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三唑酮降解菌株Enterobacter hormaechei TY18的转录组测序分析及降解基因rutB的克隆

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三唑酮降解菌株Enterobacter hormaechei TY18的转录组测序分析及...

作者：张曦倩山西农业大学

学位级别：硕士

三唑酮(Triadimefon)是一种内吸性广谱类三唑类杀菌剂,对小麦、玉米、果蔬等作物上的锈病、白粉病有较好的防治效果,在农业生产中被广泛使用。三唑酮稳定性强,具有良好的移动性和吸附性,容易在环境中持久累积,并且生产中存在过量不规范... 详细信息

三唑酮(Triadimefon)是一种内吸性广谱类三唑类杀菌剂,对小麦、玉米、果蔬等作物上的锈病、白粉病有较好的防治效果,在农业生产中被广泛使用。三唑酮稳定性强,具有良好的移动性和吸附性,容易在环境中持久累积,并且生产中存在过量不规范使用的现象,从而对作物品质,环境安全和人类健康造成威胁。因此,如何降解环境中的三唑酮近年来备受关注。微生物降解具有高效和安全等优点,是消除自然环境中三唑酮等农药残留最具应用前景的技术之一。本研究利用微生物富集驯化技术从长期受三唑酮污染的土壤中分离到一株以三唑酮为唯一氮源生长的菌株TY18。根据形态学特征、生理生化特性,结合16S r RNA和gyr B基因序列同源性分析,将菌株TY18鉴定为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)。对菌株TY18的降解能力进行研究,发现在28℃,p H为7时,培养7 d,菌株在含100mg/L三唑酮的培养基中生长量为0.46,三唑酮的降解率为49.56%,说明该菌株对三唑酮有较好的降解作用。以三唑酮为唯一氮源作为处理组,以尿素为唯一氮源作为对照组,提取菌株TY18的总RNA,通过Illumina Hiseq2000平台进行转录组测序。通过对测序结果比对分析,共得到5367个以m RNA为转录本的基因。分析得到408个差异表达基因(DEGs,P-adjust<0.05,|log2FC|≥1),其中上调的有190个,下调的有218个。对差异基因进行GO和KEGG富集分析,发现差异基因富集在氮利用、碱基分解、尿嘧啶分解、嘧啶碱基分解代谢和组氨酸代谢等通路中。结合差异表达分析和功能富集分析,筛选得到41个三唑酮降解候选基因。同时,选取18个差异表达的基因进行荧光定量PCR验证,结果表明基因表达情况与转录组测序的表达水平较为一致。通过转录组分析发现,rutB基因在以三唑酮为唯一氮源时显著高表达,该基因作用于碳氮键,具有水解酶活性。将基因rutB插入到p ET32a(+)载体中,构建p ET32-rutB表达载体,在IPTG的诱导下,该基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达。将重组菌株进行体外降解试验,结果表明:其对三唑酮的降解率为35.56%,对其它三唑类杀菌剂降解率为53.67-62.82%。由此证明,rutB基因对菌株TY18降解三唑酮具有一定的正调控作用。本研究为三唑酮农药残留的微生物修复提供了降解菌及相关基因的新资源,也为构建三唑酮高效降解工程菌提供科学依据。

关键词：三唑酮微生物降解霍氏肠杆菌转录组学降解酶基因

一株三唑醇降解菌M1的筛选、鉴定及降解特性

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农药 2022年第9期61卷 642-647,697页

作者：张曦倩王春伟申金叶王建明王燕山西农业大学植物保护学院山西太谷030801

[目的]分离筛选得到一株三唑醇降解菌株,完成菌株鉴定并对其降解特性进行分析。[方法]通过富集驯化法从三唑醇长期污染土壤中筛选三唑醇降解菌株,基于形态学特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrB序列分析,对菌株进行鉴定。利用紫外分光... 详细信息

[目的]分离筛选得到一株三唑醇降解菌株,完成菌株鉴定并对其降解特性进行分析。[方法]通过富集驯化法从三唑醇长期污染土壤中筛选三唑醇降解菌株,基于形态学特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrB序列分析,对菌株进行鉴定。利用紫外分光光度计测定菌株生长量与三唑醇降解率的关系;并采用单因素试验探究不同温度、pH值及接种量对三唑醇降解作用的影响。[结果]从土壤中分离得到一株可降解三唑醇的细菌菌株M1,经鉴定为产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)。以三唑醇100 mg/L为初始质量浓度,28℃振荡培养7 d后,菌株的生长量OD600为0.2110,菌株M1对三唑醇的降解率为70.23%。该菌的最适降解温度为28℃,最适降解pH值为4,最适降解接种量为1%。[结论]产酸克雷伯氏菌M1可有效降解三唑醇,为三唑醇农药的降解提供了新的微生物资源。

