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人抑制素M突变体在毕赤酵母中的分泌表达研究

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重庆医科大学学报 2010年第11期35卷 1680-1683页

作者：范守城张云茹刘静重庆生产力促进中心重庆401147 重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400050

目的:构建重组人抑瘤素M突变体(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)毕赤酵母分泌表达菌株。方法:将人抑瘤素M蛋白成熟蛋白编码序列同义突变成毕赤酵母偏好密码子,同时将100位和217位Asn突变成Glu,消除糖基化位点,人工合... 详细信息

目的:构建重组人抑瘤素M突变体(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)毕赤酵母分泌表达菌株。方法:将人抑瘤素M蛋白成熟蛋白编码序列同义突变成毕赤酵母偏好密码子,同时将100位和217位Asn突变成Glu,消除糖基化位点,人工合成人抑瘤素突变体基因。将基因直接连接到pPIC9载体信号肽识别序列之后,构建毕赤酵母真核表达载体pPIC9-rhMut-OSM,电转化毕赤酵母菌株GS115,用PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达rhMut-OSM的酵母工程菌。结果:培养液上清经SDS-PAGE和Western blotting证实获得了相对分子质量约为22kD的rhMut-OSM,实现了非糖基化表达,表达量高峰出现在诱导72 h后,摇瓶表达量为400 mg/L。结论:成功构建了重组人抑瘤素突变体毕赤酵母工程菌株,能稳定、高效分泌表达rhMut-OSM。

关键词：抑瘤素M 突变体毕赤酵母分泌表达

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矿化垃圾中兼性营养菌原位强化甲烷氧化

化工学报 2012年第1期63卷 266-271页

作者：赵天涛张云茹张丽杰全学军彭绪亚重庆理工大学化学化工学院重庆400050 重庆大学城市建设与环境工程学院重庆400045

引言好氧甲烷氧化菌在新陈代谢上具有独一无二的特性：它们能够利用甲烷和其他一碳化合物作为唯一碳源和能源。这类微生物最典型的特点是利用甲烷单加氧酶（MMO,methane monooxygenase）催化甲烷氧化为甲醇。

关键词：兼性营养甲烷氧化菌矿化垃圾温室气体甲烷抑制剂

phyA基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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生物医学工程学杂志 2007年第1期24卷 176-181页

作者：霍丹群范守城张云茹范首君重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 重庆市畜牧科学研究院生物技术中心重庆402460 重庆工业学院生物工程学院重庆400050

利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶(phyA)基因成熟肽编码序列设计引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析、DNA测序分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组质粒... 详细信息

利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶(phyA)基因成熟肽编码序列设计引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析、DNA测序分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组质粒经IPTG诱导表达,SDS-PAGE特异区带分子量为50 kDa,此重组蛋白占大肠杆菌可溶性蛋白的36.62%,酶活性较天然植酸酶高8倍以上。本研究为大量获得高活性植酸酶以及开发新型微生态制剂奠定了基础。

关键词：植酸酶基因克隆表达载体

黑曲霉F246的phyA基因克隆及其新型表达载体构建

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重庆大学学报（自然科学版） 2004年第8期27卷 60-64,74页

作者：霍丹群范守城张云茹侯长军范首君重庆大学生物工程学院教育部生物力学与组织工程重点实验室重庆400030 重庆市养猪科学研究院重庆市重点实验室重庆402460

利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入p... 详细信息

利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入pMD18T质粒,经DNA测序和氨基酸分析、鉴定正确后,亚克隆入乳酸菌表达质粒pMG36e,构建工程菌LactobacillusMG1363 pMG36e phyA。重组乳酸菌表达载体pMG36e-phyA的构建,可望获得大量、高活性植酸酶,为研制多功能微生态制剂奠定基础。

关键词：植酸酶克隆表达载体乳酸菌

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phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建

中国兽医科技 2004年第3期34卷 26-30页

作者：霍丹群范守城张云茹侯长军重庆大学生物工程学院教育部生物力学与组织工程重点实验室重庆400044

直接以黑曲霉菌株F2 4 6基因组为模板 ,对植酸酶基因phyA的成熟肽 (分子长度为1347bp)进行了PCR扩增 ,再将PCR产物克隆入 pMD 18 T质粒 ,经DNA测序鉴定正确后 ,亚克隆入表达载体 pET30a+和 pMG36e ,成功构建了phyA基因 2种新型表达载体... 详细信息

直接以黑曲霉菌株F2 4 6基因组为模板 ,对植酸酶基因phyA的成熟肽 (分子长度为1347bp)进行了PCR扩增 ,再将PCR产物克隆入 pMD 18 T质粒 ,经DNA测序鉴定正确后 ,亚克隆入表达载体 pET30a+和 pMG36e ,成功构建了phyA基因 2种新型表达载体。植酸酶 phyA基因2种新型表达载体的构建 ,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。

