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干细胞移植治疗缺血性脑卒中的研究与进展

实用医学杂志 2021年第21期37卷 2817-2821页

作者：廖益东王梓力陈光唐王旭东徐卡娅贵州医科大学贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵阳550004

缺血性脑卒中是一种全球病死率和致残率极高的疾病,临床上国内外的大多数报道都与脑血管病变闭塞有关,急需新的治疗手段进行干预。干细胞可以分泌神经营养因子,替换受损的神经元、通过抑制颅内外炎症反应和抗细胞凋亡发挥神经保护作用,... 详细信息

缺血性脑卒中是一种全球病死率和致残率极高的疾病,临床上国内外的大多数报道都与脑血管病变闭塞有关,急需新的治疗手段进行干预。干细胞可以分泌神经营养因子,替换受损的神经元、通过抑制颅内外炎症反应和抗细胞凋亡发挥神经保护作用,还可释放营养和生长因子等增强内源性修复机制的物质而起到神经保护及修复的作用,所以移植干细胞治疗缺血性脑卒中有望为这类疾病的治疗提供新选择。本文现从移植干细胞治疗缺血性脑卒中的作用机制及临床治疗运用、纳米材料在干细胞治疗中的作用、移植后追踪监测干细胞影像学方法等对干细胞治疗缺血性脑卒中的研究进展做一综述,以供广大医师在临床中治疗缺血性脑卒患者提供新的治疗选择与方案。

关键词：干细胞移植缺血性脑卒中纳米颗粒基因工程联合细胞

外周血氧化三甲胺水平与急性缺血性脑卒中关系的Meta分析

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实用心脑肺血管病杂志 2022年第4期30卷 84-88页

作者：陈光唐王梓力王旭东廖益东徐卡娅贵州医科大学附属医院神经外科贵州省贵阳市550004

目的采用Meta分析探讨外周血氧化三甲胺(TMAO)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)的关系,以期为明确外周血TMAO水平与AIS的关系提供循证医学证据。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、中国知网、万方数据知识... 详细信息

目的采用Meta分析探讨外周血氧化三甲胺(TMAO)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)的关系,以期为明确外周血TMAO水平与AIS的关系提供循证医学证据。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、中国知网、万方数据知识服务平台、维普网及中国生物医学文献数据库中有关TMAO与AIS关系的病例对照研究,检索时限从建库至2021-10-01;病例组为AIS患者,对照组为健康对照者;观察指标为外周血TMAO水平。采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析,通过逐一剔除纳入文献进行敏感性分析,绘制倒漏斗图以直观评估纳入文献的发表偏倚。结果最终纳入9篇文献进行Meta分析,其中英文文献7篇,中文文献2篇;中等质量文献2篇,高质量文献7篇;病例组3469例,对照组2453例。Meta分析结果显示,病例组患者外周血TMAO水平高于对照组〔标准化均数差(SMD)=0.88,95%置信区间(CI)(0.47,1.28),P<0.0001〕。敏感性分析结果显示,各效应值均在总体效应值的95%CI内,表明总体结果稳定。倒漏斗图分析结果显示,各文献分布基本对称,表明发表偏倚较低。结论现有证据表明,AIS患者外周血TMAO水平升高,而高水平TMAO可能与AIS发生有关。

关键词：急性缺血性脑卒中氧化三甲胺 Meta分析

移植肾缺血-再灌注损伤的发生机制及其保护研究进展

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器官移植 2016年第2期7卷 155-158页

作者：丁汉东廖贵益安徽医科大学第一附属医院泌尿外科合肥230022

肾缺血-再灌注损伤(IRI)指缺血肾重新获得血液灌注后,损伤反而加重的现象,是多因素参与的病理过程。IRI是肾移植术后影响肾功能恢复的主要因素。移植肾IRI的发生机制、寻找有效保护措施、促进移植肾功能早期恢复是肾移植领域的研究热点... 详细信息

肾缺血-再灌注损伤(IRI)指缺血肾重新获得血液灌注后,损伤反而加重的现象,是多因素参与的病理过程。IRI是肾移植术后影响肾功能恢复的主要因素。移植肾IRI的发生机制、寻找有效保护措施、促进移植肾功能早期恢复是肾移植领域的研究热点,本文就此作一综述。

