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消痤汤对痤疮模型大鼠炎症反应的改善作用研究

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中药材 2022年第5期45卷 1240-1246页

作者：石凯歌梁家芬禤国维张丹纯黄志海李红毅韩彬广东药科大学中药学院广东广州510436 广东省中医院广东广州510120 广东省药品监督管理局中药全产业链质量评价重点实验室广东广州510406

目的:观察消痤汤对痤疮丙酸杆菌诱导的痤疮(Acne)模型大鼠炎症反应的改善作用,并探究其作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异维A酸软胶囊(3.125 mg/kg)组及消痤汤低(7.3 g/kg)、中(14.7 g/kg)、高(29.5 g/kg... 详细信息

目的:观察消痤汤对痤疮丙酸杆菌诱导的痤疮(Acne)模型大鼠炎症反应的改善作用,并探究其作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异维A酸软胶囊(3.125 mg/kg)组及消痤汤低(7.3 g/kg)、中(14.7 g/kg)、高(29.5 g/kg)剂量组,每组各10只。除正常对照组外,其余各组于大鼠耳廓导管开口处每日涂抹1 mL的油酸,隔日经耳廓皮下组织注射100μL痤疮丙酸杆菌悬液(6×10^(7)CFU/mL),连续14 d,建立痤疮模型。造模成功后,各给药组每天灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水。连续21 d后,使用游标卡尺测量大鼠耳廓厚度计算各组大鼠的耳廓肿胀率,通过HE染色观察其病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α、IL-6含量,免疫组化法分析耳部组织TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达,Q-PCR及Western Blot检测TNF-α、IL-6、AKT1、MMP-3表达。结果:与模型组比较,各给药组痤疮大鼠耳部病理情况有所改善,消痤汤中、高剂量组大鼠耳廓肿胀率及血清TNF-α、IL-6含量显著降低,免疫组化试验结果显示消痤汤中、高剂量组耳部组织TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达明显下调,Q-PCR和Western Blot结果显示除中剂量组耳部组织中IL-6 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)外,消痤汤中、高剂量组耳部组织中TNF-α、IL-6、AKT1、MMP-3 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:消痤汤治疗痤疮丙酸杆菌诱导的痤疮机制可能是通过改善炎症反应发挥其治疗作用。

关键词：消痤汤痤疮痤疮丙酸杆菌炎症反应

基于ISSR分子标记的何首乌遗传多样性分析

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分子植物育种 2023年

作者：张丹纯丁晓霞关婉涂嘉俊宫璐黄娟丘小惠黄志海台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院广州中医药大学第二临床医学院广东省中医院

何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)为《广东省岭南中药材保护条例》首批保护品种，为分析广东省道地药材何首乌的遗传多样性，该文采用ISSR分子标记技术对广东省何首乌8个居群38份样品进行分析。结果表明：(1)何首乌8条ISSR引物共... 详细信息

何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)为《广东省岭南中药材保护条例》首批保护品种，为分析广东省道地药材何首乌的遗传多样性，该文采用ISSR分子标记技术对广东省何首乌8个居群38份样品进行分析。结果表明：(1)何首乌8条ISSR引物共扩增得75条谱带，多态性位点数为73条，多态性位点百分数为97.33%；(2)各居群的遗传水平由高到低分别为：鼎湖山(DH)>德庆(DQ)>高州(GZ)>高要(GY)>惠州(HZ)>丰顺(FS)>乳源(RY)>从化(CH)；居群的遗传距离为0.0532～0.6419，遗传相似性系数为0.5263～0.9482，其中，居群肇庆鼎湖山(DH)与茂名高州(GZ)亲缘关系最近，居群广州从化(CH)与肇庆高要(GY)的亲缘关系最远。(3)基因多样性指数(H)为0.0663～0.2212，基因分化系数(Gst)为0.5286，遗传变异存在于居群间，居群间的基因流(Nm)为0.4459，基因流动性水平偏低，基因交流困难，种群发生分化。(4)PCoA结果、UPGMA聚类分析结果一致，所有居群分为两大支。上述结果提供了有效的种植建议，为尽可能更多地保存遗传多样性，应优先保护遗传多样性丰富的鼎湖山(DH)、德庆(DQ)居群，同时加强对现有种群的就地保护，为后续构建种质资源库提供参考。

