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鲤STIM1介导的钙离子调控及其在LPS免疫刺激中的功能分析

鲤STIM1介导的钙离子调控及其在LPS免疫刺激中的功能分析

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作者：张嘉齐山东师范大学

学位级别：硕士

在真核细胞中,钙离子作为第二信使,在基因转录调控、细胞生长与凋亡等生物学过程中起着重要的作用。细胞中钙离子浓度受到多种机制的共同调控,其中钙库操纵的钙内流(SOCE)机制在非兴奋细胞钙离子内流的调控中起着重要的作用。基质相互... 详细信息

在真核细胞中,钙离子作为第二信使,在基因转录调控、细胞生长与凋亡等生物学过程中起着重要的作用。细胞中钙离子浓度受到多种机制的共同调控,其中钙库操纵的钙内流(SOCE)机制在非兴奋细胞钙离子内流的调控中起着重要的作用。基质相互作用分子1(STIM1)是一种定位于内质网(ER)膜上的Ca2+结合蛋白,STIM1感应内质网钙库中Ca2+释放引起的Ca2+浓度的降低而发生寡聚化,导致STIM1转位到内质网与细胞质膜形成连接的点状结构中,并与质膜上的Orai1发生相互作用,从而激活了 Orai1,使细胞质膜上钙离子释放激活的钙离子通道(CRAC)开放,胞外Ca2+流入细胞,进而内质网钙库得到补充。Orai1是组成CRAC通道的蛋白,而STIM1是SOCE机制中激活CRAC通道的关键蛋白。高等哺乳动物中已有的研究表明,STIM1及其介导的SOCE对免疫细胞功能以及免疫应答具有重要的影响。缺乏STIM1会严重损害人及小鼠T淋巴细胞的功能,此外,SOCE的功能缺失会使B淋巴细胞、肥大细胞和吞噬细胞功能受损。然而,在低等脊椎动物硬骨鱼类中,STIM1及其介导的SOCE功能的研究非常有限,因此对鲤鱼STIM1及其相关分子的研究对于认识STIM1调控的Ca2+信号在进化上的保守性具有重要的意义,同时也为硬骨鱼类STIM1及其介导的SOCE在免疫细胞中的功能研究提供基础。首先,本实验以鲤鱼(Cyprinus carpio L.)为材料,克隆得到鲤鱼stim1的两个同源序列stim1a和stim1b以及orai的两种亚型orai1和orai2的基因序列,并对其相应的氨基酸序列进行了初步的序列特征分析,包括糖基化位点预测、三维结构预测、多序列比对等,并构建了系统进化树。结果表明,鲤鱼stim1a和stim1b及orai1和orai2具有保守的与哺乳动物同源的功能结构域,同时也存在鱼类特有的不同于哺乳动物的序列特征及保守位点,STIM1及Orai的序列分析显示鲤鱼与金鱼、斑马鱼的亲缘关系更近。其次,为明确鲤鱼stim1及orai是否参与免疫应答,本实验通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分别检测了stim1a、stim1b、orai1以及orai2的基础表达及其在不同免疫刺激条件下的表达变化。基础表达分析结果表明,stim1a、stim1b、orai1及orai2在脑和脾脏中都具有较高的表达水平,而在肠中的表达量都较低。构建LPS腹腔注射鲤鱼刺激模型,分别在脑以及系统免疫相关的头肾、脾脏、肝脏和粘膜免疫相关的前肠、中肠、后肠、鳃和皮肤中检测了四个基因的表达变化,发现多种组织中也均表现出应答变化,提示其参与免疫应答反应。为进一步明确stim及orai在淋巴细胞免疫应答中的表达,本实验分别分离了鲤鱼脾脏淋巴细胞和外周血淋巴细胞,并进行LPS体外刺激,结果表明stim1a,stim1b,orai1,orai2在LPS刺激前后具有显著的表达差异,表明其参与淋巴细胞对LPS的免疫应答。第三,本实验构建了鲤鱼STIM1B原核表达载体,表达纯化了 STIM1B蛋白并筛选了抗体,对LPS注射刺激的鲤鱼脾脏和鳃组织中STIM1B的表达定位进行了免疫组化检测。结果显示,鲤鱼STIM1B在脾脏髓质中表达,鳃中表达量较低,主要分布在黏膜固有层。第四,为进一步明确鲤鱼STIM1及其介导的SOCE功能,本实验构建鲤鱼STIM1B真核表达载体,转染HEK293T细胞,通过免疫荧光观察其在内质网的定位,结果表明STIM1B定位在内质网中。在EPC细胞中,使用钙离子探针Fura-2对STIM1B介导的SOCE功能通过酶标仪进行了检测,结果表明,过表达STIM1B增强了细胞内SOCE的功能,并且随着LPS刺激浓度提高,EPC细胞SOCE的功能也逐渐增强。在此基础上,本实验进一步通过高内涵细胞成像系统对原代培养的鲤鱼脾脏淋巴细胞和外周血淋巴细胞中LPS刺激下SOCE功能进行了检测,结果表明LPS刺激增强鲤鱼脾脏淋巴细胞中SOCE功能,并且在LPS刺激浓度为20μg/ml时作用最显著,而在鲤鱼外周血淋巴细胞中并没有出现明显增强的现象。上述实验为后续进一步开展鲤鱼淋巴细胞中STIM1介导的SOCE功能的研究提供了基础。综上所述,本研究在基因克隆及表达分析的基础上,初步探索了鲤鱼STIM1分子及其介导的SOCE功能在钙离子调控中的作用,建立了在EPC以及原代培养的鲤鱼淋巴细胞中检测SOCE的基本方法,为后续实验中进一步分析STIM1介导的钙离子信号在鲤鱼上皮细胞以及淋巴细胞中的功能研究奠定了基础,为认识STIM1及其介导的钙离子信号在脊椎动物进化中的保守性提供基础依据。

