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加味柴胡疏肝汤调控miR-204对急性癫痫小鼠海马AKT/mTOR/P70S6K通路和脑电图的影响

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时珍国医国药 2020年第2期31卷 273-276页

作者：汪顺贵玉倩李华霞李欢卢玲廖现秋陈炜宋曦秦红玲刁丽梅广西中医药大学研究生学院广西南宁530023 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530001

目的探讨加味柴胡疏肝汤是否通过调节miR-204影响急性癫痫小鼠AKT/mTOR/P70S6K信号通路以及脑电图。方法将60只小鼠随机分为6组:生理盐水组、模型组、加味柴胡疏肝汤组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 mimic组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 in... 详细信息

目的探讨加味柴胡疏肝汤是否通过调节miR-204影响急性癫痫小鼠AKT/mTOR/P70S6K信号通路以及脑电图。方法将60只小鼠随机分为6组:生理盐水组、模型组、加味柴胡疏肝汤组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 mimic组、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 inhibitor组、卡马西平组。采用匹罗卡品使小鼠致痫,分别予加味柴胡疏肝汤灌胃、抑制及过表达miR-204后观察每组的指标情况;采用脑电图仪检测每组小鼠脑电波;RT-PCR检测每组小鼠海马组织miR-204的表达;Western Blot检测每组小鼠通路蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达情况。结果与生理盐水组相比,模型组小鼠脑电图痫性波明显增多,miR-204表达明显降低,通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达明显下降;与模型组相比,使用加味柴胡疏肝汤后,小鼠脑电图痫性波减少,小鼠海马组织miR-204表达明显升高,通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达升高;使miR-204过表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度增大;抑制miR-204表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度减少。结论加味柴胡疏肝汤通过升高miR-204的表达,激活AKT/mTOR/P70S6K通路,使其通路蛋白磷酸化,发挥神经保护的作用,减少痫性波,达到治疗癫痫的目的。

关键词：加味柴胡疏肝汤癫痫 miR-204 AKT/mTOR/P70S6K 脑电图

定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响

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中华中医药学刊 2019年

作者：李华琼刁丽梅张庆梅卢玲李欢廖现秋吴琼陈爱玲杨东仇小强广西中医药大学广西医科大学广西中医药大学第一附属医院

目的研究定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响，探讨其可能的疗效机制。方法取100只8～10周龄SPF级雄性小鼠，其中20只用于模型失败备用小鼠，将80只小鼠随机分为4组，分别为模型组（A）... 详细信息

目的研究定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响，探讨其可能的疗效机制。方法取100只8～10周龄SPF级雄性小鼠，其中20只用于模型失败备用小鼠，将80只小鼠随机分为4组，分别为模型组（A）、生理盐水组（B）、卡马西平组（C）、定痫丸组（D），每组20只，采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品的方法制作急性期癫痫小鼠模型，A组不予干预，B组实验全程均给予生理盐水，C组予卡马西平混悬液灌胃，D组予定痫丸混悬液灌胃，应用免疫组化和Western blot分别检测海马组织内β-Catenin（β-连环蛋白），Cyclin D1（细胞周期蛋白D1）和Wnt3a的蛋白表达水平，运用Tunel法检测神经元的凋亡情况。结果与生理盐水组比较，模型组海马组织中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达明显上调（P<0.05），在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞增多（P<0.05）；与模型组比较，定痫丸组中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达下调（P<0.05），在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞减少（P<0.05）；在4组海马组织中均未检测到Cyclin D1蛋白的表达。结论定痫丸可能是通过下调wnt/β-Catenin信号通路上的β-Catenin、Wnt3a的蛋白的表达，抑制了海马神经元的凋亡，达到治疗癫痫的作用。

关键词：定痫丸癫痫 Wnt/β-Catenin信号通路凋亡

基于定痫汤干预后癫痫小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化及脑电图变化的研究

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中医药学报 2022年第2期50卷 33-38页

作者：卢玲刁丽梅李欢廖现秋广西中医药大学广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的:研究定痫汤干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化以及自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化,探讨其可能的作用机制。方法:取50只雄性昆明小鼠,其中40只随机分成模型组、生理盐水组、卡马西平组和定痫汤组... 详细信息

