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同时产ESBLs和AmpC酶志贺菌临床菌株的分离及鉴定

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同时产ESBLs和AmpC酶志贺菌临床菌株的分离及鉴定

作者：张传领浙江大学

学位级别：硕士

目的确定头孢西丁耐药志贺菌临床菌株超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)表型、基因型及毒力特征。方法K-B纸片扩散法筛选头孢西丁耐药志贺菌临床菌株并进行血清学分型。采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,PCR及序... 详细信息

目的确定头孢西丁耐药志贺菌临床菌株超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)表型、基因型及毒力特征。方法K-B纸片扩散法筛选头孢西丁耐药志贺菌临床菌株并进行血清学分型。采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,PCR及序列分析确定其ESBL和AmpC基因型。采用PCR检测上述志贺菌株毒力基因virA、ia1、ipaH、 setlA、setlB和sen,以确定其毒力基因型。结果从356株志贺菌临床菌株中检出8株头孢西丁耐药菌株,其中6株为福氏志贺菌(4株F2a、1株F2b、1株F2c)、2株为宋内志贺菌。8株头孢西丁耐药志贺菌中,5株ESBLs确证试验阳性,另2株AmpC酶三维试验阳性;7株携带ESBLs基因(CTX-M-14、15、57和/或OXA-30),其中2株检出AmpC基因(DHA-1和CMY-2)。8株头孢西丁耐药志贺菌中,5株携带所有6种受检的毒力基因,3株携带除setlA和setlB以外的4种毒力基因。两株同时产ESBLs和AmpC酶志贺菌仅对亚胺培南敏感。结论头孢西丁耐药志贺菌临床菌株产ESBLs为主且有较强毒力,但部分菌株同时产AmpC酶,其中DHA-1型AmpC酶为国内首次发现。

关键词：志贺菌耐药性超广谱β-内酰胺酶 AmpC酶基因型

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低出血水蛭素衍生物的构建和功能评价

低出血水蛭素衍生物的构建和功能评价

作者：张传领中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

水蛭素(HV)在治疗不稳定心绞痛方面比肝素具有优势，但是水蛭素可能引起严重的出血现象。为此，本研究通过在水蛭素的N末端添加凝血酶识别序列LGPR、FXa识别序列IEGR、凝血酶和FXa共同识别序列GVYAR、FXa和FXIa共同识别序列EPR、暂时封... 详细信息

水蛭素(HV)在治疗不稳定心绞痛方面比肝素具有优势，但是水蛭素可能引起严重的出血现象。为此，本研究通过在水蛭素的N末端添加凝血酶识别序列LGPR、FXa识别序列IEGR、凝血酶和FXa共同识别序列GVYAR、FXa和FXIa共同识别序列EPR、暂时封闭住水蛭素的抗凝活性，从而获得水蛭素的衍生物LGPR-HV、IEGR-HV、GVYAR-HV、EPR-HV，分别命名为TH、FH、GH、EH，这些水蛭素衍生物只在血栓部位由相应的凝血因子切割，释放出游离的水蛭素，进而只在血栓局部发挥抗凝功能，避免抗凝剂的系统性出血风险。通过大鼠电刺激颈总动脉血栓形成模型来评价各衍生物的抗动脉血栓效果，各衍生物在4mg／kg剂量的血管闭塞时间(TTO)与2mg／kg水蛭素大体相当，同时各衍生物的凝血酶时间(TT)和部分凝血酶时间(APTT)也只有水蛭素的一半。在下腔静脉血栓形成模型中，各衍生物与水蛭素在0.5mg／kg剂量情况下具有相同的抗栓效果，并且各衍生物对TT和APTT没有影响。为了评价各衍生物的安全性，小鼠断尾出血模型被用来检测其出血时间，3mg／kg剂量的各衍生物对出血时间没有显著影响，6mg／kg的各衍生物的出血时间也只有1.5mg／kgHV的一半。总之，各衍生物在有效的剂量范围内避免了出血副作用的产生，并且在相同出血情况下可以达到比HV更好的抗栓效果。

关键词：水蛭素衍生物凝血因子出血

杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染及分子特征

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第4期37卷 269-274页

作者：来俊孙爱华张传领浙江萧山医院重症医学科杭州31120l 浙江萧山医院检验科杭州31120l 杭州医学院基础医学部 310053

目的分离及鉴定临床标本中携带杀白细胞素基因（pvl）的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（pvl^＋-MRSA）并了解pvl^＋-MRSA感染和分子特征。方法采用药敏试验检测259株MRSA耐药性。采用头孢西丁纸片法和PCR扩增mecA基因确定上述MRSA菌株中pul^... 详细信息