关键词：鲤鱼 STIM1 Orai 淋巴细胞免疫应答

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钛表面构建氧缺陷Co3O4和TiO2基光/声响应抗菌涂层及性能研究

钛表面构建氧缺陷Co3O4和TiO2基光/声响应抗菌涂层及性能研究

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作者：齐金腾东北林业大学

学位级别：硕士

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吸入涡对离心泵稳定性的影响研究

吸入涡对离心泵稳定性的影响研究

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作者：赵天齐西安理工大学

学位级别：硕士

泵站具有防洪、除涝、调水和供水的功能,是水利工程中重要的水工建筑物。由于现实因素导致泵站进水池中容易形成自由表面旋涡,其产生的吸气现象及其复杂流动会造成水泵进口的非均匀入流和水泵内部流态的恶化,影响泵站的稳定运行。本文... 详细信息

泵站具有防洪、除涝、调水和供水的功能,是水利工程中重要的水工建筑物。由于现实因素导致泵站进水池中容易形成自由表面旋涡,其产生的吸气现象及其复杂流动会造成水泵进口的非均匀入流和水泵内部流态的恶化,影响泵站的稳定运行。本文基于模型试验和数值模拟,对不同工况下吸入涡的强度和流动特征进行分析,研究吸入涡对离心泵内部流动特性的影响,探究吸入涡与离心泵内部压力脉动和振动特性的响应关系,提出了消涡效果良好的消涡装置。主要研究工作和成果如下:(1)基于搭建的立式离心泵全流道试验平台,对不同工况下的吸入涡进行可视化试验,对各工况下吸入涡的流动特征及其发展周期进行分析。验证了基于VOF模型和SST k-ω模型的吸入涡数值模拟结果的准确性和可行性。随着流量的增加,吸入涡的涡管变粗、吸气能力提升,发展周期变长。当吸入涡的形态被管壁破坏后,离心泵的非均匀入流加剧,内部流场会进一步恶化,流速掺混严重,出现旋涡和回流。(2)揭示了吸入涡对离心泵内部压力脉动的影响。分析了高强度连续吸入涡下离心泵各过流部件的压力脉动特性,结果表明:吸入涡产生的进气会造成的离心泵内部的气相和流速分布不均匀,导致部分离心泵叶轮流道内存在剧烈的压力脉动,无叶区、导叶流道和蜗壳流道在特定区域存在剧烈的压力脉动。探究了不同工况下的吸入涡与离心泵出口压力脉动的响应关系。结果表明:压力脉动的时频域特征值在一定程度上能反应各工况下吸入涡的强度。在多重分形去趋势波动分析中,有害吸入涡和弱旋涡均在Hurst指数、标度指数曲线的斜率和多重分形谱曲线上体现出较为规律的特征。(3)离心泵X方向比Y方向上的振动剧烈,Y方向上测点对吸入涡造成的影响更加敏感。相较于X方向,Y方向的振动信号的特征值和概率密度峰值对吸入涡强度的响应效果更好。在吸入管上方安装竖直消涡板能够阻止吸入涡发生区产生局部高速、高涡量、高湍动能和低压区,截断吸入涡的发展路径,分解大尺度涡旋,诱导双涡结构的形成,从而抑制吸入涡发展。

