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人PD-1-Fc和B7-H1-Fc分子的构建及真核表达

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人PD-1-Fc和B7-H1-Fc分子的构建及真核表达

作者：张华欣第三军医大学

学位级别：硕士

PD-1（programmed death 1）是一个含有免疫受体酪氨酸抑制性基序（ITIM）免疫球蛋白超家族成员，与CD28、CTLA-4和ICOS分子同属于CD28超家族，与同为负调节共刺激分子CTLA-4的胞外区有24％同源，它为一分子量为55KD的Ⅰ型跨膜蛋白，主... 详细信息

PD-1（programmed death 1）是一个含有免疫受体酪氨酸抑制性基序（ITIM）免疫球蛋白超家族成员，与CD28、CTLA-4和ICOS分子同属于CD28超家族，与同为负调节共刺激分子CTLA-4的胞外区有24％同源，它为一分子量为55KD的Ⅰ型跨膜蛋白，主要以单体形式表达于活化的CD4+T和CD8+T细胞及B细胞，其配体PD-L1（B7-H1）和PD-L2（B7-DC）则广泛地表达于淋巴组织和非淋巴组织各种细胞。体外实验发现：PD-1与PD-L1或PD-L2结合后，能抑制已经活化的T细胞增殖及产生细胞因子，特别是抑制效应性CD8+T细胞的功能。在抗原刺激时，PD-1-PD-L1途径能拮抗较强烈的CD28-B7信号，揭示了PD-1-PD-L1途径在T细胞应答中的负调节作用。PD-L1和PD-L2在非淋巴组织的表达，提示它们可以下调自身反应性T、B细胞在外周组织中的应答。Pd-1-/-的C57BL/C小鼠可发生风湿、肾小球肾炎、扩张性心肌病及SLE等多种自身免疫性疾病，表明缺乏PD-1时，外周的自身反应性T细胞有自发活化的倾向。研究证实，增强PD-1的信号可以下调已活化的T、B细胞在外周组织中的应答，在维持外周T、B细胞耐受中发挥重要的作用。因为PD-1具有负调节信号方面的作用，是影响效应性和记忆性T细胞功能的重要共刺激信号通路。所以它很快成为免疫学研究的一大热点分子。为了深入探讨PD-1在调节外周耐受中的机制及其它生物学功能，制备可溶性分子PD-1-Fc和PD-L1-Fc（B7-H1-Fc）蛋白就具有重要意义：一方面，可溶性的PD-L1-Fc结合受体后，在体内可增强PD-1对T细胞负调节作用，当条件成熟时，可被开发成一种免疫抑制剂用于器官移植；另一方面，获得的可溶性PD一1一Fc蛋白，为我们进一步探讨PD一1在免疫自稳调节中的地位及其在动力学与信号转导方面的机制奠定了坚实的基础。本研究主要进行了以下三部分的工作: 1.人PD一1全长cDNA的克隆、真核表达载体的构建（l）采用PCR技术，从来自活化正常人T细胞的cDNA文库p队***扩增出编码人PD一1全长288aa的cDNA序列，装入克隆载体后，经Amp抗J胜筛选获得阳性重组子后，经测序证实同公布的PD一IcDNA序列一致，编码氨基酸完全一致。（2）将全长PD一1的eDNA片段从克隆载体上用Hindin和Xbal切下来，装入Hindlll和Xbal线性化的真核表达载体penNA3 .1（+）中，酶切鉴定出阳性重组子，为从细胞水平研究PD一1的功能奠定了基础。 2.人PD一1一F。及B7一Hl一F。的真核表达载体的构建。利用基因工程技术将PD一1膜外区与hlgGIFc一起装入真核表达载体peDNA3 .1（+）中，而将B7一Hl膜外区与hlgGIFc一起装入真核表达载体pcl一neo中:经筛选序列测定，证实得到了PD一1和B7一Hl的可溶性表达重组载体，为进一步得到其可溶性蛋白打下了基础。 3.人PD一1一Fc和B7一Hl一Fc蛋白的表达，纯化和鉴定。（l）用脂质体法转染哺乳动物细胞CHO，夹心EUSA法，证实培养上清中有融合蛋白的表达。（2）蛋白A亲和层析法纯化融合蛋白PD一l一Fe和 B7一Hl一Fe，用SDS一PAGE初步确定它们单体的分子量与预测的基本相符，分别为42.86KD和sl.76KD。（3）用化学发光免疫印迹法进一步证实培养上清中有PD一1一Fc和B7一Hl一Fc蛋白的表达，且具有免疫学活性。

