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云南两个花魔芋主产区软腐病害植株腐烂球茎中的菌群组成及特征

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微生物学报 2024年第7期 2434-2452页

作者：张绍智田庆红董坤杨丽萍殷减清张仲凯云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所永平县科技统计和成果转换中心云南省农业科学院富源魔芋研究所云南海萍农业开发有限公司

【目的】软腐病是侵染魔芋的主要病害，其危害性严重，广泛传播会导致花魔芋绝产，尚无有效防控措施。魔芋软腐病的发生及暴发性传播与病原菌及其菌群有较大相关性。本研究旨在明确云南2个主产区的软腐病害花魔芋球茎及其根际土壤中的... 详细信息

【目的】软腐病是侵染魔芋的主要病害，其危害性严重，广泛传播会导致花魔芋绝产，尚无有效防控措施。魔芋软腐病的发生及暴发性传播与病原菌及其菌群有较大相关性。本研究旨在明确云南2个主产区的软腐病害花魔芋球茎及其根际土壤中的主要致病菌和优势微生物种类，分析其菌群结构特征，从而为花魔芋软腐病害的防控提供支撑。【方法】研究采集云南富源和永平2个产区的花魔芋软腐病样品，应用Illumina Nova Seq 6000测序平台进行微生物宏基因组测序和分析。同时采用选择性培养基、多级纯化培养技术以及电镜超微形态解析，分别对病害腐烂球茎中的致病菌及优势菌类进行分离鉴定和观察验证。【结果】两个花魔芋主产区软腐病害植株球茎及土壤中的微生物都非常丰富，共检出107门2 502属15 721种微生物。这2个产区的花魔芋软腐病害主要致病菌均为胡萝卜软腐坚固杆菌(Pectobacterium carotovorum)，此病原菌与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的优势生长是2个产区软腐病害植株腐烂球茎中菌群的主要特征。此外，同产区的病害组织与土壤样品之间的菌群组成差异较大，但这2类样品中的优势菌群组成的区域性差异较小。【结论】两个花魔芋主产区软腐病害球茎组织中菌群与该区土壤菌群的相关性较低，土壤菌群区域性差异比相应的病害组织菌群区域性差异要大。因此，主要病原菌和共生菌的优势生长突破了产地差异影响，成为了病害组织菌群的主要特征，使得2个主产区软腐病害花魔芋球茎中的微生物生态系统具有高度相似性。

关键词：花魔芋宏基因组软腐病病原菌微生物群落

侵染云南早春西瓜的西瓜银色斑驳病毒和黄瓜花叶病毒分离鉴定

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植物病理学报 2024年第2期54卷 269-278页

作者：杜雨濛赵立华张绍智王田田张仲凯云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所/云南省农业生物技术重点实验室昆明650205 云南大学农学院昆明650000

早春西瓜是云南热区的特色水果,近年来病毒病发生危害日益严重。为明确侵染早春西瓜的主要病毒,本研究采集了云南省西双版纳州勐海县的早春西瓜植株与果实病毒病样品,应用透射电子显微镜制样观察、间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)和RT-... 详细信息

早春西瓜是云南热区的特色水果,近年来病毒病发生危害日益严重。为明确侵染早春西瓜的主要病毒,本研究采集了云南省西双版纳州勐海县的早春西瓜植株与果实病毒病样品,应用透射电子显微镜制样观察、间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)和RT-PCR扩增克隆与测序分析进行检测鉴定。结果表明:侵染早春西瓜的病毒为西瓜银色斑驳病毒(WSMoV)和黄瓜花叶病毒(CMV);ID-ELISA对叶部样品WSMoV和CMV的检出率分别为70%和20%,复合侵染率为15%,RT-PCR对这两种病毒的检出率分别为100%和65%,复合侵染率为65%;并且,实验对发病果实种子进行RT-PCR扩增克隆和测序分析发现上述2种病毒复合侵染率达100%;系统发育树分析表明,云南西瓜WSMoV分离株21YV-40(GenBank登录号:OP617563)、21YV-43(GenBank登录号:OP867047)与云南分离株Banna-2011(GenBank登录号:KM242056)相似性最高,达到99.00%,云南西瓜CMV分离株CMVYN40(GenBank登录号:OP617565)、CMVYN46(GenBank登录号:OP617566)与泰国分离株A27(GenBank登录号:FN552545)相似性最高,达到98.00%。本研究明确了勐海县早春西瓜主要受到WSMoV和CMV的侵染且存在复合侵染,首次发现WSMoV和CMV复合侵染西瓜发病果实种子,为早春西瓜病毒病的防控提供了依据。