关键词：植酸酶克隆表达载体黑曲霉 phyA基因

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滴滤塔气液流动与微生物膜分布的相互影响

环境科学与技术 2010年第4期33卷 42-44页

作者：范守城张云茹王永忠重庆生产力促进中心重庆401147 重庆工学院生物工程学院重庆400050 重庆大学动力工程学院重庆400030

生物膜滴滤塔性能受多孔填料、生物膜和气液两相流体流动特性的共同影响,传质过程复杂,流体流动强烈地影响生物滴滤塔生物膜的形成和分布,同时生物膜在滴滤塔中的分布反过来影响填料层内气液两相流体流动。实验研究了生物滴滤塔挂膜前... 详细信息

生物膜滴滤塔性能受多孔填料、生物膜和气液两相流体流动特性的共同影响,传质过程复杂,流体流动强烈地影响生物滴滤塔生物膜的形成和分布,同时生物膜在滴滤塔中的分布反过来影响填料层内气液两相流体流动。实验研究了生物滴滤塔挂膜前后填料层的孔隙率和不同气、液流量下压强降的变化,结果表明:滴滤塔内生物膜分布不均匀,填料层孔隙率随填料层高度增加而增加,填料层中下部,孔隙率低,生物量最大,填料层顶部,孔隙率与挂膜前相等,无生物膜生长;挂膜前气体流量对填料层压强降影响较液体流量影响大,挂膜后液体流量对填料层压强降影响较气体流量影响大;同时微生物挂膜成功后填料层气体压强降远大于挂膜前压强降。

关键词：生物滴滤塔生物膜两相流动特性流动阻力

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动物克隆技术及其发展新趋势

自然杂志 2004年第3期26卷 134-137,F003页

作者：霍丹群张云茹范守城重庆大学生物工程学院

综述了国内、外动物克隆技术的进展 ,并结合猪克隆技术对动物克隆技术的要点、路线以及当前存在的问题等方面作了较详细的论述 .另外 ,根据当前动物克隆技术理论和实践。

关键词：动物克隆发展趋势遗传性状技术缺陷器官移植

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初始葡萄糖浓度对气提乙醇发酵特性的影响

西南农业学报 2014年第3期27卷 1062-1066页

作者：范守城张云茹重庆生产力促进中心重庆401147 重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400050

酵母菌在乙醇发酵过程中,随着发酵进行乙醇逐渐积累将抑制发酵过程的进行,导致酵母菌的生长速率和发酵效率下降。为了消除发酵过程的这种抑制作用,根据乙醇的易挥发性,可以用N2作为载气,将发酵液中乙醇载出,从而降低发酵液中的乙醇浓度... 详细信息

酵母菌在乙醇发酵过程中,随着发酵进行乙醇逐渐积累将抑制发酵过程的进行,导致酵母菌的生长速率和发酵效率下降。为了消除发酵过程的这种抑制作用,根据乙醇的易挥发性,可以用N2作为载气,将发酵液中乙醇载出,从而降低发酵液中的乙醇浓度,提高乙醇发酵效率。本试验研究了在不同底物浓度条件下,乙醇气提发酵过程中发酵性能随时间变化情况。研究结果表明随着葡萄糖浓度从50 g/L增加到150 g/L,乙醇产量逐步增加,葡萄糖消耗完全;但当葡萄糖浓度达到200 g/L时,残余葡萄糖量增加,乙醇产量下降;而在气载条件下当葡萄糖初始浓度为150 g/L时酵母菌乙醇发酵性能最好,同时载气能有效消除产物乙醇对酵母菌乙醇发酵的抑制作用。这一研究结果对指导酿酒生产具有重要参考意义。

关键词：气提乙醇葡萄糖发酵

phyA基因新型载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

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中国生物工程杂志 2005年第1期25卷 70-75页

作者：范守城张云茹王孝友曾秀王金勇范首君重庆市畜牧科学研究院重庆市重点实验室402460 重庆工学院生物工程学院重庆400050

利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶基因(phyA)成熟肽编码序列设计引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析、DNA测序和氨基酸序列分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-... 详细信息

利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶基因(phyA)成熟肽编码序列设计引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析、DNA测序和氨基酸序列分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组质粒经IPTG诱导表达,SDS-PAGE特异区带分子量为50kDa,此重组蛋白占大肠杆菌可溶性蛋白的36.62％,酶活性较天然植酸酶高8倍以上。因此,该phyA基因具有正常的生物学功能,对其进行深入研究,为大量获得高活性植酸酶以及开发新型微生态制剂奠定了基础。

关键词： phyA基因表达载体大肠杆菌基因表达植酸酶饲料添加剂