关键词：生物降解三唑醇产酸克雷伯氏菌降解特性

探讨淫羊藿对肾阳虚型高龄DOR患者卵巢功能及IVF/ICSI临床结局所发挥的作用

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内蒙古中医药 2023年第5期42卷 46-48页

作者：姚俐陈烨卢小娟张曦倩广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科广东广州511400

目的:分析肾阳虚型高龄卵巢储备功能衰退(DOR)应用淫羊藿对改善卵巢功能以及IVF/ICSI临床结局所发挥的作用。方法:将随机选取的60例接受体外受精-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕的高龄肾阳虚型DOR患者分成两组,2021年7月—2022年6月接受治疗... 详细信息

目的:分析肾阳虚型高龄卵巢储备功能衰退(DOR)应用淫羊藿对改善卵巢功能以及IVF/ICSI临床结局所发挥的作用。方法:将随机选取的60例接受体外受精-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕的高龄肾阳虚型DOR患者分成两组,2021年7月—2022年6月接受治疗,于进入IVF促排治疗周期前一个月经期接受治疗,对照组接受黄体酮胶囊及戊酸雌二醇片治疗,观察组采用淫羊藿煎服治疗,比较两组卵巢功能及IVF/ICSI临床结局。结果:两组P基线值、E_(2)基线值及HCG日P值差异无统计学意义(P>0.05),观察组HCG日E_(2)值显著高于对照组且差异有统计学意义(P0.05),治疗后观察组中医证候积分均更低(P0.05)。结论:肾阳虚型高龄DOR采用淫羊藿煎服治疗对于改善IVF/ICSI临床结局及中医证候可发挥积极作用,具有较高的临床推广价值。

关键词：淫羊藿肾阳虚型卵巢储备功能衰退临床结局

黏着斑激酶对ERK介导的滋养层细胞侵袭行为的调节作用

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中南大学学报（医学版） 2011年第6期36卷 559-564页

作者：张曦倩陈士岭邢福祺广东省妇幼保健院生殖中心广州510010 南方大学南方医院生殖中心广州510515

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路介导的滋养层细胞侵袭中的作用。方法:利用人绒毛外细胞滋养层(extravillous cytotropho-blasts,EVCT)细胞体外侵袭模型,加入不同浓... 详细信息

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路介导的滋养层细胞侵袭中的作用。方法:利用人绒毛外细胞滋养层(extravillous cytotropho-blasts,EVCT)细胞体外侵袭模型,加入不同浓度的黏着斑激酶抑制剂herbimycin A和ERK抑制剂PD98059,观察其对滋养层细胞生长的影响,FAK,ERK磷酸化的影响以及对滋养层细胞侵袭能力的影响。结果:Herbi-mycin A呈浓度依赖方式抑制EVCT细胞中磷酸化FAK的表达;herbimycin A能够部分抑制磷酸化ERK1/2表达,而PD98059对磷酸化FAK的表达未见影响;herbimycin A,PD98059均能不同程度地抑制EVCT细胞的体外侵袭作用。结论:ERK信号通路可能是多种侵袭信号的共同通路,其在滋养层细胞侵袭行为调节中起重要作用。

关键词：滋养层细胞黏着斑激酶信号转导

蜕膜及其它因子对滋养细胞侵入的影响及其与MAPK的关系

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蜕膜及其它因子对滋养细胞侵入的影响及其与MAPK的关系

作者：张曦倩第一军医大学

学位级别：硕士

目的人类的成功妊娠需要来自胎儿的滋养层细胞对子宫基质的有节制地侵入。滋养细胞的侵入作用与其周围环境有着密切的联系，其中子宫蜕膜组织对其的影响尤为重要。先前研究表明，蜕膜细胞条件培养液(decidual cell conditioned me... 详细信息

目的人类的成功妊娠需要来自胎儿的滋养层细胞对子宫基质的有节制地侵入。滋养细胞的侵入作用与其周围环境有着密切的联系，其中子宫蜕膜组织对其的影响尤为重要。先前研究表明，蜕膜细胞条件培养液(decidual cell conditioned media，DCM)能够阻止早孕滋养细胞的侵入，然而其具体机制尚未阐明。本研究首先观察DCM对早孕滋养细胞侵袭相关调节基因(包括MMPs、TIMP、uPA、PAI等)表达的影响，其次探讨细胞内MAPK信号通路对妊娠相关因子诱导早孕滋养细胞表达MMP-9的作用，最后进一步研究MAPK对人JAR细胞侵袭相关调节基因表达的作用，以及对其体外侵袭的影响。尽可能地弄清DCM的作用机制，以及MAPK是否参与了滋养细胞节制性侵入行为的调节。方法利用原代培养细胞技术培养人早孕滋养细胞、蜕膜细胞以及人JAR细胞系，制作DCM。用RT-PCR检测各基因表达的变化。用细胞ELISA法检测细胞内激酶活性。用Transwell细胞侵入系统检测细胞的体外侵袭作用;用MTT法评价细胞生长状况。结果 1．早孕和晚孕DCM均能下调早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9、uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。 2．经IL-1β、TNF-α、PMA处理24h后，滋养细胞MMP-9基因表达显著增高，EGF对MMP-9基因表达仅见轻微的上调，而IL-10显著抑制 MMP习基因的表达。我们发现 ILl6、TN’F化以及 PMA均能迅速激活CTB细胞的ERK、lqK、p38激酶活性。上述因素刺激引起MMP习 mRNA表达显著增加，其能被ERK或p38的特异性抑制剂所抑制。 3．P啪诱导JAR细胞MMP上、MMP习、uPA mRNA表达显著增加，其能被PD098059或SB203580所抑制，但存在差异性。PD098059 可明显抑制UMP－ZmRNA的表达。 p．PMA能促进人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用，而p38特异性抑制剂SB203580抑制了JAR细胞的侵袭能力。结论 1．蜕膜细胞条件培养液可调节早孕滋养细胞侵袭相关基因的表达。 2．蜕膜细胞可能通过分泌某些因子激活或抑制细胞内MAPK信号通路以调节滋养细胞MMP－2、MMP－9、TIMP－l、uPA、PAI－l等基因的表达，从而影响滋养细胞的侵袭能力。 3．MAPK可能参与了滋养细胞多种侵袭相关基因表达的调控，其与滋养细胞的侵袭行为有着密切关系。