关键词：何首乌 ISSR分子标记技术遗传多样性种质资源遗传结构

阳春砂DNA条形码鉴定与种质资源遗传多样性研究

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阳春砂DNA条形码鉴定与种质资源遗传多样性研究

作者：张丹纯广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:砂仁是我国的“四大南药”之一,收载于《中国药典》2015年版一部,来源于姜科植物阳春砂 Amomum villosum Lour.、绿壳砂Amomum villosum Lour.var.Xanthioides T.L.Wuet Senjen或海南砂Amomumlongiligulare T.L.Wu的干燥成熟果实。砂仁属品种众多,临床用药易混淆,药材真伪难辨,道地性药材质量难以保障,严重影响中药疗效,不利于提高药材质量。本研究以砂仁属阳春砂为主要研究对象,采用以分子生物学为基础的DNA条形码技术和ISSR分子标记技术来获取DNA遗传信息差异,构建广东省内阳春砂DNA条形码数据库,研究DNA条形码对砂仁属植物的鉴定能力和用分子标记探究阳春砂遗传多样性,确立鉴别砂仁属的有效条形码及阳春砂居群种植建议,为后续阳春砂的其他研究奠定了基础。方法:1.通过DNA条形码技术分析砂仁遗传信息差异:实地收集141份样品阳春砂基原植物、49份砂仁属混伪品共13个物种为实验样本,通过试剂盒法及其改进法提取总DNA,主要从当前用于植物物种鉴定常用的五种序列条带（ITS2、ITS、psbA-trnH、matK和rbcL）进行分析:以PCR扩增效率、测序成功率、候选序列种内种间变异、序列特征结构、BLAST分析、系统发育树聚类分析等用于砂仁及其混伪品的鉴定。2.基于ISSR分子标记检测技术开展不同居群阳春砂的遗传多样性分析:采用简单序列重复区间（ISSR）分子标记技术对广东省内7个居群共计141株个体的阳春砂样本的遗传多样性进行研究,深入分析阳春砂的遗传结构方式,构建聚类树状图。3.结合实验研究结果,归纳砂仁属的分子鉴定方法及对阳春砂种植建议。结果:1.本研究分析141份样品阳春砂基原植物、49份砂仁属混伪品的五种候选序列条带（ITS2、ITS、psbA-trnH、matK和rbcL）,共构建含531条序列的阳春砂DNA条形码文库,同时五个DNA条形码各自对砂仁属13个物种进行鉴别分析,其中ITS2序列鉴定结果最好,具有较大的种内种间距离和较高的物种鉴别率,结合ITS2序列二级结构结构特征可以有效区分阳春砂、绿壳砂、海南砂及其混伪品;ITS序列各物种种内无变异位点,种内遗传距离为0,种间距离在五种条形码中最大;matK序列测序成功率最低,matK、rbcL序列较为保守;五个片段的种间遗传距离平均值都大于种内遗传距离;构建的NJ聚类树中ITS2、psbA-trnH、ITS序列三者鉴别能力较好,因此推荐ITS2序列结合ITS2序列二级结构信息、psbA-trnH序列及ITS序列作为鉴别砂仁属植物的有效条形码。2.基于ISSR分子标记检测技术开展不同居群阳春砂的遗传多样性分析:本研究选用了 6条ISSR引物用于扩增阳春砂的DNA,共扩增出66条条带,其中具有多态性的条带56条,多态性比率为84.84%。每条引物扩平均增出11条带,平均多态性条带在6～14条之间。等位基因数Na范围为1.2879～1.7121,均值为1.4834。有效等位基因数Ne为1.1848～1.4240,均值为1.3115;基因多样性指数H在0.1117～0.2536之间,均值为0.1820。Shannon’s多样性指数Ⅰ为0.1658～0.3816,均值为0.2689;阳春砂物种水平基因多样性指数H为0.1820,Shannon’s多样性指数Ⅰ平均值为0.2689,表明阳春砂具有较高水平的遗传多样性。阳春砂维持一定的遗传多样性,各居群的遗传水平由高到低分别为:ZY（国道路边）＞ZJD（钟蕉垌）＞GY（地质公园）＞MM（电白）＞YC（大垌村）＞XFC（幸福村）＞TK（谭葵村）,且大多数遗传变异分布于居群内,居群之间的地理距离和遗传分化程度无相关性。利用GenAlEx6.502和NTSYS 2.10e软件对阳春砂7个居群进行主成分分析和聚类分析,结果表明居群亲缘关系较近,在聚类分析中可以被聚到一起,在遗传相似系数为0.84时明显分组,分为三支。阳春砂居群之间的遗传分化系数Gst为0.4487,遗传分化极大。各个居群之间的基因流（Nm=0.6143）也证实了这一点,这表明居群之间的遗传交流能力不高。3.基于上述研究成果,提出对阳春砂采取以下种植措施:应优先对遗传多样性丰富的G325国道路边的居群（ZY）、钟蕉垌居群（ZJD）和位于阳春市国家地质公园（GY）的居群进行保护,以期尽可能多地保存遗传多样性。同时,鉴于阳春砂种群间的遗传分化显著,应对每个现存的种群都加紧实施原地保护,建议在阳春市增设保护区。结论:本研究采用分子生物学基础的DNA条形码技术和ISSR分子标记技术:采用对五条候选序列条带ITS2、psbA-trnH、ITS、matK、rbcL的扩增测序,确认DNA条形码的鉴定能力。ITS2序列结合其二级结构特点可以用于阳春砂、绿壳砂及海南砂与砂仁属混伪品的鉴定;推荐ITS2序

