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破伤风毒素C片段的基因克隆、表达、纯化及免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第3期24卷 222-225页

作者：谭亚军雷殿良张庶民中国药品生物制品检定所血清室北京100050

目的　对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。方法　应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出 1370bp的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因 ,将此基因片段插入到表达载体pET 2 2b(+)中 ,并在大... 详细信息

目的　对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。方法　应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出 1370bp的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因 ,将此基因片段插入到表达载体pET 2 2b(+)中 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达。用阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析方法进行蛋白纯化后 ,参照《中国生物制品规程 2 0 0 0年版》的免疫攻击实验方法测定其效价。结果　经SDS PAGE分析 ,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的15 %。免疫印迹实验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。纯化得到纯度为 96 .5 %的重组蛋白 ,纯化回收率达 4 0 %。免疫攻击实验测定其效价为 18.70 6IU/mg,ED50 为 2 0 μg。经加强免疫 ,1μg免疫剂量即能产生足够的抗体保护动物免受破伤风毒素的攻击。结论　所获得的重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：破伤风毒素基因克隆蛋白纯化免疫原性 PCR技术基因工程疫苗

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抗蛇毒血清、抗狂犬病病毒血清国际会议纪要

中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 471-472页

作者：张庶民中国药品生物制品检定所

2007年1月,WHO在瑞士日内瓦专门召开了抗蛇毒血清、抗狂犬病病毒血清国际会议.本次会议规格较高,不仅有多个国家、厂家、研究机构代表参加,而且WHO多个部门主任也参加了会议.

关键词：抗狂犬病病毒血清抗蛇毒血清国际会议研究机构 WHO 日内瓦

抗人甘露聚糖结合凝集素(MBL)单克隆抗体的制备、鉴定与检测方法的建立

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 579-582,587页

作者：骆鹏孟淑芳张庶民贾天军中国药品生物制品检定所北京100050 河北北方学院医学检验中心河北张家口075029

目的制备抗甘露聚糖结合凝集素(MBL)的单克隆抗体(McAb),建立免疫学检测方法。方法以纯化MBL为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证夹心ELISA定量检测法。结果筛选出2株稳定分泌抗MBL的单抗杂交瘤细胞株,免疫球... 详细信息

目的制备抗甘露聚糖结合凝集素(MBL)的单克隆抗体(McAb),建立免疫学检测方法。方法以纯化MBL为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证夹心ELISA定量检测法。结果筛选出2株稳定分泌抗MBL的单抗杂交瘤细胞株,免疫球蛋白亚类均为IgG1。两单抗间抑制率<50%,结合位点不同两单抗特异识别MBL,选择包被抗体B10浓度为8μg/mL,酶标抗体B3稀释度为1∶500,建立夹心ELISA定量检测法。该法检出范围为1～100ng/mL,与其他抗原无交叉反应。重复性试验的批内批间变异均小于10%,回收率在101%～103%之间,cv小于7%。检测结果与国外试剂盒比较无显著差异。结论制备的抗MBL单克隆抗体可用于MBL的免疫学检测。

关键词：甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体 ELISA

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人重组沙眼衣原体疫苗的研究进展

中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 874-878页

作者：尹晨亮张庶民(综述) 徐颖华倪现朴(审校) 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110000 北京成大天和生物科技有限公司北京102600 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种革兰阴性、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,是引起性传播感染(sexually transmitted infection,STI)的重要病原体,可导致眼部、生殖道等多个系统疾病。疫苗是预防和控制CT感染最有效、最... 详细信息

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种革兰阴性、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,是引起性传播感染(sexually transmitted infection,STI)的重要病原体,可导致眼部、生殖道等多个系统疾病。疫苗是预防和控制CT感染最有效、最经济的方法,可实现对易感人群的长期保护,减少传播并抑制继发性感染。随着生物学技术的发展和抗CT感染免疫保护机制研究的深入,已发现一些具有潜在免疫保护性候选抗原蛋白,其中重组CT疫苗CTH522已进入Ⅰ期临床试验,并取得突破性进展。本文就近年对CT特异性免疫反应、重组疫苗候选抗原临床前研究和临床试验的研究进展及面临的挑战作一综述,以期为我国新CT疫苗的研发提供参考。

