检索结果-南通市图书馆

作者：张如婧华侨大学

学位级别：硕士

细胞珠蛋白（Cytoglobin，Cygb）是Kawada等在大鼠肝星状细胞中发现的一种六配位血红素球蛋白，分子量为21.4kDa。目前研究表明Cygb具有过氧化物酶活性和清除氧自由基的功能，并能通过调控Cygb基因的表达抑制肝纤维化。但Cygb作为一种... 详细信息

细胞珠蛋白（Cytoglobin，Cygb）是Kawada等在大鼠肝星状细胞中发现的一种六配位血红素球蛋白，分子量为21.4kDa。目前研究表明Cygb具有过氧化物酶活性和清除氧自由基的功能，并能通过调控Cygb基因的表达抑制肝纤维化。但Cygb作为一种胞浆蛋白，且在细胞表面无Cygb受体的情况下，外源Cygb无法主动进出细胞，发挥其抗氧化、抗炎症及抗肝纤维化等生物学功能。本论文结合穿膜肽TAT的穿膜作用和Cygb的生物学功能，制备及探讨TAT-Cygb融合蛋白在促进皮肤创伤愈合及抗肝纤维化方面的作用。首先，通过乳糖诱导表达E. coli BL21/pET22b-TAT-Cygb中的TAT-Cygb融合蛋白，经CM阳离子交换层析、S-100分子筛层析、G-25分子筛脱盐等分离纯化过程，以及SDS-PAGE、LC/MS和Western blot鉴定，得到纯度>95%、浓度为3.273mg/mL、过氧化物酶比活力为（422.63±3.17）U/mg的TAT-Cygb，并通过免疫细胞化学鉴定TAT-Cygb的穿膜能力;其次，利用H2O2氧化应激损伤模型和超氧化物阴离子荧光探针证明TAT-Cygb对细胞的保护作用和治疗氧化损伤的作用，并能降低细胞内超氧化物阴离子的水平，而无穿膜能力的Cygb无法缓解已氧化损伤的细胞;再次，利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型验证TAT-Cygb的抗炎作用，在大鼠全层皮肤切除的创伤愈合实验中，TAT-Cygb可发挥抗炎作用促进皮肤创伤愈合，并通过调节细胞内的氧化应激防止成纤维细胞过度增殖或迁移，从而有效减轻皮肤愈合后瘢痕修复区域的大小;最后，在抗小鼠肝纤维化实验中，高剂量的TAT-Cygb可逆转CCl4诱导的小鼠肝纤维化，与模型组相比，肝脏内胶原纤维含量明显减少，肝小叶结构恢复正常，肝功能指标和纤维化血清标志物等含量均趋于正常。本论文首次利用TAT的穿膜能力介导Cygb进入胞内，并证明TAT-Cygb融合蛋白具有促进皮肤创伤愈合及抗肝纤维化的作用，为后续开展Cygb抗炎症、抗衰老、抗肝纤维化的应用研究奠定了科学基础。

关键词：细胞珠蛋白细胞穿膜肽氧化应激创伤愈合肝纤维化

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析

引用

生物工程学报 2014年第8期30卷 1247-1255页

作者：张如婧李招发施伟杰许瑞安华侨大学生物医学学院福建泉州362021 分子药物教育部工程研究中心福建泉州362021

旨在利用细胞穿膜肽TAT的穿膜作用和细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)的抗衰老、抗纤维化的功能,将二者通过基因工程的手段融合在一起,以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb。通过两次重叠PCR技术获得了TAT-Cygb DNA,将其插入原核表达载体pET22b... 详细信息

旨在利用细胞穿膜肽TAT的穿膜作用和细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)的抗衰老、抗纤维化的功能,将二者通过基因工程的手段融合在一起,以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb。通过两次重叠PCR技术获得了TAT-Cygb DNA,将其插入原核表达载体pET22b质粒中,转化至大肠杆菌BL-21,筛选出可表达TAT-Cygb融合蛋白的大肠杆菌工程菌株。经乳糖诱导表达TAT-Cygb,CM阳离子交换层析(CM Sepharose Fast Flow Protocol)获得纯度高达95%的TAT-Cygb融合蛋白,分子量约23 kDa。生物活性实验显示,TAT-Cygb过氧化物酶比活力达到(422.30±0.36)U/mg。TAT-Cygb预处理的Hacat细胞可免受H2O2氧化应激的损伤(RGR=100%),同时TAT-Cygb可治疗已被H2O2氧化损伤的细胞(RGR=98%),与Cygb处理组相比具有显著差异(RGR=79%)。该研究首次成功利用大肠杆菌表达系统表达了可穿透细胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb融合蛋白,为继续开展Cygb在抗衰老、抗纤维化和抗癌领域的研究奠定了基础。

关键词：细胞穿膜肽细胞珠蛋白融合蛋白纯化氧化应激

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

树脂充填病例

树脂充填病例

引用

辽宁民营口腔首届病例大赛

作者：张如婧沈阳市新兴齿科

病史概述:患者为36岁女性,对于牙科有恐惧心理,无定期检查牙齿习惯。几日前发现前牙发黑,因有碍美观,来诊要求解决前牙变色的问题。检查:咀嚼系统检查:关节、及咀嚼肌无明显异常。美学检查:上前牙排列整齐,切缘曲线与笑线较为协调。上...

病史概述:患者为36岁女性,对于牙科有恐惧心理,无定期检查牙齿习惯。几日前发现前牙发黑,因有碍美观,来诊要求解决前牙变色的问题。检查:咀嚼系统检查:关节、及咀嚼肌无明显异常。美学检查:上前牙排列整齐,切缘曲线与笑线较为协调。上前牙切端外露适度,无明显的颊侧黑三角。牙列中线居中。上中切牙长宽比例适度。前牙龈缘曲线稍微不对称。牙体检查:见右上中切牙近中色暗,牙冠唇舌面观完整,冷测正常,叩痛无,松动无。其它牙齿,未见异常。

关键词：

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

恋人

引用

青岛文学 2008年第6期 47-48页

作者：张如婧

向阳总是喜欢在大楼右边的楼梯上坐着,看着来来往往不相干的人群及天空,守着自己与青春有关的莫名忧伤,偶尔和相识的人打声招呼。他已经习惯了不必思考、没有目标的观看。16岁,还仅是个渴望懵懂爱情的年纪。繁忙的人群中,向阳轻易的就... 详细信息

向阳总是喜欢在大楼右边的楼梯上坐着,看着来来往往不相干的人群及天空,守着自己与青春有关的莫名忧伤,偶尔和相识的人打声招呼。他已经习惯了不必思考、没有目标的观看。16岁,还仅是个渴望懵懂爱情的年纪。繁忙的人群中,向阳轻易的就将她找到,从那之后,向阳的观看就有了目标,他就只等待她的出现,望着她随意的上楼下楼。向阳不想承认这就是一见钟情,因为他觉得一切都好像是似曾相识,她微笑的样子。

关键词：楼梯习惯右边微笑孤独忘记简单认识人群期待

来源：

维普期刊数据库评论