目的分离及鉴定临床标本中携带杀白细胞素基因（pvl）的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（pvl^＋-MRSA）并了解pvl^＋-MRSA感染和分子特征。方法采用药敏试验检测259株MRSA耐药性。采用头孢西丁纸片法和PCR扩增mecA基因确定上述MRSA菌株中pul^＋MRSA。分别采用多重PCR和多位点序列分析法（MLST）对pvl^＋-MRSA进行葡萄球菌染色体mec（SCCmec）和序列型（ST）分型。采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和聚类分析了解pul^＋-MRSA遗传和流行特征。分析pul^＋-MRSA不同感染类型及其所致疾病种类差异。结果259株MRSA中鉴定出51株pul^＋-MRSA（19．7％，51／259），其中29株来自社区感染患者、22株来源于医院感染患者。ST59-SCCmecⅢ是本地区pul^＋-MRSA主要型别（35．3％，18／51），其次为ST59-SCCmecⅣ（25．5％，13／51），但PFGE检测结果显示本地区分离的倒pul^＋-MRSA无优势克隆系。儿童和中青年患者（≤44岁）标本中pvl^＋-MRSA分离率（66．7％，34／51）明显高于≥45岁患者（P〈0．05）。pvl^＋-MRSA所致主要病种为皮肤和软组织感染（47．1％，24／51）（P〈0．05），其次为肺炎（17．6％，9／51）。pvl^＋-MRSA对左氧氟沙星、庆大霉素和利福平耐药性较低（7．8％-21．6％），未发现莫西沙星、呋喃妥因和利奈唑胺耐药菌株。结论本地区人群中pul^＋-MRSA感染率较高，ST59-SCCmecⅢ和ST59-SCCmeⅣV型为其主要流行型别。儿童和中青年对pvl^＋-MRSA易感，所致疾病以皮肤软组织感染和肺炎为主。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染杀白细胞素分子分型疾病类型

引起皮肤软组织感染的杀白细胞素阳性社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子特征研究

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中国人兽共患病学报 2022年第9期38卷 778-783页

作者：应晓波张传领杭州师范大学附属萧山医院杭州311201

目的了解分离自临床皮肤和软组织感染(SSTIs)患者携带杀白细胞素基因(pvl)社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(pvl^(+)-CA-MRSA)的分子特征。方法从SSTIs患者中分离出92株CA-MRSA。采用聚合酶链反应(PCR)和测序检测pvl基因及其突变。pv... 详细信息

目的了解分离自临床皮肤和软组织感染(SSTIs)患者携带杀白细胞素基因(pvl)社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(pvl^(+)-CA-MRSA)的分子特征。方法从SSTIs患者中分离出92株CA-MRSA。采用聚合酶链反应(PCR)和测序检测pvl基因及其突变。pvl^(+)-CA-MRSA菌株进行序列类型(STs)与克隆复合物(CCs)、葡萄球菌盒式染色体mec(SCC mec)、葡萄球菌蛋白基因(spa)多态性、辅助基因调控子(agr)位点、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和多位点序列分型(MLST)。采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统进行CA-MRSA药物敏感试验。结果92株CA-MRSA中,24株(26.1%)为pvl^(+)-CA-MRSA,其中91.7%(22/24)为pvl的H亚型,68株(73.9%)为未携带pvl基因CA-MRSA(pvl--CA-MRSA)。24株pvl^(+)-CA-MRSA中,共有8种STs和7种CCs,其中以ST59(62.5%,15/24)和CC59(70.8%,17/24)为主。pvl^(+)-CA-MRSA菌株中,SCC mec III和IVa型分别为54.2%和33.3%,agr I(87.5%,21/24)为最常见的agr等位基因,其余为agr III;检出8种spa型,其中以t437型最为常见(66.7%,16/24)。pvl^(+)-CA-MRSA菌株对红霉素、克林霉素、四环素耐药率较高(均>50%),对复方新诺明、环丙沙星、庆大霉素的耐药率较低(8.3%~16.7%),未发现万古霉素、利福平、莫西沙星和利奈唑啶耐药菌株。与pvl^(+)-CA-MRSA相比,pvl--CA-MRSA对四环素耐药率较低(P0.05)。结论引起SSTIs的CA-MRSA中有较高的pvl基因阳性率,pvl H2、ST59/CC59、SCC mec III/IVa、agr I和t437是引起SSTIs CA-MRSA的优势克隆。

