医院儿科广东省深圳市518035

目的:探讨新生儿20项神经行为测定(neonatalbehavioralneurologicalas-sessment,NBNA)的影响因素。方法:应用鲍秀兰等建立的新生儿20项行为神经评价方法于足月儿出生后、早产儿纠正胎龄40周后第3,7,14,28d分别进行80例次NBNA测定,每次N... 详细信息

目的:探讨新生儿20项神经行为测定(neonatalbehavioralneurologicalas-sessment,NBNA)的影响因素。方法:应用鲍秀兰等建立的新生儿20项行为神经评价方法于足月儿出生后、早产儿纠正胎龄40周后第3,7,14,28d分别进行80例次NBNA测定,每次NBNA测定前进行血糖,血清K+,Na+,Cl-,Ca2+,P2-,血红蛋白、尿素氮、肌酐、总胆红素、未结合胆红素、乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)、肌酸激酶、肌红蛋白等检查,同时测量身长、体质量。结果:胎龄、体质量、血糖、血Na+与NBNA评分呈正相关(r=0.76,0.52,0.38,0.46)。血清总胆红素、未结合胆红素、LDH、肌酸激酶、尿素氮和肌酐与NBNA评分呈负相关(r=-0.72,-0.73,-0.34,-0.39,-0.28,-0.25),Apgar评分与NBNA评分密切相关(r=0.78)。结论:胎龄、体质量、Apgar评分、高胆红素血症、血糖、血钠、乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平与NBNA评分及新生儿神经伤残密切相关。

关键词：儿童发育婴儿新生神经病学检查相互影响分析

基于德国职业教育专业教学论的学习性工作任务的开发策略

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职教论坛 2018年第9期34卷 63-66页

作者：谢丽英张蕴芳胡晓梅江苏省吴江中等专业学校教务处江苏省吴江中等专业学校江苏省宿豫中等专业学校

德国职业教育专业教学论是研究"工作""技术"和"职业教育"之间相互作用的一门学科理论,学习性工作任务是其核心的要素。根据布卢姆教育目标分类学,我们提供了学习性工作任务的通用结构和设计方法,以及学习性工作任务的形成、组织与三个等... 详细信息

德国职业教育专业教学论是研究"工作""技术"和"职业教育"之间相互作用的一门学科理论,学习性工作任务是其核心的要素。根据布卢姆教育目标分类学,我们提供了学习性工作任务的通用结构和设计方法,以及学习性工作任务的形成、组织与三个等级,提出了研读德国职业教育专业教学理论和一般教学理论、下企业顶岗实践与开展社会服务、运用信息技术创新开发手段和开发技术的策略。

关键词：专业教学论学习性工作任务开发策略

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小山村里,飘起了彩裙

师范教育 1985年第1期 45-46页

作者：张蕴芳

“青青穿上裙子啦!”这一特大新闻,在这个三百多口人的清河村里,已经家喻户晓,无人不知啦!每天晚上,村子南面的公路上特别热闹。瞧,男人们又照例地摇着扇子,天南海北扯开了;女人们呢,自有拉话的内容。听,她们正议论谁家的姑娘模样俊呢!... 详细信息

“青青穿上裙子啦!”这一特大新闻,在这个三百多口人的清河村里,已经家喻户晓,无人不知啦!每天晚上,村子南面的公路上特别热闹。瞧,男人们又照例地摇着扇子,天南海北扯开了;女人们呢,自有拉话的内容。听,她们正议论谁家的姑娘模样俊呢!小燕燕从二婶怀里钻出来大声喊:“青青才俊呢!”有人接茬:“太出格了,‘怪老张’惯坏的!”“青青穿裙子就是美,百里挑一!”读过书的二婶说,“等两天,给俺燕燕也买一条!”

关键词：姑娘清河村女儿连衣裙裙子

婴儿喂养方式与儿童支气管哮喘关联性的meta分析

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临床儿科杂志 2013年第2期31卷 186-189页

作者：张蕴芳汪丽萍陈光福深圳市第二人民医院儿科广东深圳518035 广州南方医院妇产科广东广州510515

目的探讨婴儿母乳喂养与儿童时期发生支气管哮喘有无关联性。方法检索儿童发生支气管哮喘与婴儿时期是否母乳喂养的病例对照研究文献，进行meta分析。结果符合纳入标准的文献共有10篇，国外研究4篇，国内研究6篇。分析发现，母乳喂养婴... 详细信息