关键词：泵站吸入涡压力脉动振动防涡装置

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α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层的制备与性能研究

α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层的制备与性能研究

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作者：张源齐广州大学

学位级别：硕士

发展氢能及核能等新型能源,有望解决人类能源安全、环境污染和可持续发展等问题。但是,氢及其同位素容易吸附在金属材料表面,从而在材料内部渗透扩散,引起关键结构部件的性能下降,造成氢脆,这不仅导致能源的浪费,还容易造成生产安全事... 详细信息

发展氢能及核能等新型能源,有望解决人类能源安全、环境污染和可持续发展等问题。但是,氢及其同位素容易吸附在金属材料表面,从而在材料内部渗透扩散,引起关键结构部件的性能下降,造成氢脆,这不仅导致能源的浪费,还容易造成生产安全事故。为了解决这一问题,目前普遍认可且有效的解决方案是在结构材料表面制备阻氢涂层,以减缓或阻止氢及其同位素进入材料内部。因此,开发出具有高阻氢渗透因子（PRF）、经济实用性、高温稳定性和耐腐蚀性等综合性能优异的阻氢涂层及其制备技术,对氢能源的发展和应用具有重大意义。基于此,本论文采用浆料法,在316L不锈钢表面成功制备了α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层,并且研究了低温制备α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层的方法,系统阐明了涂层组分以及热处理温度对涂层形貌及性能的影响规律,分析了涂层的阻氢性能、力学性能、耐腐性能等综合性能,获得的主要研究结果如下:（1）研究了涂层浆料组分及热处理温度对α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层形貌的影响。结果表明,在浆料中复合粉体总含量控制在20%以下,组分的质量比为α-Al2O3:玻璃粉:高岭土=1:2:1,热处理温度为850℃时,涂层表面质量（无气泡,无裂纹,表面平整）最佳。涂层的微观形貌进一步表明涂层致密且平整,厚度约90μm,内部无贯穿的气孔。XRD物相分析表明,热处理后的α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层形成了新的（K,Al）Si3O8陶瓷相,结晶度为68.56%。涂层表面元素分布均匀,部分区域存在Al元素的富集,在基体与涂层的界面处未观察到元素的扩散。α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层具有较高的阻氢性能,在650℃时,复合粉体含量为20%的涂层试样其稳态D-PRF达到259369。涂层经过10次热循环后表面形貌、硬度和结合力基本没有变化,表明涂层具有较好的抗热冲击性能。表面附有涂层的基体样品的热导率随温度的升高而上升,与裸基体相比,热导率有所下降。涂层表面平均维氏硬度为686.7HV,表面与截面的平均纳米硬度分别为9.2GPa和7.6GPa,与基体的结合力达到49N,摩擦系数稳定在0.63左右。α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层经过1000h的铅铋腐蚀后,表面有明显的腐蚀痕迹,但内部致密完整,未发现铅铋元素的侵入,涂层具有较好的抗铅铋腐蚀性能。经过盐雾腐蚀后的涂层边缘出现了大面积的层状剥落,中心区域未受腐蚀影响。熔融氯盐对涂层产生了较为严重的腐蚀,最大基体内晶间腐蚀深度达到了106.7μm。氢氟酸腐蚀后涂层基本溶解,对基体的保护失效。（2）为进一步降低烧结温度,本论文研究了浆料组分和热处理温度对低温下制备α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层形貌的影响规律。结果表明,在浆料中复合粉体的配比为α-Al2O3:低温玻璃粉=1:3,热处理温度为600℃时,涂层的表面质量最佳,复合粉体含量的增加会导致涂层表面微观形貌下的不规则形状孔隙增多,但总体结构致密。涂层表面元素分布基本均匀,随着复合粉体含量的增多,Al元素聚集的范围增加,在这些区域形成了Al-Si-Na-K-O复杂化合物。通过调控复合粉体含量,低温下制备的α-Al2O3复合氧化物陶瓷阻氢涂层的表面平均维氏硬度最高达到了1134.1HV,是316L不锈钢基体的5倍左右,涂层与基体的结合力最高达到了58N。