关键词：缺血-再灌注损伤氧自由基缺血预处理缺血后处理

一种同时培养原代皮质及海马神经元的实验方法

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中国组织工程研究 2023年第6期27卷 897-902页

作者：廖益东明江宋文学王梓力张宇廖一飞徐卡娅杨华贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院神经外科贵州省贵阳市550004

背景:近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色,此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞,可用于模拟研究各类神经系统疾病。目的:建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,... 详细信息

背景:近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色,此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞,可用于模拟研究各类神经系统疾病。目的:建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,麻醉后断脊法处死,采用体积分数为75%乙醇消毒,用镊子分离出颅骨及脑膜,解剖出完整大脑,剥离脑血管膜,游离出大脑皮质及海马组织,采用木瓜蛋白酶及适量DNA酶顺序消化方案,吹打、离心、过滤,然后接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板和爬片内,以含体积分数10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为种植液,6 h后换用含有B27的Neurobasal无血清专用培养基,持续培养7 d后,显微镜下观察细胞形态及生长状态。分别采用β-Tubulin免疫荧光法、Neun抗体免疫组化法鉴定皮质神经元与海马神经元,以及采用MAP2免疫荧光法鉴定其纯度。结果与结论:①接种24 h后细胞体积变清晰,呈不规则圆形、周围环绕光晕,少数细胞已有细小突起,均已贴壁生长;持续培养3 d后,胞体逐步增大,部分呈聚团性生长,突触延长,细胞间出现交联;持续培养7 d后,胞体成熟饱满,细胞质显著增多,光晕增强,形成更为密集的神经元网络;②经Neun抗体免疫组化法、β-Tubulin免疫荧光法鉴定为神经元,神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定皮质神经元和海马神经元纯度分别为(94.00±0.34)%和(91.00±0.26)%,可用于后期实验;③结果表明,采用同一批24 h内新生SD大鼠分离大脑皮质和海马组织,经木瓜蛋白酶与DNA酶顺序消化后,可提取到优质的海马神经元及皮质神经元。该方案得到的神经元纯度高,操作简化,可作为研究各类神经系统疾病细胞模型的基础。

关键词：新生SD大鼠皮质神经元海马神经元原代培养神经疾病细胞模型

SD乳鼠原代皮质神经元及星形胶质细胞同时培养的实验方法

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中国组织工程研究 2023年第15期27卷 2339-2343页

作者：明江廖益东宋文学穆德勇刘宗伟徐卡娅贵州医科大学贵州省贵安新区550025 贵州医科大学附属医院神经外科贵州省贵阳市550004

背景:目前获取原代皮质神经元和星形胶质细胞的方法很多,传统方法通常是分别获取这两种细胞,但实验方法过于繁琐且浪费实验材料。找到一种简单、经济、可行并同时提取这两种细胞的培养方法尤为重要。目的:观察同时提取培养SD乳鼠大脑皮... 详细信息