目的探讨婴儿母乳喂养与儿童时期发生支气管哮喘有无关联性。方法检索儿童发生支气管哮喘与婴儿时期是否母乳喂养的病例对照研究文献，进行meta分析。结果符合纳入标准的文献共有10篇，国外研究4篇，国内研究6篇。分析发现，母乳喂养婴儿在儿童时期发生哮喘的风险相对于非母乳喂养婴儿显著降低（OR=O．78，95％CI=0，65～0．93）。进一步行亚组分析，发现支气管哮喘风险降低主要出现在中国儿童研究中（oR=o．64，95％CI=0．48～O．85），而在非中国儿童研究中，母乳喂养并不能降低支气管哮喘发病风险（OR=I．00，95％CI=0．94～1．07）。结论婴儿期母乳喂养，可以有效降低中国儿童发生哮喘的风险。

关键词：母乳喂养 DC-SIGN 哮喘儿童

硼替佐米联合地塞米松治疗复发难治多发性骨髓瘤的临床观察

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实用医学杂志 2009年第13期25卷 2151-2152页

作者：张蕴芳杜新汪鹏程蔡云李明卓家才广东省深圳市第二人民医院南方医科大学附属深圳医院 518035 南方医科大学

目的:观察硼替佐米联合地塞米松治疗复发、难治多发性骨髓瘤(MM)患者的疗效和不良反应。方法:5例复发、难治MM患者,男2例,女3例,平均年龄58.6(38～75)岁。在为期3周的疗程内第1、4、8和11天给予硼替佐米1.0～1.3mg/m2次静脉注射,第1～4... 详细信息

目的:观察硼替佐米联合地塞米松治疗复发、难治多发性骨髓瘤(MM)患者的疗效和不良反应。方法:5例复发、难治MM患者,男2例,女3例,平均年龄58.6(38～75)岁。在为期3周的疗程内第1、4、8和11天给予硼替佐米1.0～1.3mg/m2次静脉注射,第1～4天予地塞米松40mg静脉滴注。患者分别接受2～6个疗程的治疗。采用EBMT标准观察疗效,并按NCICTCAE(第3版)标准判断不良反应。结果:4例患者对治疗有效,其中1例完全缓解,3例部分缓解,1例病情进展。不良反应方面,1例出现腹胀,经对症治疗后好转。2例出现2级周围神经病变。1/5例出现2次血小板减少,分级分别为4级和3级。2例发生短暂的2～3级白细胞减少,未进行特殊处理。结论:硼替佐米联合地塞米松是一种对复发、难治MM的新的治疗选择,不良反应较少。

关键词：多发性骨髓瘤难治性硼替佐米地塞米松

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早产儿脑损伤早期干预模式与临床路径研究

中国当代儿科杂志 2014年第1期16卷 35-39页

作者：陈光福张蕴芳陈美清王晓丽龙琦孔琦毛恒深圳市第二人民医院深圳大学第一附属医院儿科广东深圳518035

目的探讨早产儿脑损伤早期干预模式与临床路径的临床应用效果，以降低早产儿脑损伤神经伤残的发生率。方法2008年3月至2010年2月出生的早产儿117例纳入该研究，根据随机原则分为临床路径组（n=63）和对照组（n=54）。临床路径组定期发... 详细信息

目的探讨早产儿脑损伤早期干预模式与临床路径的临床应用效果，以降低早产儿脑损伤神经伤残的发生率。方法2008年3月至2010年2月出生的早产儿117例纳入该研究，根据随机原则分为临床路径组（n=63）和对照组（n=54）。临床路径组定期发育监测、脑损伤筛查、营养神经治疗、神经发育和康复训练。对照组按照常规早期干预方案进行。结果6个月至1岁临床路径组姿势、反射、睡眠、肌张力和脑电图检查异常发生率明显低于对照组（P〈0．05）；临床路径组在纠正月龄6～24个月时智力发育指数（MDI）和运动发育指数（PDI）明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。3岁时临床路径组脑性瘫痪、语言障碍、肌张力异常、听力异常发生率明显低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论多学科紧密结合的早期干预模式与临床路径较对照组明显改善早产儿脑损伤的智能和运动发育水平，可进一步降低d,JL脑性瘫痪等神经伤残发生率。

关键词：早期干预脑损伤神经发育临床路径早产儿

酒店专业中高职衔接课程“一体化横纵延伸扩展模式”的实践研究

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时代教育 2017年第8期 83-84页

作者：谢丽英张蕴芳江苏省吴江中等专业学校教务处江苏省吴江中等专业学校

中高职教育衔接是建立现代职教体系的重要途径。"一体化横纵延伸扩展模式",是指一体化设计中高职衔接人才培养方案,使中高职教育既相对独立又突出层次的递进升级和面的扩展延伸,使学校人才培养的目标与规格既符合市场需要又符合学生的... 详细信息

中高职教育衔接是建立现代职教体系的重要途径。"一体化横纵延伸扩展模式",是指一体化设计中高职衔接人才培养方案,使中高职教育既相对独立又突出层次的递进升级和面的扩展延伸,使学校人才培养的目标与规格既符合市场需要又符合学生的个性发展需要。

关键词：酒店专业中高职衔接课程 “一体化横纵延伸扩展模式” 实践研究