关键词：早春西瓜西瓜银色斑驳病毒黄瓜花叶病毒复合侵染种子

云南怒江番茄种植新区番茄病毒检测及病毒种传特性

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植物保护 2024年第1期50卷 272-279页

作者：刘玉莹熊志琦苏晓霞王田田吴阔郑宽瑜张仲凯云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室昆明650205 云南大学资源植物研究院昆明650504

病毒病对番茄生产造成严重危害,近年来在番茄种植新区发生严重,疑似为种子带毒传播。本研究通过对云南省怒江州番茄种植新区的番茄病毒病样品采用RNA-seq高通量测序,RT-PCR验证的方法检测病毒种类;对番茄病果种子进行超薄切片制样透射... 详细信息

病毒病对番茄生产造成严重危害,近年来在番茄种植新区发生严重,疑似为种子带毒传播。本研究通过对云南省怒江州番茄种植新区的番茄病毒病样品采用RNA-seq高通量测序,RT-PCR验证的方法检测病毒种类;对番茄病果种子进行超薄切片制样透射电子显微镜观察,将病果种子播种后对种苗进行RT-PCR带毒检测。结果表明,RNA-seq高通量测序及RT-PCR检测到的病毒有番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot orthotospovirus, TZSV)、番茄黄斑驳相关病毒(tomato yellow mottle-associated virus, TYMaV)、辣椒脉斑驳病毒(chili veinal mottle virus, ChiVMV)、南方番茄病毒(southern tomato virus, STV)。透射电镜观察到种胚细胞及胚乳细胞中分布典型的正番茄斑萎病毒属Orthotospovirus病毒粒体。病果种子播种28 d后的种苗具有病毒病症状,通过RT-PCR检出TZSV、ChiVMV、STV,检出率分别为60%、100%、80%。上述研究结果为TZSV通过种子传播提供了有利的证据,并为源头防控番茄病毒病提供了依据。

关键词：番茄番茄病毒病毒检测 RNA-seq 种传病毒

白银市会宁县某小学一起水痘暴发疫情流行病学调查分析

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疾病预防控制通报 2024年

作者：张永强吉文博蒙泽环张仲凯白银市会宁县疾病预防控制中心

目的了解甘肃省白银市会宁县某小学一起水痘疫情的流行特征，分析疫情暴发的主要原因，提出防控建议。方法采用现场流行病学调查方法，收集2023年5月18日—6月28日某小学的水痘病例信息，运用描述流行病学方法分析水痘暴发疫情的流行... 详细信息

目的了解甘肃省白银市会宁县某小学一起水痘疫情的流行特征，分析疫情暴发的主要原因，提出防控建议。方法采用现场流行病学调查方法，收集2023年5月18日—6月28日某小学的水痘病例信息，运用描述流行病学方法分析水痘暴发疫情的流行病学特征。结果共搜索到该校水痘病例19例，均为学生，总罹患率为0.96%；一年级罹患率高于三年级，差异有统计学意义（χ2=6.853,P0.05）。结论学校传染病防控措施执行不严，首发病例接触外地探亲未愈水痘病例后发病，但学生及其家长故意隐瞒真实病因，首发和继发病例带病上课，水痘疫苗接种率低，邻近班级学生密切接触是引起本次疫情传播的主要原因。

关键词：小学水痘暴发疫情流行病学调查

番茄褐色皱纹果病毒（ToBRFV）云南建水分离物鉴定及全基因组序列分析

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植物病理学报 2024年

作者：肖雨晴吕高莹李树军陈永对苏晓霞杨李源滨周晓罡余大朝王田田郑宽瑜张仲凯云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室云南神谷科技股份有限公司

番茄褐色皱纹果病毒（tomato brown rugose fruit virus,To BRFV）近年来在全球番茄产区快速发生蔓延，造成严重的经济损失。云南建水番茄上出现疑似To BRFV感染的症状，并对周边番茄产区产生危害。本研究对云南建水田间疑似To BRFV感... 详细信息

