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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-RPA-LFD检测方法的建立与应用

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中国农业科学 2024年第14期 2781-2790页

作者：王永江乔奇王爽赵付枚田雨婷张德胜张振臣河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业农村部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室

【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增（reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA）结合侧向流层析（lateral flow dipstick,LFD）试纸条技术，建立甘薯褪绿矮化病毒（sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV）西非株系（west African strain,WA）的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化，建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒（sweet potato feathery mottle virus,SPFMV）、甘薯潜隐病毒（sweet potato latent virus,SPLV）、甘薯G病毒（sweet potato virus G,SPVG）等常见的甘薯病毒进行检测，验证方法的特异性；将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释，分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测，比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度；对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测，验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法，最适引物为CSV357F/R，探针CSV-CP-Probe（47 bp），引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L-1，温度为42℃，时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测，与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10-4溶液，而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10-3溶液，RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测，均检出11份阳性样品，3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明，RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致，均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法，该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点，既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测，也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。

关键词：甘薯褪绿矮化病毒西非株系逆转录酶重组酶聚合酶扩增侧向流层析快速检测甘薯

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烟粉虱对甘薯种薯带毒率及病毒病发生的影响

植物病理学报 2024年第1期54卷 180-187页

作者：王爽赵付枚田雨婷乔奇张德胜王永江张振臣河南省农业科学院植物保护研究所郑州450002 农业农村部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室郑州450002

病毒病是影响甘薯产量和品质的重要限制因素。甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)和甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)是危害我国甘薯的主要病毒。甘薯种薯感染SPCSV是甘薯苗期病... 详细信息

病毒病是影响甘薯产量和品质的重要限制因素。甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)和甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)是危害我国甘薯的主要病毒。甘薯种薯感染SPCSV是甘薯苗期病毒病严重发生的关键因素。本研究分析了甘薯田烟粉虱发生量和带毒率对种薯带毒率及病毒病发生的影响,建立了甘薯种薯感染病毒风险和苗期病毒病发生风险的早期预警方法。结果表明,甘薯田烟粉虱发生量和SPCSV带毒率与种薯SPCSV带毒率密切相关,在田间烟粉虱发生量和带毒率较高的情况下,即使种植不含任何病毒的脱毒试管苗,也会引起较高的种薯带毒率,但不会引起甘薯地上部植株的严重显症。甘薯种薯SPCSV带毒率以及SPCSV和SPFMV复合带毒率与苗期病毒病显症率呈极显著正相关关系,可以利用种薯带毒率预测甘薯苗期病毒病显症率。

关键词：甘薯田烟粉虱甘薯褪绿矮化病毒甘薯羽状斑驳病毒烟粉虱带毒率种薯带毒率

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河南省甘薯脱毒技术研究现状及展望

河南农业科学 2009年第9期38卷 64-66,74页

作者：张振臣河南省农业科学院植物保护研究所河南郑州450002

简要总结了河南省近年来在甘薯脱毒及病毒检测技术研究方面取得的主要进展,并对脱毒甘薯的应用前景作了展望。

关键词：甘薯病毒病脱毒技术研究现状

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烟草花叶病田间接种技术初步研究

河南农业科学 1992年第10期21卷 27-29页

作者：张振臣河南省农科院植物保护研究所

研究结果表明:单独用烟草花叶病毒(TMV)或用黄瓜花叶病毒(CMV)接种时,病毒浓度分别以0.5微克/毫升以下和干病叶稀释250～500倍为宜。TMV和CMV联合接种时,两种病毒混合接种的发病重,分开先后单独接种的发病轻。但二者均可对不同抗性的品... 详细信息

研究结果表明:单独用烟草花叶病毒(TMV)或用黄瓜花叶病毒(CMV)接种时,病毒浓度分别以0.5微克/毫升以下和干病叶稀释250～500倍为宜。TMV和CMV联合接种时,两种病毒混合接种的发病重,分开先后单独接种的发病轻。但二者均可对不同抗性的品种(系)进行有效的选择。接种时期以移栽期为宜。

关键词：烟草花叶病接种

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植物抗青枯病的分子机制研究进展

植物生理学报 2022年第4期58卷 607-621页

作者：潘晓英张振臣袁清华李集勤马柱文陈俊标黄振瑞广东省农业科学院作物研究所广东省农作物遗传改良重点实验室广东省烟草育种与综合利用工程技术研究中心广州510640

细菌性青枯病是由青枯雷尔氏菌(青枯菌)引起的一种世界范围的毁灭性病害,该病原有着广泛的寄主范围及地理分布,给作物生产带来巨大经济损失。抗病育种是防治该病害的有效途径。植物在长期与青枯菌相互作用的过程中,其自身已进化出一系... 详细信息

