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硫氧还蛋白T100磷酸化对Trx-TXNIP互作能力的影响

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硫氧还蛋白T100磷酸化对Trx-TXNIP互作能力的影响

作者：张小骥武汉工程大学

学位级别：硕士

硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx/TXN)是一种广泛存在于细胞内、大小约为12KD的蛋白,它含有二硫键活性中心Cys-Gly-Pro-Cys。Trx在细胞内信号转导以及氧化应激导致的细胞凋亡中都起着很重要的作用。Trx在肿瘤细胞中的表达量会异常增高,这会... 详细信息

硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx/TXN)是一种广泛存在于细胞内、大小约为12KD的蛋白,它含有二硫键活性中心Cys-Gly-Pro-Cys。Trx在细胞内信号转导以及氧化应激导致的细胞凋亡中都起着很重要的作用。Trx在肿瘤细胞中的表达量会异常增高,这会促进细胞增殖,使肿瘤细胞对抗肿瘤药物表现出耐药性。Trx第100位苏氨酸的磷酸化受到抑制或突变会导致肝癌细胞HepG2对顺铂和阿霉素的耐药性下降,但其作用机理目前尚不清楚。硫氧还蛋白结合蛋白(Thioredoxin Interacting Protein,TXNIP/TBP-2)是Trx的内源性抑制物,能与氧化型Trx结合抑制其活性,减少Trx与其他胞内物质结合,从而影响细胞内信号。在肿瘤细胞中TXNIP的表达量减少或缺失,导致对Trx的抑制作用减弱。Trx的磷酸化是否会影响Trx-TXNIP的结合能力,目前未见到相关报道,若Trx无法磷酸化会使Trx更多的与TXNIP结合,则Trx活性降低,这将会有助于抗癌药物发挥药效。为此进行了如下研究:1)构建了真核表达载体pEGFP-c1-6His-Trx以及pEGFP-c1-6His-mTrx,突变型的mTrx-1指的是Trx-1第100位苏氨酸发生了突变,变成了丙氨酸,从而无法磷酸化。通过瞬时转染将两种质粒分别转染进入Hela细胞中,成功表达出了含Trx-1的融合蛋白。2)通过摸索电穿孔转染条件中的电压、脉冲时间、质粒浓度、电击次数,用以确定最佳转染条件,使pEGFP-c1-6His-Trx以及pEGFP-c1-6His-mTrx能在Hela细胞中高效表达。3)研究转染了两种质粒的细胞总蛋白中Trx-1与TXNIP的含量以及相互作用能力的强弱。4)提取两种细胞核蛋白,将Trx-1作为目的蛋白通过免疫共沉淀,比较两种细胞在核内的Trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。5)用一定浓度的H2O2刺激两种细胞并提取细胞核蛋白,比较核内Trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。6)加入磷酸酶抑制剂U0126(MEK1/2抑制剂),抑制细胞内蛋白磷酸化,比较核内Trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。以上实验可以得到以下结论:转染了pEGFP-c1-6His-Trx的野生型细胞与转染了pEGFP-c1-6His-mTrx的突变型细胞中,在细胞总蛋白中,还原型的Trx-1含量高于氧化型的Trx-1。TXNIP只与氧化态Trx-1结合,且氧化态Trx-1含量越高,结合的TXNIP越多。由于Trx-1的突变,导致Trx-1更多的以无活性的氧化态存在,且突变型中氧化态Trx-1与TXNIP的结合能力弱于野生型中Trx-1与TXNIP的结合能力。在野生型与突变型的核蛋白中,Trx-1的含量基本相同,而突变型中TXNIP的含量高于野生型。且突变型细胞核蛋白中氧化态Trx-1高于野生型。加入了H2O2后,野生型细胞核蛋白内还原形态的Trx-1多余突变型。由于磷酸化抑制剂的作用,野生型和突变型细胞核蛋白中Trx-1-TXNIP的相互作用区别不明显。

关键词： Trx-1 TXNIP 磷酸化免疫共沉淀

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人乙醛脱氢酶2的原核表达及其活性的鉴定

生物技术通报 2014年第12期30卷 201-206页

作者：黄娟王荷花张小骥潘博宇陈孝平吴元欣武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室武汉430073

商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取,其来源受到很大的限制,而且价格昂贵。为了解决乙醛脱氢酶原料有限的问题,利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶。将人乙醛脱氢酶2基因(aldh2)克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组载... 详细信息

