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嗜热古细菌Pyrococcus horikoshii中蛋白酶的克隆、表达及酶学性质研究

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嗜热古细菌Pyrococcus horikoshii中蛋白酶的克隆、表达及酶学性...

作者：张代辉吉林大学

学位级别：硕士

Pyrococcus horikoshii 是从日本海分离的一种超嗜热古细菌,其最适生长温度为100 ℃左右,与生命的原初形态密切相关。而其所具有的蛋白酶类参与许多生物蛋白和肽类分解反应,是生物体代谢过程中必不可少的一类酶。本论文对来自于嗜热古... 详细信息

Pyrococcus horikoshii 是从日本海分离的一种超嗜热古细菌,其最适生长温度为100 ℃左右,与生命的原初形态密切相关。而其所具有的蛋白酶类参与许多生物蛋白和肽类分解反应,是生物体代谢过程中必不可少的一类酶。本论文对来自于嗜热古细菌蛋白酶进行分子克隆,在大肠杆菌中表达了嗜热蛋白酶,并对其性质进行了基本研究。我们根据遗传信息,通过生物信息学方法进行分析,确定研究古细菌Pyrococcus horikoshii 中的蛋白酶基因。从培养Pyrococcushorikoshii 古细菌出发,通过提取基因组DNA,设计PCR 引物,再经过PCR 反应,钓出PH 1704 基因,再将其插入表达质粒pET 21a,获得工程菌,大量培养后,通过超声,热变性获得了嗜热蛋白酶。经SDS-聚丙烯酰胺电泳,确定其蛋白单体分子量为18 kDa,聚体形式为二聚体、三聚体、六聚体等,通过同源GeneDoc 同源序列分析软件分析表明该酶和其他嗜热菌蛋白水解酶同源性较高,属于蛋白水解酶,结构为AlphaBeta 3-Layer(aba) Sandwich。超嗜热蛋白酶PH 1704 的酶学性质研究表明,以Azogelatin 为底物时,该酶发挥催化活力最适温度为90 ℃,最适pH 为8.0,对表面活性剂SDS 表现部分抗性,在1 小时内,1-4%浓度的SDS 可部分提高嗜热蛋白酶的酶活;经1%SDS 处理4 小时后,酶活力依然保持80%左右。该酶还具有较强的热稳定性,重组酶溶液(2 mg/ml)在80 ℃的半衰期为10 小时,95 ℃半衰期为5 小时左右。

关键词：嗜热古细菌蛋白酶 SDS 抗性

多层螺旋CT观察胸廓内动脉解剖变异及其临床应用

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多层螺旋CT观察胸廓内动脉解剖变异及其临床应用

作者：张代辉佳木斯大学

学位级别：硕士

目的：探讨胸廓内动脉（nternal Thoracic Artery，ITA）在多层螺旋CT血管造影(MSCTA)的影像学显示情况及解剖变异情况，为临床相关疾病的治疗提供可靠的影像学依据。方法：正常组：正常受检者80例（男40例，女40例）经过胸部多层螺旋C... 详细信息

