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河北省田间果蔬中新型李斯特氏菌污染分布研究

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核农学报 2024年第1期38卷 122-133页

作者：王纯张若鸿李晓然王晓芳刘绍军杨洋崔生辉郭云昌河北科技师范学院食品科技学院河北秦皇岛066600 中国食品药品检定研究院北京100050 国家食品安全风险评估中心北京100022

为掌握河北省田间果蔬中新型李斯特氏菌的污染特征,本研究采用中国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局发布的GB 4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》、美国食品药品监督管理... 详细信息

为掌握河北省田间果蔬中新型李斯特氏菌的污染特征,本研究采用中国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局发布的GB 4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》、美国食品药品监督管理局-细菌学分析手册、美国农业部和国际标准化组织公布的李斯特氏菌(Listeria spp.)的检测方法,对从河北省6个主要果蔬种植基地采集的5种蔬菜和4种水果(共27000份)进行李斯特氏菌定性检测,采用GB 4789.30-2016中的平板计数法对单核细胞增生李斯特氏菌阳性样品进行定量检测。结果表明,Listeria marthii(0.41%)、Listeria thailandensis(0.25%)和Listeria fleischmannii(0.17%)3种新型李斯特氏菌的检出率较高,其他近年新发现的12种李斯特氏菌(Listeria newyorkensis、Listeria floridensis、Listeria rocourtiae、Listeria weihenstephanensis、Listeria valentina、Listeria aquatica、Listeria riparia、Listeria cornellensis、Listeria grandensis、Listeria booriae、Listeria costaricensis和Listeria goaensis)存在于不同田间果蔬中。定量分析发现,多数单核细胞增生李斯特氏菌阳性样品的污染水平为0~100 CFU·g^(-1)。本研究首次针对新型李斯特氏菌在田间果蔬中进行了大范围的污染分布研究,发现不同的新型李斯特氏菌存在于不同的田间果蔬中,传统李斯特氏菌在田间果蔬中的污染风险依旧存在,为进一步控制和预防田间果蔬中新型李斯特氏菌的污染传播奠定了数据基础。

关键词：新型李斯特氏菌果蔬田间污染

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绿色木霉液体发酵对大青叶中功能成分影响研究

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绿色木霉液体发酵对大青叶中功能成分影响研究

作者：张若鸿河北农业大学

学位级别：硕士

研究人员发现许多野菜具有降血压、降血脂、抗氧化、抑制肿瘤、降低胆固醇含量、防治心血管疾病等功能,大青叶就是具有这样特点的山野菜种类。鉴于植物的有效成分往往包裹在细胞壁内,功能成分的利用率大大降低,而细胞壁的主要成分是纤维... 详细信息

研究人员发现许多野菜具有降血压、降血脂、抗氧化、抑制肿瘤、降低胆固醇含量、防治心血管疾病等功能,大青叶就是具有这样特点的山野菜种类。鉴于植物的有效成分往往包裹在细胞壁内,功能成分的利用率大大降低,而细胞壁的主要成分是纤维素,所以用纤维素酶破坏植物细胞壁,可以提高有效成分提取率和利用效率。真菌可以通过分泌到胞外的游离纤维素酶来水解纤维素。采用霉菌发酵产生纤维素酶,将被细胞壁包裹的功能成分释放出来,可以提高山野菜中的有效成分含量,最大程度的提高功能性成分的利用效率。因此,本文对大青叶中的β-葡聚糖、黄酮等功能成分进行了检测,建立了这些有效成分的检测方法;同时,对利用微生物发酵来提高这些有效成分含量的技术进行了研究,结果如下: 检测表明,大青叶冻干粉中含有β-葡聚糖、黄酮等可降血压、降血糖以及降胆固醇的成分。与通用刚果红测定方法相比,用HPLC检测β-葡聚糖可以克服刚果红测定方法实际操作中的费时费力,β-葡聚糖不易被充分提取,显色体系不稳定等问题,且采用HPLC检测β-葡聚糖结果稳定可靠,操作更加简便、快捷。基于国家药典提供的黄酮检测程序,本项研究摒弃了普遍采用的1%AlCl3显色浓度,改进采用0.1%AlCl3的显色浓度,采用紫外分光光度法测定黄酮含量,不仅做到了测定结果稳定可靠,而且克服了原测定方法带来的测试结果均为负值、显色不稳定的问题。对绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.4004发酵大青叶汁液提高β-葡聚糖、黄酮的含量的研究结果表明,经菌株发酵后,大青叶发酵液中的β-葡聚糖、黄酮含量有了很大提高;确定了绿色木霉适宜的发酵工艺条件为葡萄糖10g/L,尿素0.300g/L,起始pH 5.5,摇床转速150r/min,发酵温度28℃,接种量5%。在此发酵工艺条件下,大青叶中的β-葡聚糖含量由起始的0.71mg/ml增加到31.66mg/ml,黄酮含量由0.51mg/ml增加到0.96mg/ml;同时,经发酵后,大青叶冻干粉中获得了原先未检测到的果糖成分。