关键词：社区相关性金黄色葡萄球菌皮肤软组织感染杀白细胞毒素分子特征

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌精氨酸代谢移动元件

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中华检验医学杂志 2011年第6期34卷 569-571页

作者：张传领刘庆中浙江萧山医院检验科杭州311201 上海交通大学附属第一人民医院检验科

当前,MRSA不仅是医院感染的重要病原菌,也是社区感染的常见致病菌.CA-MRSA具有较强的毒力和致病性,可引起多种感染.目前,全球范围流行的CA-MRSA克隆主要为：出现在美国和澳大利亚的中西部克隆,流行于澳大利亚、墨西哥、希腊和美国的西... 详细信息

当前,MRSA不仅是医院感染的重要病原菌,也是社区感染的常见致病菌.CA-MRSA具有较强的毒力和致病性,可引起多种感染.目前,全球范围流行的CA-MRSA克隆主要为：出现在美国和澳大利亚的中西部克隆,流行于澳大利亚、墨西哥、希腊和美国的西南太平洋/大洋洲克隆,流行于欧洲的欧洲克隆,流行于美国、中国台湾地区和越南的太平洋克隆及当前流行最广泛、最严重的USA300克隆[1].

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌精氨酸元件代谢医院感染澳大利亚南太平洋常见致病菌

性未成熟雌性小鼠孕前砷暴露导致植入前胚胎体外发育阻滞

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第9期26卷 841-846页

作者：张传领刘春梅陆彩玲马旭北京协和医学院研究生院北京100005 国家人口计生委科学技术研究所遗传研究室北京100081

目前研究发现妊娠期环境砷暴露可以导致其后代发育异常如不孕不育、流产、早产、胎儿生长受限、子代先天畸形及性别比例失调等生殖健康问题,而对孕前砷暴露对植入前胚胎发育的影响的研究还不充分.我们选用3～5周龄性未成熟雌性小鼠,按8m... 详细信息

目前研究发现妊娠期环境砷暴露可以导致其后代发育异常如不孕不育、流产、早产、胎儿生长受限、子代先天畸形及性别比例失调等生殖健康问题,而对孕前砷暴露对植入前胚胎发育的影响的研究还不充分.我们选用3～5周龄性未成熟雌性小鼠,按8mg/kg亚砷酸钠(NaAsO2)剂量隔日腹腔注射1次,共注射8次.结果显示:孕前砷暴露导致小鼠植入前胚胎大部分阻滞在1-2细胞期.同时发现,这些阻滞的胚胎活性氧(ROS)水平明显升高,细胞色素C明显释放,细胞凋亡率明显升高.这些结果说明,孕前砷暴露通过氧化应激诱发胚胎凋亡导致植入前胚胎的发育阻滞,这也预示着孕前砷暴露将有可能导致育龄妇女受孕困难.

关键词：植入前胚胎砷体外受精发育凋亡

高水平阿奇霉素耐药淋球菌耐药机制及多序列抗原分型

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中国艾滋病性病 2020年第1期26卷 58-62页

作者：陆甜甜周海永张传领浙江萧山医院检验科杭州311202 浙江医院泌尿外科杭州311201

目的了解临床分离的淋病奈瑟菌(淋球菌)对阿奇霉素高水平耐药(AZM-HLR)的机制及多序列抗原分型。方法收集2015-2016年临床分离的淋球菌,采用琼脂稀释法检测阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),并筛选AZM-HLR(MIC≥256mg/L)菌株,荧光定量聚合... 详细信息