目的：探讨胸廓内动脉（nternal Thoracic Artery，ITA）在多层螺旋CT血管造影(MSCTA)的影像学显示情况及解剖变异情况，为临床相关疾病的治疗提供可靠的影像学依据。方法：正常组：正常受检者80例（男40例，女40例）经过胸部多层螺旋CT增强扫描，分别测量胸廓内动脉主干的长度（lITA）及其内径（dITA）、胸廓内动脉与锁骨下动脉(subclavian artery，SA)近侧端的夹角（aITA/SA）、胸廓内动脉起点距主动脉的长度（l（A-I））。变异组：回顾性研究18例完成胸部增强扫描后发现的ITA解剖变异患者（男11例，女7例），并分析其变异的临床意义。结果：1.98例受检者ITA主干均能清晰显示，显示率为100%（100／100），其中18例发生变异，变异率为18.37％（18／98），其中， ITA与其他动脉共干发出者共10例（左侧6例，右侧4例），ITA呈波浪状走行的共8例（左侧3例，右侧2例，双侧3例）。2.相关影像学指标（lITA、dITA、l（A-I）、ITA/SA）显示清晰，并且对指标进行精确的测量后经统计学分析：①lITA在性别间差异有统计学意义（p＜0.05），在不同侧间差异无统计学意义（p＞0.05）;②dITA及l（A-I）在侧别间差异有统计学意义（p＜0.05），在性别间差异均无统计学意义（p＞0.05）;③aITA/SA在不同性别、不同侧间差别均无统计学意义（p＞0.05）。结论：1、多层螺旋CTA技术能很好的观察胸廓内动脉的正常解剖，并能准确测量双侧胸廓内动脉的相关解剖学数据。2、胸廓内动脉的起始位置及解剖变异类型表现多样化，多层螺旋CTA技术可以确切地显示其变异情况。3、多层螺旋CTA技术能够较好的为胸腹部手术、ITA-冠脉搭桥术及ITA相关介入手术做好术前评估，为治疗方案的确定提供完善的临床资料。

关键词：体层摄影技术 X线计算机胸廓内动脉栓塞术治疗

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CK胶囊SD大鼠长期毒性试验病理学研究

云南大学学报（自然科学版） 2009年第S2期31卷 516-521页

作者：马佳张代辉王京昆苏敏云南省药物研究所GLP中心云南昆明650111

SD大鼠分为7.31,21.94,43.87g/kg3个剂量组,连续60d灌服CK胶囊原生药.给药60d及停药后15d大鼠的各主要器官进行病理学检查.结果显示CK胶囊原生药中剂量组1例雌性大鼠发现乳腺管状腺瘤.其余雌性动物乳腺均未见任何病理形态学改变.溶媒对... 详细信息

SD大鼠分为7.31,21.94,43.87g/kg3个剂量组,连续60d灌服CK胶囊原生药.给药60d及停药后15d大鼠的各主要器官进行病理学检查.结果显示CK胶囊原生药中剂量组1例雌性大鼠发现乳腺管状腺瘤.其余雌性动物乳腺均未见任何病理形态学改变.溶媒对照组、高剂量组动物的胃肠、脾脏、睾丸、卵巢等大部分脏器未见病理形态学改变.其中心脏、肝脏、肾脏、气管及胸腺可见不同程度的病理形态学改变.连续60d灌服43.87g/kgCK胶囊原生药的SD大鼠组织未观察到与受试药物有关的病理形态学改变.

关键词：长期毒性试验病理学乳腺管状腺瘤

腹部超声在诊断肝硬化门脉高压中的临床应用分析

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第5期 44-47页

作者：梁阔鹏张磊李丽平张代辉任少辉邢台市人民医院超声科河北邢台054001 邢台市第三医院CT/核磁科河北邢台054000 邢台市人民医院科教科河北邢台054001

分析应用腹部超声诊断肝硬化门脉高压的方法和应用效果。方法选取2022年3月~2023年2月肝硬化门脉高压患者60例,设为A组,健康体检者60例,设为B组,比较门静脉主干、脾静脉内径,评估食管胃底静脉曲张(GOV)程度,分析其与超声表现的相关性... 详细信息

分析应用腹部超声诊断肝硬化门脉高压的方法和应用效果。方法选取2022年3月~2023年2月肝硬化门脉高压患者60例,设为A组,健康体检者60例,设为B组,比较门静脉主干、脾静脉内径,评估食管胃底静脉曲张(GOV)程度,分析其与超声表现的相关性。结果门、脾静脉测量显示,A组门静脉主干内径(1.33 ± 0.21)cm、脾静脉内径(1.54 ± 0.62)cm,B组门静脉主干内径(0.56 ± 0.23)cm、脾静脉内径(1.01 ± 0.20)cm,A组内径显著增宽(P<0.05);超声表现与GOV分析表明,曲张程度与脾脏增厚、脾静脉内径增宽、门静脉主干内径增宽等因素呈正相关(P<0.05)。结论腹部超声咋子肝硬化门脉高压临床诊断中应用价值较高。可辅助评估病情,促进科学治疗。