关键词：能源氢脆不锈钢阻氢涂层浆料法

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黄芪八珍汤治疗老年股骨粗隆间骨折PFNA术后隐性失血的疗效观察

黄芪八珍汤治疗老年股骨粗隆间骨折PFNA术后隐性失血的疗效观察

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作者：齐乔重庆医科大学

学位级别：硕士

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双碳目标下PPP项目物有所值评价研究

双碳目标下PPP项目物有所值评价研究

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作者：李泽齐江西财经大学

学位级别：硕士

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基于HSK六级试题的近义词辨析探究

基于HSK六级试题的近义词辨析探究

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作者：陈凤齐河北大学

学位级别：硕士

在国际中文教学中,近义词一直是学习者学习的重点和难点。HSK六级试题中选词填空这一题型是主要考察学习者近义词辨析能力的题目,所以本文以2010年-2018年40套HSK六级试题选词填空中出现的近义词为研究对象,结合HSK动态作文语料库,研究... 详细信息

在国际中文教学中,近义词一直是学习者学习的重点和难点。HSK六级试题中选词填空这一题型是主要考察学习者近义词辨析能力的题目,所以本文以2010年-2018年40套HSK六级试题选词填空中出现的近义词为研究对象,结合HSK动态作文语料库,研究学习者的实际误用情况,对出现组内偏误的近义词进行综合辨析,探究影响学习者近义词辨析的因素,并提出国际中文教学中近义词辨析的建议。论文共分为以下五个部分:第一部分是绪论,主要论述了本文的选题缘由、研究现状、研究内容和研究方法,研究方法主要包括数据统计法、偏误分析法以及定量分析法,接着论述了本文的研究目的和意义以及创新之处。第二部分主要界定了国际中文教学中近义词辨析的对象和范围,论述了近义词辨析的原则和方法。本文选取的近义词要满足两个条件:一个是近义,一个是词。“词”是由语素构成的,最小的能独立运用的语言单位,所谓“近义”是以《现代汉语词典》(第7版)中的释义为标准,意义相同、相近、有联系的都可以作为本文的研究对象。第三部分是对2010年-2018年40套HSK六级真题中近义词的选取和统计,主要介绍了HSK六级考试的题型以及近义词的分布情况,整理出40套2010年-2018年HSK六级真题选词填空中的高频近义词,分析了高频近义词在大纲中的对应情况,考察了高频近义词的等级。第四部分是基于HSK动态作文语料库的近义词辨析研究。首先,把高频近义词放在HSK动态作文语料库中进行检索,分析学习者的实际误用情况,对出现组内偏误的近义词进行综合辨析,探讨影响学习者进行近义词辨析的因素。第五部分主要从学习者、教师、教材三个方面提出国际中文教学中近义词辨析的建议,以期完善近义词教学体系,促进国际中文教学。