细菌性青枯病是由青枯雷尔氏菌(青枯菌)引起的一种世界范围的毁灭性病害,该病原有着广泛的寄主范围及地理分布,给作物生产带来巨大经济损失。抗病育种是防治该病害的有效途径。植物在长期与青枯菌相互作用的过程中,其自身已进化出一系列精密的机制抵制青枯菌入侵。本文主要总结阐述植物抗青枯病的分子机制研究进展,包括图位克隆获得的抗青枯病基因、响应青枯病侵染的相关基因。对拟南芥中RRS1/RPS4抗青枯病的作用机制进行详细综述;其他作物中,主要是园艺作物中与青枯病相关的基因报道较多,主要包括WRKY转录因子,其次是NAC转录因子以及其他类基因。涉及主要通路是水杨酸和茉莉酸途径,以及新近发现的γ-氨基丁酸和丙酮酸代谢途径。本综述将为进一步深入开展植物对青枯病的抗性机制研究及利用抗性资源进行抗病品种选育奠定基础。

关键词：茄科雷尔氏菌青枯病 RRS1 分子机制

1992年豫中烟区烟草花叶病优势毒原的初步分析

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河南农业科学 1992年第12期21卷 19-21页

作者：孙清张振臣河南省农科院植物保护研究所

应用间接酶联免疫吸附法,对采自河南省中部烟区的花叶病标样检测结果表明,黄瓜花叶病毒(CMV)是1992年该烟区花叶病流行的优势毒原,其侵染率及含量均高于烟草花叶病毒(TMV)。CMV的平均侵染率为65.8％,TMV为29.7％,CMV和TMV的复合侵染率为... 详细信息

应用间接酶联免疫吸附法,对采自河南省中部烟区的花叶病标样检测结果表明,黄瓜花叶病毒(CMV)是1992年该烟区花叶病流行的优势毒原,其侵染率及含量均高于烟草花叶病毒(TMV)。CMV的平均侵染率为65.8％,TMV为29.7％,CMV和TMV的复合侵染率为27.9％。还对转基因抗花叶病NC89与普通NC89受侵染后的病毒含量进行了分析比较。

关键词：烟草花叶病毒原分析河南

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转基因抗病毒工程烟草的田间抗性试验

植物保护学报 1993年第2期20卷 191-192页

作者：张振臣河南省农业科学院植物保护研究所

方荣祥等将烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)基因转入我国烟草主栽品种NC89后,经过连续两年3代的田间选择鉴定。

关键词：烟草田间试验抗病性

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我国甘薯脱毒种薯种苗繁育存在的问题及建议

植物保护 2020年第6期46卷 10-13页

作者：张振臣河南省农业科学院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点实验室农业农村部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室郑州450002

病毒病是甘薯的重要病害,种植脱毒健康种苗是防治病毒病、提高甘薯产量最有效的方法。近年来,我国甘薯病毒及其传播介体的发生呈现出新的特点,传统的脱毒种薯种苗繁育体系不能满足当前甘薯生产的需要。本文综述了当前我国甘薯病毒的种... 详细信息

病毒病是甘薯的重要病害,种植脱毒健康种苗是防治病毒病、提高甘薯产量最有效的方法。近年来,我国甘薯病毒及其传播介体的发生呈现出新的特点,传统的脱毒种薯种苗繁育体系不能满足当前甘薯生产的需要。本文综述了当前我国甘薯病毒的种类及危害现状,分析了我国甘薯脱毒种薯种苗繁育中存在的问题,对规范和完善我国甘薯脱毒种薯种苗繁育体系提出了建议。

关键词：甘薯病毒病脱毒种苗繁育体系问题和建议

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2-5A系统在植物抗病毒中的应用

河南农业科学 2005年第4期34卷 41-43页

作者：陈冉蒋士君张振臣河南省农业科学院植物保护研究所河南郑州450002 河南农业大学植物保护学院河南郑州450002

植物病毒病害给农作物生产造成了严重危害,传统的防治方法远远无法满足生产的要求.近20年来,随着基因工程技术的发展,为防治植物病毒病开辟了新的途径.1986年,Powell-Abel等将烟草花叶病毒(TMV)的外壳蛋白基因转入烟草,获得第1例抗TMV... 详细信息

植物病毒病害给农作物生产造成了严重危害,传统的防治方法远远无法满足生产的要求.近20年来,随着基因工程技术的发展,为防治植物病毒病开辟了新的途径.1986年,Powell-Abel等将烟草花叶病毒(TMV)的外壳蛋白基因转入烟草,获得第1例抗TMV转基因植株[1].自此以后,发展了多种植物抗病毒基因工程策略,应用较多的基因有病毒来源的外壳蛋白基因、复制酶基因、移动蛋白基因等;非病毒来源的植物的抗病基因、毒素蛋白基因以及来自动物的抗体基因等.

关键词： 2-5A系统植物病毒病防治抗病毒基因工程干扰素