番茄褐色皱纹果病毒（tomato brown rugose fruit virus,To BRFV）近年来在全球番茄产区快速发生蔓延，造成严重的经济损失。云南建水番茄上出现疑似To BRFV感染的症状，并对周边番茄产区产生危害。本研究对云南建水田间疑似To BRFV感染的番茄果实样品进行电子显微镜观察及RT-PCR检测鉴定，并进一步对分离株进行全基因组测序分析，构建系统进化树分析其与其它To BRFV分离株的进化关系。结果表明，从感病的番茄果实上发现杆状病毒粒体，大小约18nm×300nm，具有烟草花叶病毒属病毒的典型形态特征；用To BRFV特异性检测引物进行RT-PCR扩增得到591bp目的片段，经NCBIblast比对，与To BRFV具有最高一致率（达99%以上），将该分离株命名为To BRFV-2022-JS(GenBank登录号：OR593752)。测序发现ToBRFV-2022-JS基因组全长6 386 nt，具有4个ORFs，分别编码126 kDa和183 kDa复制酶，30 kDa运动蛋白MP和17.5 kDa外壳蛋白CP。进化树分析显示该分离株与To BRFV银川分离株（GenBank登录号：OR500698.1）的亲缘关系最近，核苷酸序列一致率为99.73%。上述结果表明云南建水番茄果实受到To BRFV感染。该结果为To BRFV在云南番茄产区的监测与防控提供了依据。

关键词：番茄褐色皱纹果病毒云南建水番茄果实病毒基因组系统进化分析

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基于边缘计算及区块链的网关研究与设计

基于边缘计算及区块链的网关研究与设计

作者：张仲凯河南工业大学

学位级别：硕士

物联网技术迅速发展和信息化粮仓的建设,使得粮仓中传感器设备接入物联网的数量越来越多,随之带来的是粮情数据量呈井喷式剧增。面对如此巨大的数据量,集中式云计算的方法,需要消耗大量的网络带宽、能耗以及云存储等云基础设施资源,极... 详细信息

物联网技术迅速发展和信息化粮仓的建设,使得粮仓中传感器设备接入物联网的数量越来越多,随之带来的是粮情数据量呈井喷式剧增。面对如此巨大的数据量,集中式云计算的方法,需要消耗大量的网络带宽、能耗以及云存储等云基础设施资源,极大地增加了数据处理的时延,因此需选择靠近粮情数据产生的网络边缘侧进行数据处理。边缘计算是在靠近数据源的网络边缘侧提供服务,降低了数据传输时延并提高了数据处理速度。边缘计算与粮情数据的结合,网关是其不可或缺的环节。但目前的关于粮仓中所用的网关,其结构、服务以及云端交互等,还不足以支持边缘计算以及实现“边云”交互进行粮情数据处理。同时边缘计算的引入,使得粮情数据分布式存储,边缘设备失去对原始数据集中管理,粮情数据面临着存储安全的问题。针对以上的问题,以边缘计算模型为核心构建粮情智能网关,降低粮情数据处理及传输的时延;并结合区块链技术的安全性能优势,研究可信边缘存储方案,实现粮情数据的分布式存储。具体研究有以下几个方面:(1)针对传统网关在其结构以及服务方面不足以支持边缘计算的问题,设计并实现了一种在粮仓环境下的粮情智能网关,构建并部署Edge X Foundry边缘计算架构,利用该架构中微服务模块实现了粮情智能网关具有边缘数据处理的能力。同时,通过边云接口的设计,使得粮情智能网关能够进行与云端的交互,弥补了粮情智能网关其本身算力的不完善问题,提高了数据处理的效率。(2)针对粮仓中储备粮食质量安全问题,本文提出了一种基于LSTM算法的粮食质量异常检测模型,从粮堆的温湿度数据中提取空间时间语义特征来进行粮食温度预测,利用预测值和真实值的比较实现粮食质量异常检测,并通过粮仓记录温度数据验证了该模型的有效性。(3)针对粮情数据的存储安全问题,利用区块链去中心化思想,构建粮情数据链上链下相结合的可信存储方案,设计存储资源分配算法,充分利用服务器的存储资源,同时也解决了粮情智能网关存储资源不足的问题。而且由于区块链技术的可溯源性以及不可篡改性,保障了粮情数据的完整性以及实现了粮情数据的追溯。本文在粮情智能网关的设计中,使用区块链技术解决边缘计算中存在的粮情数据安全问题,结合两种技术的优势,实现了粮情智能网关处理分析数据的能力。