关键词：腹部超声门脉高压肝硬化诊断价值

QuEChERS法提取-气相色谱-串联质谱法测定生态纺织品中31种农药残留

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理化检验（化学分册） 2015年第10期51卷 1386-1392页

作者：冯伟张代辉张勋杨璐赵韫慧滕国生长春工业大学化学与生命科学学院长春130012 吉林出入境检验检疫局长春130062

采用QuEChERS法提取-气相色谱-串联质谱法同时测定生态纺织品中31种农药残留。样品粉碎后用乙腈萃取,提取液经无水硫酸镁和氯化钠除水后,用乙二胺-N-丙基硅烷和C18吸附剂净化,离心后过膜。待测物在Thermo TR-RESTICIDE石英毛细管色谱柱... 详细信息

采用QuEChERS法提取-气相色谱-串联质谱法同时测定生态纺织品中31种农药残留。样品粉碎后用乙腈萃取,提取液经无水硫酸镁和氯化钠除水后,用乙二胺-N-丙基硅烷和C18吸附剂净化,离心后过膜。待测物在Thermo TR-RESTICIDE石英毛细管色谱柱上分离,采用电子轰击离子源和选择反应监测模式进行质谱测定。31种农药的线性范围均为0.01~1.00mg·L-1,检出限(3S/N)在0.005~0.007mg·kg-1之间。加标回收率在80.3%~99.9%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于7.0%。

关键词：气相色谱-串联质谱法 QuEChERS方法农药残留生态纺织品

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浅谈水泥搅拌桩在施工中的工艺调整方法

科学技术创新 2018年第24期 116-117页

作者：张代辉黑龙江省港航工程有限公司黑龙江哈尔滨150000

水泥搅拌桩是一种应用较广泛的地基处理方法,先在地面把水泥制成水泥浆,然后送至地下与地基土搅和,待其固化后,使地基土的物理力学性能得到加强,达到改良地基的目的。

关键词：水泥搅拌桩工艺调整施工参数

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用矿泉水扦插月季

中国花卉盆景 2005年第1期 26-27页

作者：张代辉

我发现用矿泉水扦插月季，成活率较高。

关键词：月季扦插成活率矿泉水

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电磁检测结果处理的不同优化算法比较

山东理工大学学报（自然科学版） 1998年第2期15卷 34-37页

作者：张代辉张军鲁中房地产股份公司信息电气学院

通过各种优化算法的比较,结合电磁检测的特点,寻求适合电磁检测逆问题的优化算法.

关键词：电磁检测优化算法逆问题

液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留

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分析化学 2008年第5期36卷 699-701页

作者：李爱军张代辉马书民李明张秀珍姚天灵吉林出入境检验检疫局长春大成玉米开发有限公司

应用液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留。试样用V(乙腈)∶V(H2O)=1∶1溶液,提取,高速离心后,供液相色谱-串联质谱仪定性定量分析。流动相为V(乙腈)∶V(H2O)=80∶20混合溶液。采用电喷雾离子源,定性离子对为127.2/85.2和127.2/6... 详细信息

应用液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留。试样用V(乙腈)∶V(H2O)=1∶1溶液,提取,高速离心后,供液相色谱-串联质谱仪定性定量分析。流动相为V(乙腈)∶V(H2O)=80∶20混合溶液。采用电喷雾离子源,定性离子对为127.2/85.2和127.2/68.2;定量离子对为127.2/85.2。在添加了0.5~10.0 mg/kg的三聚氰胺标准品时的回收率为92.6%~103.2%;相对标准偏差(RSD)在0.8%~2.0%;检出限为0.2 mg/kg。

关键词：液相色谱-串联质谱三聚氰胺饲料