关键词：人PD-1 人B7-H1 PD-1-Fc B7-H1-Fc PCR 真核表达蛋白A亲和层析免疫印迹

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基于行为模式的老年公寓室内空间环境设计

基于行为模式的老年公寓室内空间环境设计

作者：张华欣西安工业大学

学位级别：硕士

由于我国老龄化的到来,养老设施建设处于初步发展时期,老年公寓作为养老设施的重要部分,其建设受到社会各界的关注。鉴于我国老年公寓空间环境的单一状况,论文以老年人行为模式特征为基点,从建筑学的角度,结合宝鸡地区的地域特色,尝试... 详细信息

由于我国老龄化的到来,养老设施建设处于初步发展时期,老年公寓作为养老设施的重要部分,其建设受到社会各界的关注。鉴于我国老年公寓空间环境的单一状况,论文以老年人行为模式特征为基点,从建筑学的角度,结合宝鸡地区的地域特色,尝试对老年公寓内部空间进行空间环境的设计研究。文章首先分析了老年公寓的发展历程、现状及室内空间环境划分;其次针对老年人的行为模式的生理特征、心理特征以及行为活动特征进行老年公寓室内空间环境分析,并对宝鸡市老年人及宝鸡地区的老年公寓进行调研及总结;最后分别以自理型老年人、介助型老年人、介护型老年人这三种人群在居住空间、公共空间、辅助空间三个空间里进行归纳和总结。通过调研总结出适合宝鸡市老年公寓室内空间环境设计的策略,力求营造宝鸡地域特色的符合老年人行为模式的老年公寓室内空间环境,希望通过本论文的设计丰富老年公寓设计实践参考。

关键词：行为模式老年公寓室内空间环境

湖州传统节俗文化创意设计实践研究 ——以端午节为例

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湖州传统节俗文化创意设计实践研究 —...

作者：张华欣湖州师范学院

学位级别：硕士

传统节俗是城乡发展进程中物质文明与精神文明相结合的产物,是极具地方特色、乡土气息和时代特征的文化符号。本文尝试通过对湖州传统节俗的历史发展与遗存现状进行较为全面的了解,并在此基础上运用设计学的考察方法与研究路径,针对节... 详细信息

传统节俗是城乡发展进程中物质文明与精神文明相结合的产物,是极具地方特色、乡土气息和时代特征的文化符号。本文尝试通过对湖州传统节俗的历史发展与遗存现状进行较为全面的了解,并在此基础上运用设计学的考察方法与研究路径,针对节俗文化在当代民众观念中逐步淡化,相关传统技艺流失,文化创意产品同质化等问题进行调研与思考。并以湖州端午节为典型案例,通过深入挖掘地方节俗文化视觉元素及其内涵,采用文化创意手段进行再设计,旨在探索传统民俗文化的当代振兴之路,阐释其文化特征和当代价值,探析其视觉元素以及文化创意设计思路,传承与发扬其中的真善美内容,从而对地方旅游宣传、民风建设、文化保护等工作起到一定积极作用,为城市发展与乡村振兴尽绵薄之力。

关键词：湖州传统节俗文化创意设计端午节

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试论群体性事件的成因及法律对策

试论群体性事件的成因及法律对策

作者：张华欣郑州大学

学位级别：硕士

自改革开放以来,我国在经济领域取得了举世瞩目的成就,在经济的发展带来公民权利意识的提高的同时,经济发展的不平衡也产生了社会问题,城乡二元制经济已经不能满足社会发展的需要,城乡差距在不断地扩大等等,这些都为群体性事件的大规模... 详细信息

自改革开放以来,我国在经济领域取得了举世瞩目的成就,在经济的发展带来公民权利意识的提高的同时,经济发展的不平衡也产生了社会问题,城乡二元制经济已经不能满足社会发展的需要,城乡差距在不断地扩大等等,这些都为群体性事件的大规模爆发埋下了伏笔。尤其是近十年,群体性事件的发生呈快速上升趋势,某某地方发生“群体性事件”的报道经常见诸于报纸、电视等媒体。群体性事件已成为政府“维稳”工作的重点,政府也将群体性事件定义为扰乱社会秩序的行为。然而群体性事件没有随着政府处理力度的加大而减少,反而愈来愈多,这就说明群体性事件的爆发有其深刻的背景,需要对其进行重新认识且深入研究。本文第一部分是关于群体性事件的综述,描述了我国群体性事件的现状,以及目前国内学者对群体性事件的研究。论文第二部分是关于群体性事件的概述,从群体性事件的概念、分类和特征等几个方面入手对群体性事件的含义进行分析。论文的第三部分分析了群体性事件形成的原因,从两个方面着手,首先是社会原因,其次是法治原因。其中着重分析了群体性事件发生的法治原因。论文的第四部分分析了群体性事件背后所隐藏的价值问题,并对群体性事件从消极和积极两方面进行论述,对群体性事件进行比较全面客观的认识。论文的第五部分提出了应对群体性事件的法律对策。