关键词：阳春砂砂仁属 DNA条形码 ISSR 遗传多样性

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中药淡竹叶与鸭跖草的DNA条形码鉴定

分子植物育种 2022年

作者：张丹纯张靖关婉曹丽芬涂嘉俊侯森榉丘小惠黄志海宫璐广东省中医院广州中医药大学第二临床医学院台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院广东省中医院广州市中药活性成分手性研究重点实验室广东省中医院广东省药品监督管理局中药全产业链质量评价重点实验室

筛选4种候选DNA条形码(ITS2， psbA-trnH， matK， rbcL)，找到适合鉴定淡竹叶与鸭跖草的DNA条形码。本研究收集淡竹叶和鸭跖草植物样本各4份、不同地区市售药材各28份，通过ITS2、psbA-trnH、matK及rbcL条形码进行聚合酶链式反应(PCR)... 详细信息

筛选4种候选DNA条形码(ITS2， psbA-trnH， matK， rbcL)，找到适合鉴定淡竹叶与鸭跖草的DNA条形码。本研究收集淡竹叶和鸭跖草植物样本各4份、不同地区市售药材各28份，通过ITS2、psbA-trnH、matK及rbcL条形码进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并双向测序，所得序列采用CodonCode Aligner进行拼接；同时从GenBank下载30条淡竹叶和鸭跖草序列，利用MEGA 6.0软件分析种内遗传距离，并构建系统进化树。结果表明，参考文库淡竹叶与鸭跖草的种间最小遗传距离远远大于种内遗传距离，NJ系统聚类树能够明显分成两大支。市售药材淡竹叶、鸭跖草ITS2条形码测序成功率低，种内的变异程度较大。基于ITS2、psbA-trnH、matK及rbcL条形码构建市售药材和参考文库的聚类树图，结果均可明显分成两大支，但鸭跖草市售药材中存在疑问。本研究结果表明psbA-trnH、rbcL条形码鉴别淡竹叶与鸭跖草更为稳定，鸭跖草市售药材中可能混有伪品饭包草。

