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用生物素化重组质粒探针检测产蛋下降综合症病毒核酸

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病毒学报 1995年第2期11卷 173-179页

作者：张兹钧胡木枝广东珠海拱北动植物检疫局

用ＥＤＳ－７６标准毒株感染鸭胚后，提取病毒核酸，经ＰｓｔＩ酶切后，与质粒ｐＴ７／Ｔ３α－１９重组，并转化到大肠杆菌ＤＨ５α中，筛选出一个插入片段为３１８ｂｐ的重组质粒，并命名为ｐＴＥＺ．Ｐ３。用生物素标记该重组质粒后... 详细信息

用ＥＤＳ－７６标准毒株感染鸭胚后，提取病毒核酸，经ＰｓｔＩ酶切后，与质粒ｐＴ７／Ｔ３α－１９重组，并转化到大肠杆菌ＤＨ５α中，筛选出一个插入片段为３１８ｂｐ的重组质粒，并命名为ｐＴＥＺ．Ｐ３。用生物素标记该重组质粒后，分别对正常鸭胚尿囊液、各地分离的ＥＤＳ毒株和禽类易感的几种病毒进行核酸杂交试验，结果该探针对实验中收到的几种ＥＤＳ分离毒均产生阳性反应，而不与正常鸭胚尿囊液和其它几种禽类病毒杂交；该探针还可从被感染鸡的软壳蛋和肛拭子中检测到病毒。在本研究中，对常规的核酸杂交试验中的样品处理、预杂交及洗涤等程序也作了改进。从采样开始，在两天之内就能得到结果。所以它是一种比病毒分离工作更为简便、快速和经济的方法。探针的标记用生物素代替同位素，也使本方法易于在基层单位推广应用。

关键词：产蛋下降综合症核酸杂交核酸的生物素标记

用聚合酶链反应检测产蛋下降综合症病毒核酸的研究

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病毒学报 1996年第2期12卷 156-161页

作者：张兹钧胡木枝金由辛拱北动植物检疫局中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

根据对ＥＤＳ一ＤＮＡ重组质粒ｐＴＥＺ.Ｐ３和ｐＴＥＺ．Ｐ２８的核酸序列分析结果，设计了两对引物，它们均能从ＥＤＳ一ＤＮＡ上扩增出一个特异片段，其长度分别为２３８ｂｐ和２０９ｂｐ。经比较，ＰＣＲ比血球凝集试验至少灵敏２... 详细信息

根据对ＥＤＳ一ＤＮＡ重组质粒ｐＴＥＺ.Ｐ３和ｐＴＥＺ．Ｐ２８的核酸序列分析结果，设计了两对引物，它们均能从ＥＤＳ一ＤＮＡ上扩增出一个特异片段，其长度分别为２３８ｂｐ和２０９ｂｐ。经比较，ＰＣＲ比血球凝集试验至少灵敏２００倍，比核酸杂交试验灵敏千万倍；对１００份自然发病鸡的肛拭子、血液和软壳蛋等样品的检测结果表明：ＰＣＲ的阳性检出率远高于核酸杂交试验，并用病毒分离方法证实了ＰＣＲ对野外病料的检出结果是可信的，对常规的ＰＣＲ条件还作了改进，使试剂的用量减少了１０倍以上，并简化了一些烦琐操作。

关键词：鸡产蛋下降综合征病毒诊断聚合酶链反应

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传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展

中国病毒学 1992年第3期7卷 241-245页

作者：陈士友张兹钧南京农业大学兽医系南京210014 珠海动植物检疫局珠海510020

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disense virus,IBDV)是引起鸡的最严重的传染病之一,给养鸡业造成了巨大的经济损失,其危害除了直接引起临床症状外,更为重要的是破坏机体的免疫器官,主要是破坏B淋巴细胞前体,引起严重的免疫抑制... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disense virus,IBDV)是引起鸡的最严重的传染病之一,给养鸡业造成了巨大的经济损失,其危害除了直接引起临床症状外,更为重要的是破坏机体的免疫器官,主要是破坏B淋巴细胞前体,引起严重的免疫抑制,使鸡对其他病原的免疫力丧失,结果导致死亡。 IBDV最初被认为是呼肠孤病毒科的成员。

关键词：分子生物学法氏囊病病毒

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用多聚酶链反应检测非洲猪瘟病毒的研究

中国兽医科技 1992年第12期22卷 3-6页

作者：张兹钧金由辛陈士友拱北动植物检疫局珠海519020 上海生物化学研究所南京农业大学

用HindⅢ对非洲猪瘟病毒核酸的重组质粒pRPEL2进行酶切后,将第5片段插入到pT7/T3α-19上而得到亚克隆重组质粒pT7 ASFH5。用双脱氧末端终止法测定了该插入片段的核苷酸序列。在此基础上选择了一段含194bp的片段作为扩增模板,并人工合成... 详细信息

用HindⅢ对非洲猪瘟病毒核酸的重组质粒pRPEL2进行酶切后,将第5片段插入到pT7/T3α-19上而得到亚克隆重组质粒pT7 ASFH5。用双脱氧末端终止法测定了该插入片段的核苷酸序列。在此基础上选择了一段含194bp的片段作为扩增模板,并人工合成了该片段两端含20个碱基的寡核苷酸作为引物,从而建立了诊断非洲猪瘟病毒的多聚酶链反应。与核酸杂交相比,该方法不但更为快速和简便,而且灵敏度提高了一千万倍左右.