关键词：大青叶 β-葡聚糖黄酮绿色木霉AS3.4004 发酵

应用型大学建设背景下高校实验室安全管理体系构建

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中文科技期刊数据库（全文版）社会科学 2022年第9期 125-128页

作者：张若鸿杨洋刘畅刘绍军李军河北科技师范学院河北秦皇岛066004

应用型大学建设在我国如火如荼展开,各种配套资源建设也不断扩大,实验室成为最重要的建设场所之一,作为教学、科研、产学研活动的主要场所,使得高校实验室的使用频率、实验室功能、仪器设备、实验原材料、实验废弃物等显著增加,为实验... 详细信息

应用型大学建设在我国如火如荼展开,各种配套资源建设也不断扩大,实验室成为最重要的建设场所之一,作为教学、科研、产学研活动的主要场所,使得高校实验室的使用频率、实验室功能、仪器设备、实验原材料、实验废弃物等显著增加,为实验室安全管理带来了巨大隐患和挑战。本文以河北科技师范学院食品科技学院实验室安全管理体系构建进行总结与探讨,为应用型大学建设背景下高校实验室安全管理体系构建提供一定的经验和理论基础。

关键词：应用型大学实验室高校安全管理

食品微生物检验课程中案例教学研究——以“微生物挑战实验原则及应用”为例

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2023年第10期 48-51页

作者：杨洋张若鸿刘畅刘绍军李军河北科技师范学院河北秦皇岛066000

食品安全案例教学法应用于食品微生物检验课程中,可以有效提高学生对于食品微生物检验课程中理论联系实践能力。文章以美国牛排烹饪食品安全标准制定修订作为真实案例,阐述了致病性大肠杆菌O157:H7污染牛排后,由于相关的牛排烹饪食品安... 详细信息

食品安全案例教学法应用于食品微生物检验课程中,可以有效提高学生对于食品微生物检验课程中理论联系实践能力。文章以美国牛排烹饪食品安全标准制定修订作为真实案例,阐述了致病性大肠杆菌O157:H7污染牛排后,由于相关的牛排烹饪食品安全标准制定过程中的人为实验设计失误,导致美国消费者饱受食源性疾病伤害的根本原因,进而深入讲解相关微生物挑战实验原则及应用。通过这一案例教学法,成功地将微生物挑战实验中所涉及的各种设计环节关键因素(研究对象cocktail culture制备、食品样品选择规则、人工污染样品的不同接种细菌方法、样品经过最终处理后微生物存活测定原则等)对学生进行了生动讲解,确保学生较好的掌握了相关专业知识技能,建立完整的食品微生物知识体系,将学生所学的相关专业技能有机串联结合,有效提升学生专业自信心,进而更好的提升了教学质量。