关键词：淡竹叶(Lophatherum gracile) 鸭跖草(Commelina communis) 聚合酶链式反应 DNA条形码 NJ系统发育聚类树

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中药白头翁及混伪品的DNA条形码分子鉴定

中华中医药杂志 2020年第2期35卷 896-899页

作者：张丹纯宫璐黄志海广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广州中医药大学第二附属医院广州510006

目的:应用ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL 4条DNA条形码区分白头翁药材及混伪品(委陵菜、翻白草、白鼓钉)。方法:提取样品总DNA,对目的条带进行PCR扩增和双向测序获得序列。通过软件MEGA6.06对序列进行比对、遗传距离分析和进化树构建。... 详细信息

目的:应用ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL 4条DNA条形码区分白头翁药材及混伪品(委陵菜、翻白草、白鼓钉)。方法:提取样品总DNA,对目的条带进行PCR扩增和双向测序获得序列。通过软件MEGA6.06对序列进行比对、遗传距离分析和进化树构建。采用相似性搜索法(BLAST)评估各序列鉴定成功率。结果:4条DNA条形码最大种内遗传距离均远小于其与混伪品的最小种间遗传距离,PCR扩增效率和测序成功率均为100%,ITS2序列种、属水平鉴定成功率均为100%;进化树显示ITS2、psbA-trnH与matK序列能有效将白头翁药材及混伪品明显区分开,而rbcL序列仅可鉴别出白鼓钉,且ITS2、psbA-trnH从种水平上对白头翁的鉴定能力大于matK序列。结论:ITS2与psbA-trnH序列可对白头翁及混伪品进行鉴别,确认了条形码在白头翁及混伪品中的普适性,为质量标准建立提供了依据。

关键词：白头翁混伪品 DNA条形码鉴定遗传距离分析进化树聚类分析二级结构

21种广东省珍稀保护药用植物的DNA条形码分析

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中药新药与临床药理 2019年第8期30卷 979-984页

作者：陈静仪张靖张丹纯关婉侯森榉王冰梅宫璐黄志海广州中医药大学第二附属医院广东广州510120

目的研究广东省珍稀濒危药用植物和国家重点保护药用植物的DNA条形码,构建条形码数据库,为广东省珍稀保护药用植物分子鉴定提供依据。方法野外采集目标植物叶片,硅胶干燥保存。采取试剂盒法提取样品基因组DNA,扩增ITS2、psbA-trnH、ITS... 详细信息

目的研究广东省珍稀濒危药用植物和国家重点保护药用植物的DNA条形码,构建条形码数据库,为广东省珍稀保护药用植物分子鉴定提供依据。方法野外采集目标植物叶片,硅胶干燥保存。采取试剂盒法提取样品基因组DNA,扩增ITS2、psbA-trnH、ITS、matK、rbcL、ycf1等6种DNA条形码,Sanger法进行双向测序。对双向拼接后的序列进行测序成功率、序列特征和BLAST鉴定情况统计。结果共搜集广东省珍稀保护药用植物21种182份,经测序获得条形码543条,各条形码在全部样品中的测序成功率比较:psbA-trnH>rbcL>ITS2>matK>ycf1>ITS,在物种水平的BLAST鉴定成功率比较:psbA-trnH>ITS>ycf1>matK>ITS2>rbcL。同时统计各条形码在蕨类、裸子及被子植物等不同分类阶元中的相应数据。结论综合测序成功率和BLAST鉴定成功率的结果,psbA-trnH条形码表现最好,为最适用于鉴定广东省珍稀保护药用植物的DNA条形码。同时,该研究构建了广东省珍稀保护药用植物DNA条形码数据库,为这些物种的分子鉴定奠定基础。

关键词：珍稀保护药用植物物种鉴定 DNA条形码

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广东省巴戟天DNA条形码及遗传多样性分析

世界科学技术-中医药现代化 2021年第10期23卷 3765-3771页

作者：关婉张丹纯丁晓霞苏贺杜颂灵许素冰丘小惠黄志海宫璐广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广州市中药活性成分手性研究重点实验室广州510006 广东省药品监督管理局中药全产业链质量评价重点实验室广州510006 广东省河源市紫金县南岭卫生院河源517438