目的:研究定痫汤干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化以及自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化,探讨其可能的作用机制。方法:取50只雄性昆明小鼠,其中40只随机分成模型组、生理盐水组、卡马西平组和定痫汤组,每组10只,另外10只为备用小鼠。首先对各组实验动物进行灌胃给药两周,模型组和生理盐水组均予20 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水进行灌胃;定痫汤组予7 g·kg^(-1)·d^(-1)定痫汤药液进行灌胃;卡马西平组予30 mg·kg^(-1)·d^(-1)卡马西平混悬液灌胃。然后,通过盐酸匹罗卡品构建小鼠急性癫痫模型。其次,对各组小鼠进行行为学和脑电图观察。最后,将小鼠断头取脑,采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化;并且通过免疫组化法检测自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化。结果:与生理盐水组相比,模型组小鼠癫痫发作的频率多、持续时间长,小鼠脑电图尖波、棘波、棘慢波明显增多,海马区miRNA-204的表达明显下调(P<0.01),自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达明显增多(P<0.01)。与模型组相比,使用定痫汤干预后小鼠癫痫发作频率减少,小鼠脑电图痫性波形减少,小鼠海马区miRNA-204的表达升高(P<0.01),自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达下调(P<0.01)。结论:定痫汤可以减少小鼠癫痫发作的频率,减少小鼠脑电图的痫性波形。其可能是通过上调miRNA-204的表达,抑制自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达,拮抗小鼠海马神经元过度自噬,从而发挥抗癫痫的作用。

关键词：定痫汤癫痫 miRNA-204 脑电图 ATG7 LC3II

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小柴胡汤治疗癫痫的网络药理学研究

中国医院药学杂志 2020年第22期40卷 2296-2302页

作者：卢玲李欢廖现秋汪顺贵玉倩李华霞刁丽梅广西中医药大学研究生院广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院脑病科一区广西南宁530023

目的:通过中药网络药理学技术研究小柴胡汤治疗癫痫的活性成分、作用靶标、靶标的相互作用关系、靶标的生物学功能及其作用的通路,探讨其可能的作用机制。方法:在中药系统药理学数据库和分析平台上筛选出小柴胡汤的活性成分,并根据活性... 详细信息

目的:通过中药网络药理学技术研究小柴胡汤治疗癫痫的活性成分、作用靶标、靶标的相互作用关系、靶标的生物学功能及其作用的通路,探讨其可能的作用机制。方法:在中药系统药理学数据库和分析平台上筛选出小柴胡汤的活性成分,并根据活性成分检索其成分作用的靶标。利用在线文本挖掘服务器(GeneCards)和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)查询与癫痫相关的靶标,并使用在线软件venny 2.1对癫痫相关的靶标与小柴胡汤作用的靶标取交集,得到小柴胡汤治疗癫痫的潜在靶标156个。将潜在靶标导入Cytoscape软件,初步获得"成分-靶标"关系网络;同时基于clusterProfiler包对潜在靶标进行基因本体(GO)功能富集分析、基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。并根据KEGG富集分析结果,构建"潜在靶标-KEGG通路"关系网络。此外,为了解靶标之间的相互作用关系,把潜在靶标导入STRING在线数据库,构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI网络),将关系网络编排导入Cytoscape软件进行拓扑结构分析获得核心子网络。结果:小柴胡汤的活性成分有162种,主要包括:槲皮素、汉黄芩素、黄芩苷、山柰酚、人参皂苷Rh2、异鼠李素、柚皮素、木蝴蝶素等;作用的靶标有156个。其主要作用的途径有:IL-17信号通路、细胞凋亡、C型凝集素受体信号通路、内分泌的阻力等。结论:小柴胡汤治疗癫痫体现了中药复方多成分、多靶标、多通路共同作用的特点。本研究进一步拓宽了小柴胡汤在神经系统疾病方面的应用,为进一步的实验研究提供了理论基础。

关键词：小柴胡汤癫痫网络药理学靶标通路

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半夏治疗癫痫的网络药理学机制研究

中华中医药学刊 2021年第5期39卷 90-93,I0026-I0028页

作者：李欢陈静卢玲廖现秋汪顺贵玉倩李华霞秦红玲刁丽梅广西中医药大学广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的基于网络药理学预测半夏治疗癫痫的潜在有效成分及作用机制。方法通过中药系统药理学技术平台(TCMSP)检索半夏的有效成分,利用中药系统药理学分析平台数据库(TCMSP)筛选半夏的有效成分,并收集其对应的作用靶标;通过GeneCards、OMIM... 详细信息