商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取,其来源受到很大的限制,而且价格昂贵。为了解决乙醛脱氢酶原料有限的问题,利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶。将人乙醛脱氢酶2基因(aldh2)克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组载体p ET32a-ALDH2。将构建的重组载体转化大肠杆菌*** BL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白得到大量表达;且对诱导表达条件进行优化。结果显示,在37℃,1.0 mmol/L IPTG诱导表达6 h为最优表达条件。由于目的蛋白几乎都是以包涵体形式表达,为了得到有活性的乙醛脱氢酶,对包涵体变性、复性和纯化进行了研究。试验数据显示,酶的最终得率为14.49 U/L。并通过用Bradford法,测定复性蛋白的浓度约为77μg/m L,进行活性检测表明,该复性蛋白具有乙醛脱氢酶活性,酶活性约为1.449 U/m L。通过构建重组载体p ET32a-ALDH2和优化表达条件,aldh2在原核表达宿主*** BL21(DE3)得到大量表达;此外,利用透析复性法得到的复性蛋白酶活性有所提高。

关键词：乙醛脱氢酶2 克隆条件优化酶活鉴定

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甘草酸、甘草苷对肿瘤细胞中硫氧还蛋白的核定位影响及其临床意义

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华中科技大学学报（医学版） 2016年第2期45卷 181-184页

作者：潘博宇王荷花张小骥黄娟吴元欣陈孝平武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室武汉430073

目的通过选用甘草的主要单药活性成分作用于人宫颈癌HeLa细胞,探索其对硫氧还蛋白(thioredoxin-1,Trx)在肿瘤细胞核中定位的影响。方法选取甘草酸(glycyrrhizic acid,GCA)、甘草苷(liquiritin,LQ)两种单药分别设置药物浓度梯度与作用时... 详细信息

目的通过选用甘草的主要单药活性成分作用于人宫颈癌HeLa细胞,探索其对硫氧还蛋白(thioredoxin-1,Trx)在肿瘤细胞核中定位的影响。方法选取甘草酸(glycyrrhizic acid,GCA)、甘草苷(liquiritin,LQ)两种单药分别设置药物浓度梯度与作用时间梯度实验组。再将一定浓度的GCA、LQ分别与临床化疗药物紫杉醇(paclitaxel,PTX)或表柔比星(epirubicin,EPI)两两联用设置联合用药实验组。通过Western blot测定Trx在HeLa细胞核中表达量的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对HeLa细胞增殖抑制的影响。结果 Trx在细胞核内的含量变化均随2种单药浓度的增大和药物作用时间的延长呈下降趋势;GCA、LQ对细胞的毒性较小,且其与低剂量化疗药物联用对细胞核中Trx表达量的影响,与单纯高剂量化疗药物作用效果相近。结论 GCA和LQ均可使Trx在HeLa细胞核中的表达下降,且其与临床化疗药物联用有望降低后者的使用剂量,从而表现出一定的潜在临床应用价值。

关键词：甘草酸甘草苷硫氧还蛋白肿瘤细胞核定位

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生物有机肥中枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌检测方法的建立

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中文科技期刊数据库（全文版）自然科学 2023年第12期 56-61页

作者：黄景麟郭秀琴陈聪张小骥江一飞三峡公共检验检测中心·国家磷产品质量监督检验中心湖北宜昌443002

使用传统细菌生化鉴定或全自动微生物鉴定系统VITEK 2 compact难以区分枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,因此建立鉴定微生物肥料中枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法具有实际意义。对实际生物有机... 详细信息

使用传统细菌生化鉴定或全自动微生物鉴定系统VITEK 2 compact难以区分枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,因此建立鉴定微生物肥料中枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法具有实际意义。对实际生物有机肥样品进行检测,结果显示,该方法特异性好,抗干扰力强,为生物有机肥中有效活菌种类鉴定提供了技术支撑。

关键词：多重实时荧光聚合酶链式反应(PCR) 枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌生物有机肥

基于上下文感知与稀疏特征融合的遥感图像检测方法

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激光与光电子学进展 2024年

作者：冯泉罗亮张小乾西南科技大学信息工程学院

针对遥感图像目标检测过程中，目标背景区域复杂、小目标特征信息过少等因素造成漏检和检测精度不高的问题，提出一种基于上下文感知与稀疏特征融合的遥感图像检测方法。首先，设计了一种上下文感知单元，在特征提取过程中挖掘空间方向... 详细信息