关键词：国际中文教育近义词辨析 HSK六级试题

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新时代统一战线凝心聚力作用研究

新时代统一战线凝心聚力作用研究

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作者：齐金枝吉林大学

学位级别：硕士

统一战线是马克思主义的重要策略和战略,中国共产党人将其联合斗争理论与中国的具体国情相结合,创造性的发展了统一战线思想,使其在中国革命、建设、改革的发展历程中发挥了凝心聚力的重要作用。思考领悟统一战线发挥的重要作用,就要将... 详细信息

统一战线是马克思主义的重要策略和战略,中国共产党人将其联合斗争理论与中国的具体国情相结合,创造性的发展了统一战线思想,使其在中国革命、建设、改革的发展历程中发挥了凝心聚力的重要作用。思考领悟统一战线发挥的重要作用,就要将其放在不同历史阶段党和国家工作大局当中来认识。所以对于新时代统一战线的凝心聚力作用的认识是建立在与其他阶段统一战线作用对比的基础上的,是建立在对世界百年未有之大变局和中华民族伟大复兴战略全局的深刻理解的基础上的,是建立在新的征程上更好发挥统一战线凝聚人心汇聚力量的作用以维护国家主权、安全和发展利益,实现中华民族伟大复兴,增强党的阶级基础和群众基础的基础上的。文章运用历史分析方法、辩证分析方法等研究思考新时代统一战线的凝心聚力作用,对新时代统一战线发挥的作用进行了深入思考和系统研究。第一章为绪论,通过对新时代统一战线凝心聚力作用的研究背景、意义、研究现状等内容进行概述,为本文研究分析奠定扎实的基础。第二章为新时代统一战线凝心聚力作用的理论概述,在基本界定中对新时代统一战线凝心聚力作用的概念界定、理论基础、科学内涵等进行系统阐述,新时代的统一战线是中国共产党领导人民推动国家和社会发展的政治整合机制,是推动社会主义现代化强国建设的重要法宝,是有助于和平发展的推动世界人民团结发展发挥示范性作用的强大武器,是契合中华民族共同体与人类命运共同体的双重目标的统一战线。在新时代统一战线凝心聚力作用发挥的理论基础的阐释中,对经典马克思主义联合斗争思想、历届共产党领导人的统战思想、以及中华传统文化中的和合文化等进行详尽的分析,最后概述新时代统一战线凝心聚力作用的显著特征,将其总结为持续扩大团结对象的鲜明人民性、重视调整空间格局的战略全局性以及着力完善工作部署的逻辑系统性。第三章是对统一战线凝心聚力作用的发挥进行历史脉络梳理,从克敌制胜的法宝到执政兴国的法宝,一直到现在实现中华民族伟大复兴的法宝,从不同历史阶段的统一战线作用的更迭中领悟其通过凝心聚力实现的对于国家发展的重要作用。在第四章中对新时代统一战线作用的现实维度进行系统分析,将以共同理想和共同目标为感召的强大向心力、以人民政协作为重要的组织形式和平台载体、以大统一战线的思维理念统筹规划工作格局作为其凝心聚力的实现方式;把团结一切可以团结的力量以巩固党的领导、团结全体中华儿女实现中华民族伟大复兴、团结全世界人民推动构建人类命运共同体作为其凝心聚力的功能机制;分析得出资本逻辑张力对于共同价值根基的侵蚀、社会阶层分化对于整合利益格局的冲击、网络舆论多元对于凝聚社会共识的削弱成为新时代统一战线发挥作用的重大现实挑战的结论。在第五章,针对新时代统一战线作用发挥所面临的困境,提出具有可行性的实践路径与未来展望,新时代统一战线坚持以人民为中心的根本价值指向、坚持以全面发展协商民主实践作为体系牵引以及以网络统战能力提升发展作为技术支撑,以此更好发挥其在实现中华民族伟大复兴的凝心聚力作用,推进统战工作高质量发展。文章的创新点在于在新时代统一战线作用的研究框架和内容有所突破,将统一战线的内核阐释为凝心聚力,以此小切入口展开研究;在统一战线凝心聚力的表现呈现方面以克敌制胜、执政兴国、实现中华民族伟大复兴为核心进行系统性梳理,始终围绕其功能角色、作用发挥梳理统一战线的发展演进;在新时代统一战线的凝心聚力作用实现方式,将其概括为共同理想和共同目标为感召的强大向心力、人民政协作为重要的组织形式和平台载体、大统一战线的思维理念统筹规划工作格局,这三方面是新时代统一战线作用发挥的重要抓手。