目的构建广东省巴戟天DNA条形码数据库以及研究广东省不同产地巴戟天的遗传多样性。方法采用DNA条形码技术对149个巴戟天样本进行分析,构建DNA条形码数据库。利用ISSR分子标记技术对广东省8个居群的巴戟天进行遗传多样性分析。结果巴戟... 详细信息

目的构建广东省巴戟天DNA条形码数据库以及研究广东省不同产地巴戟天的遗传多样性。方法采用DNA条形码技术对149个巴戟天样本进行分析,构建DNA条形码数据库。利用ISSR分子标记技术对广东省8个居群的巴戟天进行遗传多样性分析。结果巴戟天五个通用条形码的PCR测序成功率为psbA-trnH>rbcL>matK>ITS2>ITS,149个巴戟天样本建立了含有569条序列的数据库。研究筛选出6条ISSR引物,从巴戟天中扩增得80条条带,多态性比率为92.50%,遗传相似系数在0.5625-0.8910,表明广东省巴戟天的遗传多样性较高。ISSR标记揭示的PCoA结果、UPGMA聚类分析结果一致,八个居群分为两大支。结论广东省巴戟天具有较高的遗传多样性。

关键词： DNA条形码 ISSR分子标记技术遗传多样性巴戟天

利用转录组测序技术挖掘产不同蛋壳颜色旧院黑鸡的肝脏组织色素沉积作用遗传基础

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甘肃农业大学学报 2024年

作者：张丹萍曾艳冉津铭王乙茹黎纯何武亮吴震洋西南大学动物科学与技术学院四川省达州市畜牧技术推广站达州市职业技术学院铜仁学院农林工程与规划学院

【目的】本研究通过转录组测序技术筛选产绿壳蛋鸡及粉壳蛋鸡肝脏组织转录表达谱差异，旨在揭示绿壳蛋鸡色素沉积的分子遗传基础。【方法】研究以旧院黑鸡为实验对象，分别选取处产蛋高峰期（10月龄）产绿壳及粉壳蛋鸡各3只，采集肝脏... 详细信息

【目的】本研究通过转录组测序技术筛选产绿壳蛋鸡及粉壳蛋鸡肝脏组织转录表达谱差异，旨在揭示绿壳蛋鸡色素沉积的分子遗传基础。【方法】研究以旧院黑鸡为实验对象，分别选取处产蛋高峰期（10月龄）产绿壳及粉壳蛋鸡各3只，采集肝脏组织，利用Illumina平台实施转录组测序。【结果】结果显示，共鉴定到291个组间显著差异基因。候选基因功能注释结果显示，共计18个差异表达基因被注释到17个GO条目，其中大部分归为生物学过程（41.18%）与细胞组分（11.76%）。另外，41个组间差异基因显著富集在11个KEGG通路，包括脂质生物合成蛋白、糖胺聚糖的降解、组氨酸代谢以及血管平滑肌收缩等。利用Q-PCR验证4个组间差异且与色素沉积相关基因，结果表明该系列基因表达规律与转录组结果一致即本研究转录组数据分析结果可靠。【结论】简而言之，本研究通过不同产蛋壳颜色旧院黑鸡肝脏组织的转录组表达谱差异分析，进一步丰富了绿壳蛋鸡色素沉积遗传基础，为后续旧院黑鸡绿壳蛋专门化品系选育提供了理论基础。

关键词：旧院黑鸡转录组测序色素沉积绿壳蛋肝脏组织

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沉香叶中有效成分研究

广东化工 2017年第15期44卷 139-139页

作者：刘明石胡艺红杨秋霞张丹纯吉林大学珠海学院化学与药学系广东珠海519041

本文总结学者对沉香叶中有效成分的研究结果,对沉香叶中有效成分进行分析,对其提取方法以及药理学作用进行分析研究,为沉香资源进一步开发利用提供依据。

关键词：沉香叶有效成分研究