关键词：食品微生物检验食品安全案例教学法微生物挑战实验食品安全

乳制品中金黄色葡萄球菌PCR快速检测方法的建立

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核农学报 2022年第6期36卷 1193-1203页

作者：王纯张若鸿王晓芳李晓然尹树仁杨洋崔生辉郭云昌河北科技师范学院食品科技学院河北秦皇岛066600 中国食品药品检定研究院北京100050 国家食品安全风险评估中心北京100022

为快速检测乳制品中的金黄色葡萄球菌,本研究将纳米氢氧化钛和纳米氢氧化锆固定在滤纸片上以去除PCR反应抑制因子,并以Nuc为靶基因,建立一种无需样品前增菌的PCR快速检测方法,同时确定该方法的特异性、灵敏度和实用性,并评估该方法所用... 详细信息

为快速检测乳制品中的金黄色葡萄球菌,本研究将纳米氢氧化钛和纳米氢氧化锆固定在滤纸片上以去除PCR反应抑制因子,并以Nuc为靶基因,建立一种无需样品前增菌的PCR快速检测方法,同时确定该方法的特异性、灵敏度和实用性,并评估该方法所用试剂在冷冻保存条件下的稳定性与实用性。结果表明,该PCR快速检测方法在检测97株目标菌及83株非目标菌后未出现假阳性或假阴性结果;该方法无需增菌处理,可在4 h内完成检测,检测限为10^(1)CFU·25 g^(-1)或10^(1)CFU·25 mL^(-1);该方法与传统检测方法在实际乳制品样品中金黄色葡萄球菌的检出率及活菌检测率均一致(符合率100%);此外,该检测方法所用试剂在-20℃冷冻条件下可稳定保存至少12个月。综上所述,本研究建立的PCR快速检测方法特异性强、灵敏度高,且实用性良好,能有效去除样品基质中的PCR反应抑制因子,为乳制品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了参考依据。

关键词：纳米氢氧化钛纳米氢氧化锆 PCR 乳制品金黄色葡萄球菌

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叶类蔬菜中单核细胞增生李斯特氏菌PCR快速检测方法的建立

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核农学报 2022年第10期36卷 2009-2018页

作者：李晓然张若鸿王纯尹树仁王晓芳杨洋崔生辉郭云昌河北科技师范学院食品科技学院河北秦皇岛066600 中国食品药品检定研究院北京100050 国家食品安全风险评估中心北京100022

为建立一种无需样品前增菌即可快速检测叶类蔬菜中单核细胞增生李斯特氏菌的聚合酶链式反应(PCR)方法,本试验将β-环糊精和牛乳蛋白包被活性炭结合用于去除叶类蔬菜基质中的PCR反应抑制因子,从而促进该菌的回收,随后以iap为靶基因,进行... 详细信息

为建立一种无需样品前增菌即可快速检测叶类蔬菜中单核细胞增生李斯特氏菌的聚合酶链式反应(PCR)方法,本试验将β-环糊精和牛乳蛋白包被活性炭结合用于去除叶类蔬菜基质中的PCR反应抑制因子,从而促进该菌的回收,随后以iap为靶基因,进行PCR检测,确定该方法的特异性、灵敏度和实用性,并评估该方法所用主要试剂在冷冻条件下的稳定性。结果表明,与prfA序列相比,该方法检测78株目标菌和63株非目标菌后,无假阳性或假阴性结果,特异性为100%;该方法无需前增菌,可在4 h内完成检测,灵敏度为10~1 CFU·25g^(-1);该方法与常规培养法在实际叶类蔬菜样品中目标菌的检出率、活体菌检测率均一致(符合率100%);所用的主要试剂在-20℃冰箱中保存至少12个月后仍可正常使用,稳定性较好。综上,该方法可快速、灵敏、特异地检测叶类蔬菜中的单核细胞增生李斯特氏菌,且实用性较好。本研究结果为降低单核细胞增生李斯特氏菌对消费者造成的安全风险提供了技术支持。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌 β-环糊精牛乳蛋白包被活性炭叶类蔬菜 PCR