背景:目前获取原代皮质神经元和星形胶质细胞的方法很多,传统方法通常是分别获取这两种细胞,但实验方法过于繁琐且浪费实验材料。找到一种简单、经济、可行并同时提取这两种细胞的培养方法尤为重要。目的:观察同时提取培养SD乳鼠大脑皮质神经元及星形胶质细胞的效果及注意事项。方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,用体积分数为75%乙醇浸泡消毒,待乳鼠昏迷后断脊处死,沿乳鼠颈部用剪刀离断头颅并放入装有高糖DMEM的小烧杯中,沿矢状缝打开头颅并取出大脑放入盛有高糖DMEM的培养皿中。在冰上剥出脑膜及血管,夹取皮质表面2.0-3.0 mm的脑组织,通过木瓜酶和DNA酶进行消化20 min,用含有体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12终止消化。以细胞浓度为1.0×10^(9) L^(-1)种植于含有爬片(用多聚赖氨酸处理)的6孔板中,分别于1,3,5,7 d通过倒置荧光显微镜下观察神经元的形态变化,使用Calcien-AM进行活细胞染色观察细胞活性,β-Tubulin、MAP2免疫荧光染色对神经元进行鉴定。将剩余大脑皮质进行星形胶质细胞的提取,经过胰酶消化、过滤、吹打,以适宜的浓度接种于培养瓶中,待细胞融合度达到90%时,进行恒温水平摇床振荡24 h以纯化星形胶质细胞。当细胞传代纯化后以1.0×10^(9) L^(-1)接种于6孔板中培养,GFAP免疫荧光染色对星形胶质细胞进行鉴定。结果与结论:①培养1 d后可见神经元贴壁生长,胞体增大,部分聚集生长,细胞间有少量的突触连接;培养3,5 d后胞体进一步增大,突触增粗伸长相互连接;培养7 d后神经元明显聚集,突触增长增粗,相互连接形成致密的细胞网。Calcien-AM活细胞染色可见神经元活性较好,经β-Tubulin、MAP2免疫荧光鉴定细胞纯度大于90%。②培养3 d后星形胶质细胞胞体增大,呈现梭状、不规则状,细胞间出现少量相互连接,细胞间存在较多小胶质细胞;培养5 d后胞体、突起进一步增大;培养7 d发现细胞间的小胶质细胞及其他杂质明显减少,背景较为干净。经GFAP免疫荧光鉴定细胞纯度大于95%。③此方法获得的皮质神经元和星形胶质细胞形态好、杂质少、纯度高,可满足神经科学研究对高纯度的皮质神经元及星形胶质细胞的需求。

关键词：皮质神经元星形胶质细胞 DNA酶免疫荧光原代培养

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HLA-G基因转录因子的生物信息学分析

山东医药 2016年第30期56卷 37-39页

作者：廖贵益钟金彪赵飞丁汉东安徽医科大学第一附属医院合肥230022

目的分析人白细胞抗原-G(HLA-G)基因的转录调控因子。方法利用生物信息学技术,从UCSC基因组数据库获取HLA-G基因的启动子区序列,登陆JASPAR数据库,在线预测HLA-G基因的转录调控因子,将得分阈值设定为≥95%并对涉及的转录因子进行分析。... 详细信息

目的分析人白细胞抗原-G(HLA-G)基因的转录调控因子。方法利用生物信息学技术,从UCSC基因组数据库获取HLA-G基因的启动子区序列,登陆JASPAR数据库,在线预测HLA-G基因的转录调控因子,将得分阈值设定为≥95%并对涉及的转录因子进行分析。结果成功获得了长度为2 kb的HLA-G基因启动子区序列。该启动子区涉及11个家族22种转录因子,其中8个转录因子家族的生物学功能涉及胚胎发育,4个转录因子家族的生物学功能涉及免疫阻遏、免疫耐受。结论 HLA-G基因的表达调控是多种转录因子作用的复杂网络过程。HLA-G转录因子在调控胚胎发育、诱导免疫耐受等过程中具有重要作用。

关键词：白细胞抗原-G 启动子转录因子生物信息学技术

横纹肌溶解症合并急性肾衰竭供者的维护及其供肾移植1例并文献复习

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国际泌尿系统杂志 2021年第3期41卷 539-541页

作者：钟金彪丁汉东廖贵益安徽医科大学第一附属医院泌尿外科合肥230031

目的探讨横纹肌溶解症(RM)合并急性肾衰竭(ARF)的供者维护及其供肾移植的临床效果。方法回顾性分析2019年4月本院收治的1例RM伴ARF供者的维护及其供肾移植的临床资料,并复习相关文献。结果供者因RM导致ARF,经积极维护治疗,获取供肾前血... 详细信息

目的探讨横纹肌溶解症(RM)合并急性肾衰竭(ARF)的供者维护及其供肾移植的临床效果。方法回顾性分析2019年4月本院收治的1例RM伴ARF供者的维护及其供肾移植的临床资料,并复习相关文献。结果供者因RM导致ARF,经积极维护治疗,获取供肾前血肌酐为52μumol/L,血浆肌酸激酶(CK)256U/L。移植前快速冰冻病理检查显示部分肾小管管腔内可见肌红蛋白沉积未见肾小球硬化.间质纤维化及微血栓形成。获取供肾时肾脏成棕褐色,移植肾恢复血流后成红褐色。受者术后未发生移植肾功能延迟恢复和原发性移植肾无功能,血肌酐进行性下降,恢复正常后出院。结论对于RM台并ARF的供者,给子予积极维护,待肾功能好转后可应用于移植,并可取得良好的近期效果。

