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与SMV-P3互作的GmEF1A和GmVATP的大豆遗传转化及转基因后代抗SMV鉴定

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与SMV-P3互作的GmEF1A和GmVATP的大豆遗传转化及转基因后代抗SMV...

作者：廖文林南京农业大学

学位级别：硕士

大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的一种病毒,能侵染大豆并引起花叶、皱缩和坏死等症状,在全球大豆产区造成了严重的减产和品质下降。以传统育种方式培育抗SMV新品种是当前最普遍的防治策略,但这种方... 详细信息

大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的一种病毒,能侵染大豆并引起花叶、皱缩和坏死等症状,在全球大豆产区造成了严重的减产和品质下降。以传统育种方式培育抗SMV新品种是当前最普遍的防治策略,但这种方法培育出的品系对SMV不同株系的抗性存在差异。同时病毒的遗传物质简单,往往易变异分化出不同的株系。因此传统育种方法在病毒防治方面有很大的局限性。当下发展迅速的转基因技术和RNA干扰技术能打破这一屏障,培育出对大豆花叶病毒具有广谱抗性的新品种。在酵母双杂实验(Yeast Two Hybrid,Y2H)中发现大豆翻译延伸因子1A(Soybean Translation Elongation Factor,GmEF1 A)和大豆液泡三磷酸酶(Soybean Vacuolar-ATPase,GmVATP)与SMV-P3有很强的互作关系,也与病毒复制相关。随后的病毒诱导的基因沉默(Virus Induced Gene Silencing,VIGS)实验发现,GmEF1A和Gm VA TP功能的阻断或干扰能抑制SMV对大豆的侵染。但未见利用农杆菌介导的大豆子叶节转化法将GmEF1A基因和Gm VA TP基因的干扰片段进行大豆遗传转化,以验证其在大豆花叶病毒侵染的时作用的报道。因此,本研究利用Gateway技术构建干扰表达载体并进行大豆遗传转化,对筛选出的阳性苗进行加代繁殖和抗性鉴定,分析GmEF1A基因和Gm VA TP基因的功能,并为高世代筛选提供可用的种质资源。对大豆GmEF1A全部5个拷贝和Gm VATP全部2个拷贝的核苷酸和氨基酸序列进行比对,确定其功能保守区域,应用 Gateway技术构建RNAi载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-EF1Ai和pB7GWIWG2(Ⅱ)-VA TPi。利用农杆菌介导的大豆子叶节转化方法,以天隆1号为受体材料,bar基因为筛选标记进行大豆转基因实验。共计获得GmEF1A转基因抗性组培苗8株,Gm VATP转基因抗性组培苗37株。通过除草剂涂抹、PCR和PAT/bar转基因检测试纸鉴定,共筛选出GmEF1A转基因阳性T0代转基因大豆植株7棵,Gm VA TP转基因T0代转基因大豆植株33棵,平均转化率为2.75%。这不仅为验证该基因在大豆花叶病毒侵染过程中发挥的功能提供实验材料,也为研究抗病反应有关通路和明确候选基因在该通路中的作用提供新途径。已收获的40株T0代转基因阳性植株在隔离网室进行加代繁殖,共计获得19株GmEF1A T1代转基因阳性植株和160株Gm VATPT1代转基因阳性植株。Southern blot杂交和绝对荧光定量拷贝数分析确定外源基因以低拷贝的方式插入到大豆基因组。T1代分离比卡方(χ2)分析发现有符合3:1或15:1分离比的T0家系。抗病鉴定共筛选出T1代Gm VATP转基因高抗大豆41棵,GmEF1A转基因高抗大豆11棵。T1代GMV4TP和GmEF1A转基因大豆花期倒三叶的平均发病等级分别为1.12和1.08,远低于非转基因植株发病等级3.07。对T2代转基因大豆植株qRT-PCR和DAS-ELISA分析发现,Gm VA TP基因和GmEF1A基因的表达都受到了抑制。转基因植株中大豆花叶病毒的含量都显著低于非转基因植株,且含量随着时间推移而下降。接种SMV 15天和30天后,采样的转基因植株体内SMV含量均为阴性。对T2代转基因植株进行抗病性鉴定,共获得20株GmEF1A和23株Gm VA TP高抗转基因植株。种皮褐斑率调查结果显示,GmEF1A和Gm VA TP转基因植株种皮平均褐斑率分别为2.09%和2.82%,远低于阴性对照的87.39%。