目的基于网络药理学预测半夏治疗癫痫的潜在有效成分及作用机制。方法通过中药系统药理学技术平台(TCMSP)检索半夏的有效成分,利用中药系统药理学分析平台数据库(TCMSP)筛选半夏的有效成分,并收集其对应的作用靶标;通过GeneCards、OMIM等数据库筛选出癫痫的靶标。运用Cytoscape软件构建半夏治疗癫痫的"药物-活性成分-疾病-靶标"网络,通过STRING数据库构建靶标蛋白相关作用网络并进行关键靶标的生物功能注释及通路分析。结果半夏8个有效成分通过干预23个靶标、81条通路发挥治疗癫痫的作用。网络分析显示半夏中24-乙基胆甾醇-4-烯-3-酮、胍、黄芩素、黄芩苷、β-谷甾醇、豆甾醇等8个活性成分通过CASP3、CASP8、CASP9、VEGFA、ESR1、HIF1A和BCL2等20个共有靶点和人类免疫缺陷病毒1感染通路、弓形虫病通路、细胞凋亡通路、p53信号通路、HIF-1信号通路等81条通路发挥对癫痫的作用。结论半夏对治疗癫痫不仅具有通过多成分作用于多靶标的特点,而且会通过潜在作用靶标之间的相互影响发挥复杂的网络调节作用。

关键词：半夏网络药理学癫痫有效成分靶标

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从化痰息风法论治癫痫的研究进展

广西医学 2020年第8期42卷 1022-1024页

作者：李欢卢玲廖现秋何乾超陈炜刁丽梅广西中医药大学研究生学院南宁市530001 广西中医药大学第一附属医院脑病一区南宁市530023

癫痫属于中医学"痫病"范畴,发病机制以风痰阻络证多见,诸多医家采用化痰息风法治疗癫痫取得较好效果。本文搜集近年来有关化痰息风法治疗癫痫的文献进行综述。

关键词：癫痫化痰息风法中医药疗法综述

加味柴胡疏肝汤调控miR-204影响癫痫小鼠海马神经元调亡与ATG7、LC3Ⅱ的表达

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世界科学技术-中医药现代化 2020年第7期22卷 2154-2159页

作者：汪顺贵玉倩李华霞李欢卢玲廖现秋周艳英宋曦秦红玲刁丽梅广西中医药大学研究生学院南宁530023 广西中医药大学第一附属医院南宁530001

目的观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马神经元自噬和凋亡的拮抗作用,探讨其发挥神经保护作用的机制。方法将60只小鼠随机分为6组:生理盐水组(20 mL·kg-1·d-1灌胃两周)、模型组(180mg·kg-1腹腔注射)、加味柴胡疏肝汤组(7 g·kg-1·d-... 详细信息

目的观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马神经元自噬和凋亡的拮抗作用,探讨其发挥神经保护作用的机制。方法将60只小鼠随机分为6组:生理盐水组(20 mL·kg-1·d-1灌胃两周)、模型组(180mg·kg-1腹腔注射)、加味柴胡疏肝汤组(7 g·kg-1·d-1灌胃两周)、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 mimic组(2μL颅内注射)、加味柴胡疏肝汤+miRNA-204 inhibitor组(2μL颅内注射)、卡马西平组(混悬液30 mg·kg-1·d-1灌胃两周);采用匹罗卡品使小鼠致痫,抑制及过表达miRNA-204后,分别予加味柴胡疏肝汤灌胃,处死小鼠,取其海马组织,观察每组的指标情况:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测小鼠海马miRNA-204,以及自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达情况,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测小鼠海马C1区神经元凋亡情况。结果与生理盐水组相比,模型组小鼠海马miR-204表达明显降低(P<0.01),自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达,神经元凋亡指数明显升高(P<0.01);与模型组相比,使用加味柴胡疏肝汤后,小鼠海马组织miR-204表达明显升高,自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达,神经元凋亡指数明显降低(P<0.05);使miR-204过表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度增大(P<0.01);抑制miR-204表达后,与单纯使用柴胡疏肝汤相比,上述指标变化趋势相同,变化幅度减少(P<0.05)。结论加味柴胡疏肝汤具有抗癫痫作用,可能是通过升高miRNA-204的表达,拮抗小鼠海马神经元过度自噬和凋亡。

关键词：加味柴胡疏肝汤癫痫 miR-204 自噬凋亡

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“探究与发现”栏目的教学策略研究

“探究与发现”栏目的教学策略研究

作者：廖秋凤广州大学

学位级别：硕士

新标准强调数学探究活动,鼓励学生通过多种方式提升数学能力.“探究与发现”栏目应课标要求而生,是进行数学探究式教学的重要知识载体,但教学效果并不理想,并且栏目相关研究较少.本文以建构主义理论、弗赖登塔尔思想和探究式教学理论为... 详细信息