关键词：群体性事件成因分析法律对策

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建立质量监管的长效机制

中国纤检 2012年第23期 49-50页

作者：张华欣上海市纤维检验所

如何建立质量监管长效机制,提升质量监管工作服务,应当成为专业纤维检验机构工作的重中之重。当前抓长效质量监管的主要问题和必要性1.由于纤维产品存在生产销售以及市场需求的多样性,企业会根据市场的需要为了实现利润最大化,不顾质量... 详细信息

如何建立质量监管长效机制,提升质量监管工作服务,应当成为专业纤维检验机构工作的重中之重。当前抓长效质量监管的主要问题和必要性1.由于纤维产品存在生产销售以及市场需求的多样性,企业会根据市场的需要为了实现利润最大化,不顾质量技术标准的要求,生产不合格的产品,以质次价低挤占市场,企业在生产加工过程中不按标准生产,或是缺少检测手段,造成出厂时不能进行质量监控、检验,造成大量存在质量隐患的产品流向市场。

关键词：质量监管机制专业纤维检验机构质量技术标准市场需求生产销售纤维产品利润最大化

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计算机网络技术的应用及安全防御

科技视界 2023年第2期 52-55页

作者：张华欣江西科技学院江西南昌330098

随着我国进入信息化时代,计算机网络的覆盖面不断增加,计算机网络技术被广泛应用于军事、建筑、教育、物流等领域,随着社会经济的快速发展,需要采取有效安全防御技术,保证计算机网络应用安全性。文章结合计算机网络技术的实际应用,对常... 详细信息

随着我国进入信息化时代,计算机网络的覆盖面不断增加,计算机网络技术被广泛应用于军事、建筑、教育、物流等领域,随着社会经济的快速发展,需要采取有效安全防御技术,保证计算机网络应用安全性。文章结合计算机网络技术的实际应用,对常见的软件漏洞、黑客攻击等安全问题进行了详细的分析,论述了在加强计算机网络的安全管理与预防上,通过采取TCPSYN攻击防御技术、Land攻击防御技术等安全防御技术来加强计算机网络自身的安全性,并采取其他相关措施进一步加强计算机网络的安全防御,希望为相关人员提供参考。

关键词：计算机网络技术安全防御

“一带一路”背景下文化自信融入高校思想政治教育的路径探析

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安徽文学(下半月) 2018年第8期 134-136页

作者：张华欣上海出版印刷高等专科学校

"一带一路"是中国向世界展示自信的顶层战略决策,文化自信是实施"一带一路"战略发展的精神保障。在"一带一路"背景下,把增强大学生文化自觉自信融入思想政治教育全过程,对保证思想政治教育有效性,培养全面发展的大学生具有特殊重要的意义。

关键词：一带一路文化自信大学生思想政治教育

基于PSO-TSA模型的异构通信网络数据异常识别

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长江信息通信 2023年第4期36卷 68-70页

作者：张华欣江西科技学院江西南昌330098

为实现对通信网络数据异常的精准识别,降低网络中噪声对识别结果造成的干扰,引进PSO-TSA模型,设计异构通信网络数据的异常识别方法。将TSA模拟退火算法中的Metropolis准则作为参照,建立异构通信网络多维空间,在空间中检索POS粒子群,获... 详细信息

为实现对通信网络数据异常的精准识别,降低网络中噪声对识别结果造成的干扰,引进PSO-TSA模型,设计异构通信网络数据的异常识别方法。将TSA模拟退火算法中的Metropolis准则作为参照,建立异构通信网络多维空间,在空间中检索POS粒子群,获取异构通信网络数据;构建异构通信网络传输模型,建立信任度较高的异构网络通信信道,提取并聚类异构通信网络异常数据特征信息;将有限数据集合划分为若干个类别,根据数据分类结果,建立网络数据异常群体检测包络模型,实现对网络数据异常群体的检测与识别。实验结果证明,设计方法识别效果良好,在实际应用中,可以实现对数据异常现象的精准识别,解决由于噪声等因素引起的识别结果偏差问题。

关键词： PSO-TSA模型特征提取异常识别异构通信网络

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角色体验法在大学生德育过程中的应用

文史博览(理论) 2016年第3期 82-84页

作者：张华欣上海理工大学社会科学学院

目前我国角色体验法在大学生德育过程中的应用尚不到位,面临轻重视、少机会、零参与等方面的困境,需要不断地探索在德育过程中有效运用角色体验法的路径,引导大学生通过亲身体验的方式获得相应的情感认识,保证大学生德育目标的实现。

关键词：角色体验法大学生德育过程

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