关键词：大豆花叶病毒 GmEF1A基因 GmVATP基因农杆菌介导大豆遗传转化抗SMV功能验证

基于混合率模型的功能梯度材料火箭壳体振动特性分析

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推进技术 2022年第10期43卷 333-341页

作者：张龙刘秉斌廖文林唐萍刘春辉中国空气动力研究与发展中心四川绵阳621000 中国航空工业气动研究院辽宁沈阳110034

为了研究功能梯度材料(Functionally graded material,FGM)火箭壳体的振动特性,发展了一种基于混合率模型的FGM材料性能计算方法。首先,对FGM壳体的材料分布特征进行了分析,建立了统一的材料公式模型,可表征材料性能沿厚度方向变化规律... 详细信息

为了研究功能梯度材料(Functionally graded material,FGM)火箭壳体的振动特性,发展了一种基于混合率模型的FGM材料性能计算方法。首先,对FGM壳体的材料分布特征进行了分析,建立了统一的材料公式模型,可表征材料性能沿厚度方向变化规律不同的多种FGM材料模型。其次,建立了FGM壳体材料的几何分层模型,基于混合率法则推导得到了宏观等效的正交各向异性材料性能参数表达式,并讨论了分层数对预测结果的影响。然后,将该方法用于矩形平板、带孔圆板、圆柱壳体、锥形壳体和球形壳体的振动分析,计算结果与相关文献结果具有较好的一致性,最大误差不超过2.33%,表明该方法具有较高的精度。最后,将该方法成功用于FGM火箭壳体的振动特性分析,针对材料性能沿厚度方向的几种不同分布模式,计算了FGM火箭壳体的前10阶固有频率和振动模态。

关键词：功能梯度材料混合率各向异性火箭壳体振动分析

基于电涡流位移传感器的钛合金叶片振动疲劳试验研究

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推进技术 2022年第2期43卷 349-355页

作者：张龙邱荣凯刘春辉程俊刘秉斌廖文林中国空气动力研究与发展中心四川绵阳621000 中国航空工业空气动力研究院辽宁沈阳110034

为了研究钛合金叶片振动疲劳特性,基于电磁振动测试平台和非接触式电涡流位移传感器,开展了试验工装和试验程序设计。通过本文的传感器标定和振动应力标定方法研究,发展了基于电涡流位移传感器的非接触测量式钛合金叶片振动疲劳试验手段... 详细信息

为了研究钛合金叶片振动疲劳特性,基于电磁振动测试平台和非接触式电涡流位移传感器,开展了试验工装和试验程序设计。通过本文的传感器标定和振动应力标定方法研究,发展了基于电涡流位移传感器的非接触测量式钛合金叶片振动疲劳试验手段,进而完成了疲劳考核试验和裂纹扩展试验,研究了裂纹长度和固有频率随疲劳循环数累积的变化规律。试验结果表明,钛合金叶片具有较好的抗疲劳特性,疲劳裂纹萌生寿命较长,但裂纹扩展寿命较短。

关键词：钛合金叶片振动疲劳标定方法振动应力裂纹扩展

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离子束抛光加工矩形离轴非球面镜

国防科技大学学报 2011年第1期33卷 100-104页

作者：廖文林戴一帆周林王建敏袁征解旭辉国防科技大学机电工程与自动化学院湖南长沙410073

采用一种简单的方法使用线性三轴离子束系统实现了矩形离轴非球面镜的抛光加工。根据离子束材料去除机理,分析了去除函数的法向材料去除特性,并且以去除函数束径、峰值去除速率和体积去除速率为指标,评价了入射角的小扰动鲁棒性。利用... 详细信息

采用一种简单的方法使用线性三轴离子束系统实现了矩形离轴非球面镜的抛光加工。根据离子束材料去除机理,分析了去除函数的法向材料去除特性,并且以去除函数束径、峰值去除速率和体积去除速率为指标,评价了入射角的小扰动鲁棒性。利用相关的分析和实验结果,对矩形离轴镜的抛光加工进行了合理的简化,并在自行研制的离子束抛光机床上进行了修形试验,经过多次迭代加工后,总计用时584min,其面形精度均方根误差RMS由初始的0.295λ,提高到0.046λ,收敛率达到了6.4。实验结果表明,利用离子束抛光独特的材料去除特性,能够有效地改善面形精度,可以对非球面镜进行高效高精度修形。