目的了解临床分离的淋病奈瑟菌(淋球菌)对阿奇霉素高水平耐药(AZM-HLR)的机制及多序列抗原分型。方法收集2015-2016年临床分离的淋球菌,采用琼脂稀释法检测阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),并筛选AZM-HLR(MIC≥256mg/L)菌株,荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增23S rRNA基因及外排系统mtrR编码基因,产物测序分析基因突变特征;淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)方法确定菌株的序列类型(ST)。结果 126株淋球菌中,27株阿奇霉素耐药菌株(21.4%, 27/126),其中22/27为AZM-HLR,MIC值均为1 024mg/L。23S rRNA测序结果显示,所有AZM-HLR菌株均出现等位基因A2059G的突变及mtrR启动子区的13碱基对(bp)反向重复序列内的单碱基位点缺失(△A),19/22存在mtrR编码区G45D突变。NG-MAST结果显示,AZM-HLR菌株中以ST3102和ST1866为主,分别占7/22、6/22。结论本地区分离的AZM-HLR淋球菌可能与23S rRNA等位基因A2059G突变、mtrR启动子区的13bp反向重复序列内的单碱基位点缺失及mtrR编码区G45D突变有关;ST3102和ST1866是该类菌株的优势型别。

关键词：淋病奈瑟菌阿奇霉素耐药性基因淋球菌多抗原序列分型

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尿路感染患者病原菌分布及耐药性监测

中华医院感染学杂志 2014年第2期24卷 314-315,323页

作者：孙一奎张传领赵枫王峰王卫华宁波大学医学院附属医院检验科浙江宁波315020 浙江萧山医院检验科浙江杭州311201

目的分析189例尿培养分离菌株的分布及耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法采用常规方法和VETIK-32型全自动微生物鉴定及药敏系统进行细菌鉴定和药敏试验。结果 189株病原菌中革兰阴性杆菌116株占61.38%,革兰阳性菌50株占26.4... 详细信息

目的分析189例尿培养分离菌株的分布及耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法采用常规方法和VETIK-32型全自动微生物鉴定及药敏系统进行细菌鉴定和药敏试验。结果 189株病原菌中革兰阴性杆菌116株占61.38%,革兰阳性菌50株占26.46%,真菌23株占12.16%;其中,大肠埃希菌53株占28.04%、肠球菌属35株占18.52%;产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检出率为13.76%,未发现耐万古霉素革兰阳性球菌。结论尿培养分离的耐药菌株有上升趋势,临床应依据药敏试验结果合理选用抗菌药物,以避免耐药菌株的产生。

关键词：病原菌耐药合理用药

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因亚型的流行及MLST分子分型

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中国人兽共患病学报 2022年第3期38卷 242-246页

作者：毛剑锋张传领楚旭杭州师范大学附属萧山医院杭州311201

目的探讨临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)杀白细胞素(pvl)基因亚型的流行及MLST分子分型特征。方法收集非重复MRSA 287株,按照美国疾病预防控制中心的社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)定义分为医院获得性耐甲氧... 详细信息

目的探讨临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)杀白细胞素(pvl)基因亚型的流行及MLST分子分型特征。方法收集非重复MRSA 287株,按照美国疾病预防控制中心的社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)定义分为医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)和CA-MRSA两组。采用PCR方法扩增pvl基因,产物双向测序并分析核苷酸变异情况;pvl基因阳性(pvl^(+))菌株进行多位点序列(MLST)分型并采用eBURST软件进行克隆复合群(CC)分析。结果287株MRSA中,51株为pvl^(+)菌株(17.8%,51/287),其中29株为CA-MRSA(56.9%,29/51),22株为HA-MRSA(43.1%,22/51)。pvl^(+)菌株经双向测序共发现4个位点(527、663、1396和1729)存在核苷酸变异,根据527位点的差异分为H(H1和H2)和R(R1和R2)亚型。其中46株(90.2%,46/51)为H型(6株H1、40株H2),5株(9.8%,5/51)为R型(1株R1、4株R2)。H型主要属于CC59(ST59/ST388)(69.6%,32/46),其次为CC22(ST22)(10.9%,5/46),CC1(ST1/ST188)(6.5%,3/46)、CC88(ST88)(4.3%,2/46)、CC5(ST149)(4.3%,2/46)、CC9(ST9)(2.2%,1/46)和CC30(ST30)(2.2%,1/46);仅在CC59(ST59)、CC88(ST88)和CC5(ST25)型菌株中发现R型。CA株和HA株携带的pvl均以H亚型为主,分别占86.2%(25/29)和95.5%(21/22),两组差异无统计学意义。结论本地区临床分离MRSA携带的pvl以H亚型(H2)为主,主要克隆型别为CC59;CA-MRSA和HA-MRSA携带的pvl亚型没有明显差异。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素亚型分子分型