关键词：滋养细胞蜕膜细胞丝裂素活化蛋白激酶基质金属蛋白酶纤溶酶原激活因子信号转导基因调节

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青春期功能失调性子宫出血的诊断及治疗

中国实用妇科与产科杂志 2004年第9期20卷 526-528页

作者：邢福祺张曦倩第一军医大学附属南方医院广州510515

青春期功能失调性子宫出血(功血)是由于下丘脑-垂体-卵巢轴发育不成熟或延迟,导致卵巢中虽有卵泡生长发育,但不能出现排卵[1].见于初潮后少女.

关键词：青春期功能失调性子宫出血诊断治疗发病机制病因学鉴别诊断

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肥胖与女性生殖功能紊乱

中国实用妇科与产科杂志 2004年第12期20卷 705-707页

作者：张曦倩陈士岭邢福祺南方医科大学南方医院生殖中心广州510515

1 超重和肥胖的定义　　临床上评价体重一般采用体重指数(body mass index,BMI),即体重/身高2(kg/m2).虽然BMI用于衡量不同个体或种族时比较粗糙,但因其计算简便,易于操作,WHO专家小组还是建议根据BMI的数值来判断成年人的体重级别,并... 详细信息

1 超重和肥胖的定义　　临床上评价体重一般采用体重指数(body mass index,BMI),即体重/身高2(kg/m2).虽然BMI用于衡量不同个体或种族时比较粗糙,但因其计算简便,易于操作,WHO专家小组还是建议根据BMI的数值来判断成年人的体重级别,并提出了具体的临界值,见表1.……

关键词：肥胖妇产科疾病女性生殖功能紊乱流行病学

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血液肿瘤精准诊治

陆军军医大学学报 2024年第4期46卷 299-310页

作者：张曦血液病与微环境重庆市重点实验室创伤与化学中毒全国重点实验室全军临床重点专科金凤实验室重庆市临床重点专科陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心

目的随着对血液肿瘤发病机制的深入研究，血液肿瘤的精准诊断和分层治疗逐年优化提升。近年来在人工智能的推动下，血液肿瘤诊断由人工化、经验化不断向智能化、信息化升级，在未来有望实现高效、高准确率的智能诊断;同时，小分子药物... 详细信息

目的随着对血液肿瘤发病机制的深入研究，血液肿瘤的精准诊断和分层治疗逐年优化提升。近年来在人工智能的推动下，血液肿瘤诊断由人工化、经验化不断向智能化、信息化升级，在未来有望实现高效、高准确率的智能诊断;同时，小分子药物、抗体类药物、免疫细胞治疗及造血干细胞移植新疗法在不断完善，新药不断涌现，为血液肿瘤的治疗提供了更多选择。本文从血液肿瘤的精准/智能诊断、药物治疗和细胞治疗等3个方面探讨血液肿瘤的精准诊断与治疗。

关键词：血液肿瘤精准诊断靶向治疗

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敌草快中毒致急性呼吸窘迫综合征2例

中华劳动卫生职业病杂志 2024年第4期42卷 288-292页

作者：王猛张曦木中国人民解放军总医院海南医院重症医学科三亚572013 解放军医学院北京100853

敌草快(diquat,DQ)是一种非选择性、落叶型除草剂,其中毒往往引起肝肾功能损伤,而对肺的损伤较为轻微。目前国内外对于DQ中毒的报道多集中在肝肾损伤,而引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及肺部损伤的报道较少。本文回顾分析了2例成分明确... 详细信息

敌草快(diquat,DQ)是一种非选择性、落叶型除草剂,其中毒往往引起肝肾功能损伤,而对肺的损伤较为轻微。目前国内外对于DQ中毒的报道多集中在肝肾损伤,而引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及肺部损伤的报道较少。本文回顾分析了2例成分明确标注为敌草快中毒的病例,均表现出ARDS,且在出现ARDS时病情急剧进展,虽经积极救治,最终患者均死亡。

关键词：中毒敌草快急性呼吸窘迫综合征严重急性呼吸器官综合征