关键词：物联网边缘计算区块链粮情智能网关资源分配

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骨整合假肢的现状与展望

中国矫形外科杂志 2023年第22期31卷 2052-2055页

作者：张仲凯史俊张伟山东第一医科大学附属省立医院骨科山东济南250021

骨整合假肢指与截肢端骨组织直接整合连接的假肢。近30年来骨整合假肢技术快速发展,迄今为止,全球已经有数十家治疗中心以及超过1千例患者使用骨整合假肢。相对于传统型假肢,骨整合假肢在其功能及舒适度上有着明显的优势。尽管当前骨整... 详细信息

骨整合假肢指与截肢端骨组织直接整合连接的假肢。近30年来骨整合假肢技术快速发展,迄今为止,全球已经有数十家治疗中心以及超过1千例患者使用骨整合假肢。相对于传统型假肢,骨整合假肢在其功能及舒适度上有着明显的优势。尽管当前骨整合假肢发展出不同的类型、固定方式及手术方法,但骨整合假肢仍然面对感染、假肢周围骨折等并发症及风险。因此骨整合假肢技术仍需要不断地完善与改进。本文主要论述了骨整合假肢的各种类型及特点,总结了骨整合假肢临床应用的优势及并发症,为今后进一步发展提供参考。

关键词：骨整合假肢截肢康复

不同频率捻转手法针刺照海穴对肝肾阴虚型干眼症病人BUT、SIT、生活质量的影响

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新疆中医药 2023年第2期41卷 5-7页

作者：张仲凯河北燕达医院眼科门诊河北廊坊065200

目的研究采用不同频率捻转手法针刺照海穴对肝肾阴虚型干眼症病人泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌实验(SIT)与生活质量(ADL)的影响效果。方法选取2016年7月~2020年7月于我院进行诊断并接受针刺照海穴治疗的264例干眼症病人,其中医诊断证... 详细信息

目的研究采用不同频率捻转手法针刺照海穴对肝肾阴虚型干眼症病人泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌实验(SIT)与生活质量(ADL)的影响效果。方法选取2016年7月~2020年7月于我院进行诊断并接受针刺照海穴治疗的264例干眼症病人,其中医诊断证型为肝肾阴虚型。采用随机抽签法将患者分为对照组与观察组,对照组共132例,给予其60次/min频率捻转手法的针刺治疗,观察组共132例,给予其120次/min频率捻转手法的针刺治疗,针刺治疗每周进行2次,每半个月为1个疗程,持续治疗3个疗程后,对比两组患者的泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌实验(SIT)检测水平与生活质量(ADL)评分。结果相较于对照组而言,观察组患者的BUT时间更大,且SIT水平更高(P0.05),而在接受治疗后,其ADL评分明显高于治疗前,且观察组的ADL评分高于对照组(P<0.05)。结论采用不同频率的捻转针刺手法对患者照海穴进行刺激,能够提高肝肾阴虚型干眼症患者的治疗效果,同时促使其眼部症状得到良好改善,能够早日康复。

关键词：不同频率捻转手法针刺治疗照海穴肝肾阴虚型干眼症治疗效果

番茄环纹斑点病毒N，NSm基因的VIGS载体构建

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西南农业学报 2022年

作者：崔玥赵立华陈思文俊元邱润霜张仲凯赵明富云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南农业大学植物保护学院

【目的】番茄环纹斑点病毒（Tomato zonate spot orthotospovirus， TZSV）由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播，且能与其他病毒复合侵染作物，对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响，给当地农业生产带来了严重... 详细信息

【目的】番茄环纹斑点病毒（Tomato zonate spot orthotospovirus， TZSV）由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播，且能与其他病毒复合侵染作物，对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响，给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体，以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料，为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】本研究根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物，利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段，将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上，含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用BamHI和HindIII限制性内切酶进行双酶切，并将酶切产物进行纯化回收，纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接，获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体，将其转入根癌农杆菌GV3101中，并注射到本氏烟和栽培烟K326中，通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测病毒N和NSm基因的沉默效率，间接酶联免疫吸附试验（ID-ELISA）检测N和NSm蛋白的含量。【结果】经RT-qPCR分析表明，本生烟和栽培烟K326 中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90.00%。ID-ELISA结果显示，2个蛋白含量在不同时间内均显著下降，其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSVN和NSm基因沉默载体构建成功，并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体，为研究TZSV致病机理提供了材料，为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。

关键词：番茄环纹斑点病毒病毒诱导的基因沉默实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