关键词：横纹肌溶解急性肾衰竭肾移植

婴幼儿公民逝世后器官捐献成人双肾移植的临床效果(附2例报告)

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器官移植 2017年第4期8卷 295-298页

作者：丁汉东廖贵益钟金彪赵飞安徽医科大学第一附属医院泌尿外科合肥230022

目的探讨婴幼儿公民逝世后器官捐献成人肾移植的临床效果。方法回顾性分析2例婴幼儿供肾成人肾移植的临床资料、手术方式、免疫抑制剂应用和随访情况并复习相关文献。结果 1例男性受者原发病为慢性肾脏病变、肾衰竭,术后移植肾功能恢复... 详细信息

目的探讨婴幼儿公民逝世后器官捐献成人肾移植的临床效果。方法回顾性分析2例婴幼儿供肾成人肾移植的临床资料、手术方式、免疫抑制剂应用和随访情况并复习相关文献。结果 1例男性受者原发病为慢性肾脏病变、肾衰竭,术后移植肾功能恢复良好,移植肾体积逐渐增大,末次随访时(术后10个月)血清肌酐为84μmol/L。另1例女性受者原发病为肾衰竭尿毒症期,术后23 d死于心力衰竭合并严重肺部感染。2例受者均未发生血管并发症。结论婴幼儿捐献成人肾移植术后早期临床效果良好,移植肾增长迅速。术中精细操作,有利于预防供肾动脉血栓栓塞等并发症的发生。

关键词：肾移植婴幼儿公民逝世后器官捐献存活率双肾整体移植代偿性增生代偿率血管吻合

低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤保护作用的实验研究

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器官移植 2018年第5期9卷 372-378页

作者：丁汉东廖贵益钟金彪赵飞安徽医科大学第一附属医院泌尿外科安徽医科大学泌尿外科研究所泌尿生殖系统疾病安徽省重点实验室合肥230022

目的探讨建立兔肾缺血低温环境、常温环境及高温环境再灌注损伤模型的新方法,并评价低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤(IRI)的影响。方法将60只健康新西兰兔随机分为5组:对照组(A组)、假手术组(B组)、低温环境复灌组(C组)、常温环境复... 详细信息

目的探讨建立兔肾缺血低温环境、常温环境及高温环境再灌注损伤模型的新方法,并评价低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤(IRI)的影响。方法将60只健康新西兰兔随机分为5组:对照组(A组)、假手术组(B组)、低温环境复灌组(C组)、常温环境复灌组(D组)、高温环境复灌组(E组),每组12只。术后7 d内每日检测各组兔的血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;术后1 d检测各组兔肾组织内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;术后1 d采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化;术后1 d采用d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色评价细胞凋亡。结果术后1 d,与A组和B组比较,C、D和E组兔的Scr和BUN水平均升高(均为P<0.01);与C组比较,D组和E组兔的Scr和BUN水平升高更明显(均为P<0.05)。术后7 d内,C、D和E组兔的Scr和BUN水平呈下降趋势。与D组和E组比较,C组兔的Scr和BUN水平较低(均为P<0.05)。与A组和B组比较,C、D和E组的MDA含量均升高,SOD活性均降低(均为P<0.01);与C组比较,D组和E组的MDA含量升高更明显,SOD活性更低(均为P<0.01)。术后1 d肾组织病理学检查示A组和B组肾组织形态结构正常,D组和E组损伤表现明显,与D、E组比较,C组损伤较轻。TUNEL染色结果显示,D组和E组肾小管上皮细胞阳性细胞明显增多,管腔内也可见到阳性细胞,C组阳性细胞数量较D组和E组明显减少。结论冰泥覆盖肾脏、37℃生理盐水及40℃生理盐水连续滴加肾脏可建立不同温度环境复灌模型。低温环境复灌对肾IRI具有保护作用。

关键词：肾脏缺血-再灌注损伤冷缺血低温环境复灌常温环境复灌高温环境复灌兔凋亡