关键词：沙眼衣原体重组疫苗候选抗原佐剂动物模型

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百日咳免疫控制研究进展

中国公共卫生 2010年第5期26卷 651-653页

作者：骆鹏张庶民中国药品生物制品检定所血清室北京100050

在疫苗广泛接种之前,百日咳是儿童致死率最高的感染性疾病之一.全球实施扩大免疫规划(EPI)后,百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and pertussis combined vaccine,DTP)免疫覆盖率提高,百日咳发病得到了有效的控制,发病率和死亡率明显下... 详细信息

在疫苗广泛接种之前,百日咳是儿童致死率最高的感染性疾病之一.全球实施扩大免疫规划(EPI)后,百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and pertussis combined vaccine,DTP)免疫覆盖率提高,百日咳发病得到了有效的控制,发病率和死亡率明显下降.但过去10～20年中,全球百日咳发病率出现了明显的上升趋势,尤其在疫苗覆盖率较高的发达国家,这种现象称为百日咳重现(resurgence of pertussis)[1-2].

关键词：百日咳百白破联合疫苗免疫规划

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CD40与CD40L研究

中国生物制品学杂志 2003年第1期16卷 63-64页

作者：张庶民中国药品生物制品检定所北京100050

CD40 是肿瘤坏死因子（TNF）家族成员，可在多种细胞表达，包括各种抗原递呈细胞（APC）、B细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等。CD40配体（CD40L）是一相对分子质量33000Ⅱ型膜糖蛋白，也属TNF家族，TCR刺激下可在CD4~+T细胞上表... 详细信息

CD40 是肿瘤坏死因子（TNF）家族成员，可在多种细胞表达，包括各种抗原递呈细胞（APC）、B细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等。CD40配体（CD40L）是一相对分子质量33000Ⅱ型膜糖蛋白，也属TNF家族，TCR刺激下可在CD4~+T细胞上表达~（[1]）。

关键词： CD40 CD40L 免疫反应细胞因子信号转导

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Ⅱ型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

中国生物制品学杂志 2010年第6期23卷 660-664页

作者：张华捷张庶民中国药品生物制品检定所血清室北京100050

Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种主要引起人类生殖器疱疹的病原体,在世界范围内广泛流行,不发达国家和地区尤为严重。HSV-2感染不仅严重威胁人类健康,同时也造成大量的经济损失。对HSV-2疫苗的研究已开展多年,历经了灭活疫苗、减毒活疫... 详细信息

Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种主要引起人类生殖器疱疹的病原体,在世界范围内广泛流行,不发达国家和地区尤为严重。HSV-2感染不仅严重威胁人类健康,同时也造成大量的经济损失。对HSV-2疫苗的研究已开展多年,历经了灭活疫苗、减毒活疫苗、重组亚单位疫苗、肽疫苗、DNA疫苗等多个阶段,并取得了一定进展,然而到目前为止,全球仍无一种HSV-2疫苗被批准上市。本文对近年来HSV-2疫苗的研究进展作一综述。

关键词：疱疹病毒2型人疫苗亚单位疫苗 DNA

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百日咳鲍特菌分子进化与分型的研究进展

中华预防医学杂志 2013年第4期47卷 375-377页

作者：徐颖华侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

随着基因测序技术的迅猛发展，数千种微生物已经完成了全基因组测定，人类从而能够更加深入地认识和了解各种微生物，尤其是百日咳鲍特菌这种基因组高度保守的单形病原菌。

关键词：百日咳鲍特菌分子进化分型基因测序技术全基因组微生物病原菌

肺炎衣原体CPn0308的基因克隆及其内源性蛋白定位的研究

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卫生研究 2008年第2期37卷 219-222页

作者：贾天军刘殿武罗建华张庶民钟光明河北医科大学流行病学教研室石家庄050017 Department of Microbiology and Immunology University of TexasHealth Science Center at San Antonio7703 Floyd Curl DriveSan AntonioTexas 78229USA. 中国药品生物制品检定所血清室

目的克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2载体进行酶切,T4连接酶连接... 详细信息

目的克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2载体进行酶切,T4连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue细菌;用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,最后对插入片断进行序列分析;用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA对内源性蛋白进行定位分析。结果克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上。结论成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上。

关键词：肺炎衣原体基因克隆内源性蛋白