针对遥感图像目标检测过程中，目标背景区域复杂、小目标特征信息过少等因素造成漏检和检测精度不高的问题，提出一种基于上下文感知与稀疏特征融合的遥感图像检测方法。首先，设计了一种上下文感知单元，在特征提取过程中挖掘空间方向的上下文特征信息，增强对小目标特征的捕获能力。其次，提出了一种稀疏特征融合策略，通过学习稀疏表示，引导网络中的浅层特征与深层特征进行更有效的特征融合。最后，在网络颈部引入SlimNeck设计范式减轻网络模型复杂度。实验结果表明，在NWPUVHR-10和DIOR遥感数据集上，本文所提方法的计算量和参数量分别比YOLOv8s降低3.1%和6.3%，检测精度分别提升1.6%和2.6%。与当前主流的六种检测方法相比，本文的方法表现更优。

关键词：遥感图像目标检测上下文感知特征融合

基于Logistic回归和深度学习构建Bethesda Ⅳ类结节风险预测模型

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基于Logistic回归和深度学习构建Bethesda Ⅳ类结节风险预测模型

作者：张小浙江中医药大学

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三元多项式代数上的拟线性导子

三元多项式代数上的拟线性导子

作者：张小蔓吉林大学

学位级别：硕士

多项式代数的自同构和导子在代数学和仿射代数几何中都是重要的研究对象,它们与一些重要问题的研究有紧密联系.比如,导子核的有限生成问题为希尔伯特第十四问题提供了例子和反例,雅可比猜想可转化为导子像的问题.特殊类型的导子和自同... 详细信息

多项式代数的自同构和导子在代数学和仿射代数几何中都是重要的研究对象,它们与一些重要问题的研究有紧密联系.比如,导子核的有限生成问题为希尔伯特第十四问题提供了例子和反例,雅可比猜想可转化为导子像的问题.特殊类型的导子和自同构在其中发挥了重要作用.线性导子和拟平移分别是重要的导子和自同构.Nagata证明了线性导子的核都是有限生成的,*** Bondt则利用拟平移构造了雅可比猜想的一个衍生问题——齐次相关性问题的反例,而拟平移则可追溯到***和M.N（?）ther对奇异黑塞矩阵的研究.Freudenburg在其关于局部幂零导子的代数理论的专著中提出了拟线性导子.设D是多项式代数K[n]的导子,如果存在K[n]的坐标系x1,x2,···,x_n及ker D上的矩阵M,使得D（x1,x2,···,x_n）=（x1,x2,···,x_n）M,则称D是拟线性导子.线性导子和De Bondt使用的拟平移所对应的导子都是拟线性导子.但目前人们对拟线性导子的了解还很少,这促使我们对拟线性导子做进一步的研究.一元的拟线性导子是简单的.王宁研究了二元拟线性导子的表示矩阵的唯一性和计算.本文主要研究三元多项式代数上的拟线性导子.在第三章,我们首先利用合系描述了拟线性导子关于某坐标系的表示矩阵的集合,通过例子说明了一个拟线性导子关于不同的坐标系的表示矩阵的个数可以是0,1,∞.然后利用超越次数和朗斯基行列式给出了拟线性导子关于某坐标系有唯一一个表示矩阵的条件.通过例子说明了局部幂零的拟线性导子的某些表示矩阵可以不是幂零矩阵.在第四章,我们利用朗斯基行列式将K[x,y,z]的导子分为如下四种情形:（1）WD（x,y,z）≠0;（2）WD（x,y）,WD（x,z）,WD（y,z）全为0;（3）WD（x,y）,WD（x,z）,WD（y,z）中恰有一个为0;（4）WD（x,y,z）=0,WD（x,y）WD（x,z）WD（y,z）≠0.假设拟线性导子关于给定坐标系有表示矩阵,对于前两种情形,我们完全确定了这些表示矩阵,对于后两种情形,则在一定条件下给出了一个表示矩阵.

关键词：导子的核线性导子局部幂零导子拟线性导子表示矩阵朗斯基行列式

转录组测序揭示系统性红斑狼疮严重程度的新分子特征

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转录组测序揭示系统性红斑狼疮严重程度的新分子特征

作者：张小镜安徽医科大学

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社区绿色空间感知影响老年居民健康福祉的路径分析

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社区绿色空间感知影响老年居民健康福祉的路径分析

作者：张小银广西大学

学位级别：硕士