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Avidin—HRP制备及其实验因素的控制

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免疫学杂志 1990年第1期 51-53+44页

作者：张卫苏刘运义南通医学院微生物学教研室南通医学院微生物学教研室南通 226001

本文报导将过碘酸法连接亲和素和辣根过氧化物酶用于ELISA技术,以增加标准ELISA的敏感性用于检测人IgG。亲和素与活化辣根过氧化物酶克分子比例与敏感性相关,1:1.5比例最为敏感。比较了化学修饰亲和素—辣根酶酸和亲和素—辣根酶两种连... 详细信息

本文报导将过碘酸法连接亲和素和辣根过氧化物酶用于ELISA技术,以增加标准ELISA的敏感性用于检测人IgG。亲和素与活化辣根过氧化物酶克分子比例与敏感性相关,1:1.5比例最为敏感。比较了化学修饰亲和素—辣根酶酸和亲和素—辣根酶两种连接物。前者用于BA—ELISA,敏感性限度高于标准ELISA 4倍,并且实验结果相当稳定;亲和素—辣根酶用于BA—ELISA,比普通ELISA敏感4—16倍,但是,由于存在强非特异性吸附和高变异系数,对于大多数用途的检测是不能接受的。其它可能改善BA—ELISA的实验因素作了讨论。

关键词：亲和素—辣根过氧化物酶连接物过碘酸法化学修饰

Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的实验研究

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上海免疫学杂志 2000年第2期20卷 97-100页

作者：达展云张卫苏南通医学院附属医院江苏南通 226001 南通医学院分子生物学研究室江苏南通

通过Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎受体相关蛋白的研究，探讨Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎的分子发病机制。运用基因重组技术，将编码受体相关蛋白羧基端１０８个氨基酸多肽的ｃＤＮＡ克隆到大直菌高效表达载体ｐＧＥＸ。通过异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷... 详细信息

通过Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎受体相关蛋白的研究，探讨Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎的分子发病机制。运用基因重组技术，将编码受体相关蛋白羧基端１０８个氨基酸多肽的ｃＤＮＡ克隆到大直菌高效表达载体ｐＧＥＸ。通过异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，表达了分子量为４４×１０＾３的融合蛋白。经ＧＳＴ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和性层析柱，纯化了融合蛋白。

关键词： Heymann肾炎受体相关蛋白重组融合蛋白

Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征

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中华肾脏病杂志 1996年第6期12卷 343-346页

作者：朱爱平张卫苏蒋季杰刘运义钱桐荪南通医学院附属医院肾内科

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，... 详细信息

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。

关键词：肾炎 Heymann肾炎单克隆抗体致病原

Tamm-Horsfall糖蛋白单克隆抗体制备及其临床应用

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现代免疫学 1991年第4期23卷 208-211页

作者：张卫苏刘运义朱爱平钱桐荪南通医学院微生物学教研室江苏南通226001 南通医学院附属医院肾内科

用0.58mol/L NaCl沉淀提取Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)制备了三株抗THP单克隆抗体(McAb)。免疫印迹技术(Immunoblotting Technigue,IBT)证明这些McAb特异性地和94kD THP抗原结合,ELISA抑制试验表明三株McAb识别THP抗原的不同位点。用McAb双夹心ELISA法测定尿THP的含量,表明尿THP含量与血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)呈显著负相关(P<0.01),与内生肌酐清除率(Ccr)呈明显正相关(P<0.01),BUN、Scr、Ccr正常的各种肾病尿THP含量无明显异常(P<0.05)。测定尿THP含量可作为判断肾功能损害程度的良好指标。

关键词：抗体制备免疫印迹技术内生肌酐清除率临床应用肾功能损害特异性肾组织纤维化负相关肾小管细胞杂交瘤细胞

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中华微生物学和免疫学杂志 1994年第4期14卷 267-271页

作者：张卫苏朱爱平刘运义南通医学院微生物学和免疫学研究室南通医学院附属医院肾病研究室

Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。ｇｐ３３０糖蛋白和４４ｋＤ受体相关蛋白（ＲＡＰ组成Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎抗原复合物（ＨＮＡＣ），被证明是ＨＮ的主要致病原。本研究中，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆了... 详细信息

Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。ｇｐ３３０糖蛋白和４４ｋＤ受体相关蛋白（ＲＡＰ组成Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎抗原复合物（ＨＮＡＣ），被证明是ＨＮ的主要致病原。本研究中，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆了ＲＡＰ基因，用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术克隆了ＲＡＰ羧基端１１８个氨基酸的基因，ＤＮＡ序列分析克隆基因与ＲＡＰ相同，原位杂交发现ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球上皮细胞表达。

关键词：海曼肾炎肾炎受体相关蛋白克隆

单克隆抗体c_(3～6)诱导被动型Heymann肾炎病理机制

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中国病理生理杂志 1998年第1期14卷 10-13页

作者：朱爱平蒋季杰张卫苏季玉红达展云邵维斌江苏南通医学院附属医院肾内科江苏南通医学院微生物教研室

目的和方法：Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）是一种用于研究人类膜性肾病的大鼠动物模型。用主动型ＨＮ模型大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，制备针对ＨＮ致病原的单克隆抗体ｃ３～６（ＭｃＡｂｃ３～６），并用它诱导大鼠... 详细信息

目的和方法：Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）是一种用于研究人类膜性肾病的大鼠动物模型。用主动型ＨＮ模型大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，制备针对ＨＮ致病原的单克隆抗体ｃ３～６（ＭｃＡｂｃ３～６），并用它诱导大鼠被动型ＨＮ。结果：免疫酶组织化学及免疫电镜显示，ＭｃＡｂｃ３～６特异性识别肾小球上皮足突细胞膜抗原并与其结合形成免疫复合物。

关键词：肾小球肾炎抗体,单克隆免疫复合物病

在同系小鼠制备抗独特型抗体—BHCG抗独特型抗体的制备和鉴定

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中国实验临床免疫学杂志 1989年第4期1卷 13-16页

作者：张卫苏刘运义

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肾小球上皮足突细胞培养

交通医学 2000年第4期14卷 330-331页

作者：顾星星张卫苏南通医学院 226001

目的 :分离培养肾小球上皮足突细胞。方法 :机械分离低龄SD大鼠肾小球、胰酶 ,胶原酶消化后接种于选择性培养基K1体系 ,使肾小球大于 6 0个 /cm2 ,培养 8～ 10天后收获细胞 ,用形态学特征 ,嘌呤酶素选择性杀伤作用 ,抗受体相关蛋白 (RAP... 详细信息

目的 :分离培养肾小球上皮足突细胞。方法 :机械分离低龄SD大鼠肾小球、胰酶 ,胶原酶消化后接种于选择性培养基K1体系 ,使肾小球大于 6 0个 /cm2 ,培养 8～ 10天后收获细胞 ,用形态学特征 ,嘌呤酶素选择性杀伤作用 ,抗受体相关蛋白 (RAP)免疫荧光技术鉴定细胞类型。结果 :收获的培养细胞为肾小球上皮足突细胞。结论 :该法能较为快捷、准确地获得所需的培养细胞类型。

关键词：细胞培养肾小球上皮足突细胞免疫荧光技术

Heymann肾炎原位免疫复合物形成机理的分子学研究

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中华肾脏病杂志 1996年第1期12卷 7-10页

作者：朱爱平张卫苏蒋季杰李晓宇达展云胡迎青南通医学院附属医院肾内科南通医学院附属医院分子生物研究室

通过受体相关蛋白（ＲＡＰ）ｃＤＮＡ探针，用组织原位杂文技术首次证明了ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球细胞中的表达。进一步通过ＲＡＰ融会蛋白抗血清的体外间接免疫荧光，免疫电镜和体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明肾小球细胞中... 详细信息

通过受体相关蛋白（ＲＡＰ）ｃＤＮＡ探针，用组织原位杂文技术首次证明了ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球细胞中的表达。进一步通过ＲＡＰ融会蛋白抗血清的体外间接免疫荧光，免疫电镜和体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明肾小球细胞中表达ＲＡＰ细胞为肾小球上皮足突细胞，循环抗体能与其结合形成免疫复合物并刺激足突细胞内新抗原的不断合成，使得免疫复合物不断增大。从基因水平为Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）原位免疫复合物形成机理提供了实验依据，也为今后的基因抑制治疗提供了可能性。

关键词： Heymann肾炎受体相关蛋白原位杂交免疫复合物