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食源性疾病监测体系对比及前景展望

卫生研究 2019年第6期48卷 1024-1031页

作者：张若鸿(综述) 杨洋李晓然郭云昌(审校) 河北科技师范学院秦皇岛066600 国家食品安全风险评估中心北京100022

食源性疾病监测目的在于减少食源性疾病负担。在全世界,有几种不同类型的监测体系,包括基于事件监测、基于指标监测和完整食物链监测。基于事件监测体系利用非正规数据,占用资源最少。基于指标监测体系,依据常规化收集数据,是传统法定... 详细信息

食源性疾病监测目的在于减少食源性疾病负担。在全世界,有几种不同类型的监测体系,包括基于事件监测、基于指标监测和完整食物链监测。基于事件监测体系利用非正规数据,占用资源最少。基于指标监测体系,依据常规化收集数据,是传统法定的疾病监测体系。完整食物链监测体系,被视为食源性疾病进行持续性风险分析的最佳方案。本文比较了各种食源性疾病监测体系的原理、最低监测能力和最低监测要求,讨论了一系列不同国家的真实案例,结合中国食源性疾病监测特点提出了前景展望,为中国食源性疾病监测与预警反应提供理论依据和实践指南。

关键词：食源性疾病暴发基于事件监测基于指标监测完整食物链监测

电化学生物传感器在细菌病原体检测中的应用及发展趋势

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卫生研究 2021年第1期50卷 168-172页

作者：王纯(综述) 张若鸿(审校) 杨洋(审校) 郭云昌(审校) 河北科技师范学院食品科技学院秦皇岛066600 国家食品安全风险评估中心北京100022

便携式生物传感器可以对病原菌进行快速检测,且特异性强、灵敏度高,检测效率远高于传统检测手段。其中基于生物活性元件的电化学生物传感器体积更小、速度更快、检测灵敏度更高,并且生物活性材料具有选择性广、活性强,可与换能器相互联... 详细信息

便携式生物传感器可以对病原菌进行快速检测,且特异性强、灵敏度高,检测效率远高于传统检测手段。其中基于生物活性元件的电化学生物传感器体积更小、速度更快、检测灵敏度更高,并且生物活性材料具有选择性广、活性强,可与换能器相互联系等特点,已被越来越广泛地应用于微生物的检测。本文着重介绍了3类电化学生物传感器在细菌检测领域的实际应用情况,并对其所面临的机遇与挑战进行了展望。

关键词：电化学基因传感器电化学免疫传感器电化学适配体传感器细菌检测

锌指蛋白结构域、转录激活效应蛋白和成簇规律间隔短回文重复技术检测病原体研究进展

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卫生研究 2019年第5期48卷 853-858页

作者：李晓然(综述) 张若鸿杨洋郭云昌(审校) 河北科技师范学院食品科技学院秦皇岛066600 国家食品安全风险评估中心北京100022

目前一些研究已利用锌指蛋白结构域(zinc finger-domain proteins,ZFPs),转录激活效应蛋白(transcription activator-like effectors,TALEs)和成簇规律间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)编辑的DNA、RNA结合蛋白来检测病原体核酸。随着有不同靶位点和活性的新型CRISPR相关酶的出现,该领域又开发了DNA内切酶靶向CRISPR非特异性报告探针(DNA endonuclease-targeted crispr trans reporter,DETECTR),高特异性和灵敏性的酶解锁报告探针(specific high-sensitivity enzymatic reporter unlocking,SHERLOCK)等技术,用于检测病原体核酸的新诊断技术越来越可靠。随着食品安全问题频繁发生,人们对快速精确检测食源性致病菌的方法越加关注。本文就ZFPs,TALEs和CRISPR技术的研究进展以及在食源性致病菌检测方面的应用进行了介绍,对其面临的机遇与挑战进行了讨论。

关键词： DNA结合蛋白核酸检测分子诊断食源性致病菌