关键词：统一战线凝心聚力党的领导

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窄式阅读应用于高中英语阅读教学中的行动研究

窄式阅读应用于高中英语阅读教学中的行动研究

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作者：齐阿茹娜内蒙古师范大学

学位级别：硕士

《普通高中英语课程标准(2017版、2020年修订)》提出了阅读可以让学生体验更丰富的语篇文体,通过阅读发展阅读能力。语篇类型包括书面语篇以及不同的文体形式,如记叙文等文体。阅读教学中存在一些阅读策略使用意识不强,学生对阅读技巧... 详细信息

《普通高中英语课程标准(2017版、2020年修订)》提出了阅读可以让学生体验更丰富的语篇文体,通过阅读发展阅读能力。语篇类型包括书面语篇以及不同的文体形式,如记叙文等文体。阅读教学中存在一些阅读策略使用意识不强,学生对阅读技巧了解不深,从而很难了解相关话题和体裁的内容知识的问题,有待解决。随着新一轮的新高考改革,新高考中阅读理解单个分值是2.5分,占比有所上升。所以本研究在阅读教学中引入窄式阅读模式来解决阅读困难以提升学生的英语成绩和阅读策略。Cho,Ahn,and Krashen在2005年提出了“窄式阅读”一词,窄式阅读可以通过阅读一个体裁,一个主题,或者一个作家的著作来实现。克拉申(2004)认为通过窄式阅读让学习者频繁接触相关背景知识,词汇和文体结构以及题材,使其熟悉相关内容。研究者将“窄式阅读”运用到阅读教学中,对呼和浩特某高中44名高一学生展开三个月行动研究。每堂阅读课遵循窄式阅读教学模式,即以教材单元题材结合高考四大体裁文体中的题型训练为基础,集中训练。采用测试、教师日志、阅读策略调查问卷、访谈等研究工具,运用数据统计软件SPSS26.0进行数据分析。本研究的研究假设有:(1)高中英语阅读教学运用窄式阅读模式可以提升学生的阅读解题能力。高中生英语阅读教学中应用窄式阅读模式,第一轮行动研究假设是窄式阅读模式可以提高学生记叙文词义猜测题解题能力。第二轮研究假设是应用窄式阅读模式,可以提高学生应用文细节理解题和议论文主旨大意题能力。第三轮行动研究假设是应用窄式阅读模式,可以提高学生说明文推理判断题的能力。(2)阅读教学运用窄式阅读模式可以提升学生的阅读策略。三轮行动研究根据高考体裁和单元题材设计行动研究并测试学生的阅读中解题能力。第二个阅读策略假设贯穿于三轮行动研究中。该假设需要用调查问卷和访谈等来体现。本研究结论有:一、高中生通过窄式阅读模式提升了记叙文词义猜测能力、议论文主旨大意能力、应用文细节理解题的能力以及说明文推理判断能力。二、阅读策略假设通过调查问卷测试,问卷数据显示高中生阅读策略比如认知策略,情感策略和元认知策略通过窄式阅读模式有显著提升。访谈表明沟通策略通过窄式阅读有所提升。本研究的意义是在理论扩展了窄式阅读模式,实践中解决了高中学生英语阅读问题并且提供了科学的方法。

关键词：高中英语阅读窄式阅读行动研究阅读策略

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碳青霉烯类耐药肠杆菌血流感染耐药性与传播机制研究

碳青霉烯类耐药肠杆菌血流感染耐药性与传播机制研究

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作者：邢康齐济宁医学院

学位级别：硕士

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