新标准强调数学探究活动,鼓励学生通过多种方式提升数学能力.“探究与发现”栏目应课标要求而生,是进行数学探究式教学的重要知识载体,但教学效果并不理想,并且栏目相关研究较少.本文以建构主义理论、弗赖登塔尔思想和探究式教学理论为基础,先从内容、数量、分布、呈现方式、呈现位置、栏目分类、栏目价值和栏目核心素养八个方面对“探究与发现”栏目进行文本分析,把握栏目特点,再分别对教师和学生进行了问卷调查,了解栏目的教学和学习现状,分析栏目教学存在的问题.最后,依据分析和调查结论提出促进“探究与发现”栏目教学的策略,并给出相应的教学案例.本文主要得出以下结论:1.新版教材中的“探究与发现”栏目更重视数学文化拓展,难度有所下降,数量分布更符合高中生学习情况.栏目主要以文字形式呈现,内容为栏目前正文知识的拓展,分为数学知识拓展、数学文化拓展、数学方法拓展和知识联系拓展类.栏目的价值在于渗透数学文化,突出育人价值、渗透数学思想,训练数学思维、补充必要知识,构建知识体系、培养创新思维,提升探究能力、发展核心素养,改善教学方式.2.在教师和学生的问卷调查中发现:“探究与发现”栏目的教学主要受到学情、栏目难度、教学时间及与正文相关度四方面的影响,栏目学习主要受到兴趣、考试内容和栏目难度三方面的影响;栏目教学存在着关注度低、学习主动性低、教学开展频率低、栏目价值未能实现四大问题.3.基于文本分析和问卷调查的研究结论,本文针对性的从教学原则、教学准备、教学环节、教学方法四个方面提出了栏目教学策略.在教学原则上,要坚持素养导向,以学生为学习主体,强调教学的探究过程;在教学准备过程中,提高教师自身素质,进行单元备课,明确栏目要求;在教学环节中,可实行课内渗透和课外延伸策略;在教学方法上,提出了分层教学,合作探究、衔接高考,讲练结合、问题引导,微型探究三大策略.

关键词：探究与发现栏目教学高中数学

加味柴胡疏肝汤调控miRNA-204对癫痫小鼠海马自噬的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第22期25卷 1-7页

作者：汪顺贵玉倩李华霞李欢卢玲廖现秋吴琼李华琼陈爱玲刁丽梅何乾超蔡伦梁霜广西中医药大学研究生学院南宁530023 广西中医药大学第一附属医院南宁530001

目的:观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马微小非编码RNA 204(miRNA-204)的表达影响,探讨其发挥神经保护作用的机制。方法:将60只小鼠随机分为6组:正常组,模型组(盐酸匹罗卡品180 mg·kg-1),加味柴胡疏肝汤组(7 g·kg-1·d-1),加味柴胡疏... 详细信息

目的:观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马微小非编码RNA 204(miRNA-204)的表达影响,探讨其发挥神经保护作用的机制。方法:将60只小鼠随机分为6组:正常组,模型组(盐酸匹罗卡品180 mg·kg-1),加味柴胡疏肝汤组(7 g·kg-1·d-1),加味柴胡疏肝汤+miRNA-204模拟物组(7 g·kg-1·d-1+2μL),加味柴胡疏肝汤+miRNA-204抑制物组(7 g·kg-1·d-1+2μL),卡马西平组(30 mg·kg-1·d-1),各灌胃2周;采用匹罗卡品使小鼠致痫,6组分别灌胃给药、抑制及过表达miRNA-204后,处死小鼠,取其海马组织,观察每组的指标情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠海马miRNA-204的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3),自噬相关标志性蛋白7(ATG7)的表达情况,苏木素-伊红(HE)染色观察每组小鼠海马病理学变化;透射电镜观察各组小鼠海马组织自噬情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠miRNA-204表达显著降低(P<0.01),海马C1区病理改变最明显,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著升高(P<0.01),自噬小体数量最多;与模型组比较,加味柴胡疏肝组小鼠海马组织miRNA-204表达明显升高(P<0.05),海马C1区病理改变减轻,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达明显降低(P<0.05),自噬小体数量减少;加味柴胡疏肝汤+miRNA-204模拟物组小鼠海马组织miRNA-204表达显著升高(P<0.01),海马C1区病理改变最轻,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P<0.01),自噬小体数量最少;与加味柴胡疏肝汤比较,加味柴胡疏肝汤+miRNA-204抑制物组上述指标变化趋势相同,变化幅度明显减少(P<0.05)。结论:加味柴胡疏肝汤可以改善癫痫小鼠海马组织病理改变,其作用机制可能是通过升高癫痫小鼠海马miRNA-204的表达,抑制神经元过度自噬,减少细胞凋亡。

关键词：柴胡疏肝汤癫痫 miRNA-204 自噬