关键词：猪瘟病毒聚合酶链反应诊断猪病

鸡减蛋综合症病毒DNA片段的克隆及生物素化探针的制备

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中国畜禽传染病 1993年第4期15卷 46-48页

作者：张兹钧胡木枝刘金胜梁云拱北动植物检疫局

用EDS-76病毒感染鸭胚,从尿囊液中提取EDS-76病毒DNA。用EcoR I和Sall双酶切后与质粒pT7/T3a-19重组,并转化到大肠杆菌DH_5α中。提取重组质粒,经双酶切后进行电泳分析表明,至少已得到了五种片段的克隆。将其中插入片段约为0.4Kb的重组... 详细信息

用EDS-76病毒感染鸭胚,从尿囊液中提取EDS-76病毒DNA。用EcoR I和Sall双酶切后与质粒pT7/T3a-19重组,并转化到大肠杆菌DH_5α中。提取重组质粒,经双酶切后进行电泳分析表明,至少已得到了五种片段的克隆。将其中插入片段约为0.4Kb的重组质粒经光敏生物素标记后作为探针检测EDS-76感染的鸭胚尿囊液提取物,证实了该探针对EDS-76 DNA具有特异性,而且至少可检出1pg的EDS-76 DNA。

关键词：鸡病产蛋下降症综合症

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传染性法氏囊病病毒cDNA文库的构建

病毒学报 1994年第2期10卷 159-163页

作者：陈士友张兹钧金由辛陈溥言蔡宝祥王德宝南京农业大学动物医学系珠海拱北动植物检疫局上海中科院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室上海中科院上海细胞生物学研究所

本试验利用随机引物法反转录鸡传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅｖｉ－ｒｕｓ，ＩＢＤｖ）的双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ），并构建了ｃＤＮＡ文库。病毒为青岛株，来自感染鸡的法氏羹。用免疫复合物沉... 详细信息

本试验利用随机引物法反转录鸡传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅｖｉ－ｒｕｓ，ＩＢＤｖ）的双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ），并构建了ｃＤＮＡ文库。病毒为青岛株，来自感染鸡的法氏羹。用免疫复合物沉淀法提纯病毒，抽提核酸，经琼脂糖凝胶电泳纯化。ＩＢＤＶｄｓＲＮＡ经反转录、加ｐｏｌｙ（ｄｃ）后，克隆于加有ｐｏｌｙ（ｄＧ）的线性化质粒ｐＴ／３α－１９上，并转化大肠杆菌ＤＨ５αＦ′，结果筛选出１１６个含有外源片段（长度为０．３－１ｋｂ，平均０．６ｋｂ）的克隆，经鉴定外源片段均为ＩＢＤＶｃＤＮＡ。

关键词：传染性 IBD 病毒 cDNA文库

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牦牛卡玛洪病的诊断研究

西藏畜牧兽医 1989年第2期 18-24页

作者：洛桑列措张兹钧

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蓝舌病毒核酸末端标记方法的研究

中国兽医科技 1989年第1期19卷 51-52页

作者：张兹钧吴明杰张子春朱万光农业部动物检疫所

应用[γ—^(23)P]ATP对蓝舌病毒核酸进行末端标记,结果表明3’末端标记制备的探针的放射比强度明显高于5’末端标记,而5’末端脱磷后再标记的结果同样较为理想。应用3’末端标记法或5’末端标记法皆能获得高放射比强度的核酸探针,完全... 详细信息

应用[γ—^(23)P]ATP对蓝舌病毒核酸进行末端标记,结果表明3’末端标记制备的探针的放射比强度明显高于5’末端标记,而5’末端脱磷后再标记的结果同样较为理想。应用3’末端标记法或5’末端标记法皆能获得高放射比强度的核酸探针,完全满足于核酸试验。

关键词：蓝舌病毒核酸末端标记法家畜病毒

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蓝舌病毒核酸杂交技术的研究

中国兽医科技 1989年第2期19卷 47-48页

作者：张兹钧吴明杰张子春朱万光农业部动物检疫所

核酸杂交技术的出现为蓝舌病(BT)的诊断开拓了一个新纪元,它是检测蓝舌病毒(BTV)既快速又敏感的方法。本技术不依赖于病毒分离与鉴定,而是直接检测蓝舌病毒的基因片段,具有很高的特异性。我们应用〔γ^(-32)p〕ATP末端标记BTV全基因组,... 详细信息

核酸杂交技术的出现为蓝舌病(BT)的诊断开拓了一个新纪元,它是检测蓝舌病毒(BTV)既快速又敏感的方法。本技术不依赖于病毒分离与鉴定,而是直接检测蓝舌病毒的基因片段,具有很高的特异性。我们应用〔γ^(-32)p〕ATP末端标记BTV全基因组,进行打点杂交和Northern印渍转移杂交,以期建立BTV的核酸杂交诊断技术。本试验结果令人满意。

关键词：蓝舌病毒核酸杂交技术兽医诊断学