关键词：离子束抛光离轴非球面去除函数材料去除特性

达渝高速公路D10合同段K151+300～500段滑坡发育特征及稳定性计算

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西南公路 2011年第3期 65-68页

作者：廖文林四川省交通运输厅公路规划勘察设计研究院成都610041

目的:对达渝高速公路D10合同段K151+300～500段滑坡进行工程地质勘察,给出可作为支挡构造物地基的岩、土物理力学参数。方法:通过地面地质调查、变形观测、人工坑探、机械钻探、室内试验等手段。结果:利用试验及反算指标,经相互校核后,... 详细信息

目的:对达渝高速公路D10合同段K151+300～500段滑坡进行工程地质勘察,给出可作为支挡构造物地基的岩、土物理力学参数。方法:通过地面地质调查、变形观测、人工坑探、机械钻探、室内试验等手段。结果:利用试验及反算指标,经相互校核后,选取参数计算滑坡的稳定性,提供K=1.10、1.15、1.20及1.25条件下设计路堤的剩余下滑力,分析论证滑坡发展趋势及可能规模。提供支挡构造的建议方案。结论:该滑坡为一典型的复合性滑坡复活,属牵引式滑坡,并针对滑坡的施工、处置提出了建议。

关键词：达渝高速公路牵引式滑坡复合型滑坡滑面抗剪参数

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离子束倾斜入射抛光对表面粗糙度的影响

纳米技术与精密工程 2012年第4期10卷 365-368页

作者：舒谊周林解旭辉廖文林李圣怡国防科技大学机电工程与自动化学院长沙410073

基于光学元件离子束高精度确定性抛光技术,在自行研制的离子束抛光机床上,本文研究了离子束倾斜入射抛光对光学材料熔石英表面粗糙度的影响.为了在离子束抛光中改善表面粗糙度,采用了0°～80°之间不同入射角度的离子束倾斜抛光和倾斜4... 详细信息

基于光学元件离子束高精度确定性抛光技术,在自行研制的离子束抛光机床上,本文研究了离子束倾斜入射抛光对光学材料熔石英表面粗糙度的影响.为了在离子束抛光中改善表面粗糙度,采用了0°～80°之间不同入射角度的离子束倾斜抛光和倾斜45°入射均匀去除两种实验方案进行研究,其中不同入射角度抛光实验研究结果表明:离子束垂直入射抛光较难改善表面粗糙度,倾斜入射抛光可以较好地改善表面粗糙度,入射角为30°～60°之间时抛光效果最佳,表面粗糙度得到明显改善;倾斜45°入射均匀去除抛光实验结果表明表面粗糙度的RMS值由抛光前(0.92±0.06)nm下降到(0.48±0.04)nm,提高了光学零件的表面质量,验证了离子束倾斜入射抛光可以较好地改善表面粗糙度,实现了离子束倾斜抛光超光滑表面的生成.

关键词：离子束抛光倾斜入射熔石英表面粗糙度超光滑表面

直接数字化X线摄影技术与普通高千伏X线成像技术对尘肺诊断的比较

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实用医技杂志 2013年第6期20卷 623-624页

作者：廖文林太原煤气化职工医院 030024

随着科学技术的进步，医学影像检查有了突飞猛进的发展，如今直接数字化x线摄影（DR）技术已广泛应用于我国基层医院，而尘肺的x线诊断主要依赖于传统的普通高千伏x线摄影技术，本研究旨在对尘肺筛查时DR与普通高千伏x线摄片在诊断的阳... 详细信息

随着科学技术的进步，医学影像检查有了突飞猛进的发展，如今直接数字化x线摄影（DR）技术已广泛应用于我国基层医院，而尘肺的x线诊断主要依赖于传统的普通高千伏x线摄影技术，本研究旨在对尘肺筛查时DR与普通高千伏x线摄片在诊断的阳性率和工作效率进行对比研究。

关键词：数字化x线摄影技术尘肺诊断 x线成像技术高千伏直接数字化x线摄影科学技术影像检查基层医院

大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化

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植物保护学报 2014年第4期41卷 453-460页

作者：高乐翟锐丁雪妮李凯廖文林智海剑南京农业大学国家大豆改良中心作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室南京210095

为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比... 详细信息

为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比对,通过酶切以及PCR方法鉴定载体,并利用农杆菌介导的转基因体系进行大豆遗传转化。克隆出264 bp高度保守的CPi干扰片段,通过测序证实其与目标序列的匹配度达到100%;重组质粒经过XbaⅠ单酶切后出现783 bp和10818bp两条带,经过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后出现2256bp和9346bp两条带,说明2个ccdB结合位点均被CPi取代;PCR反应得到474 bp和460 bp两条带,说明CPi以反向重复形式与pB7GWIWG2(Ⅱ)组合。共获得10棵T0代转基因幼苗,经除草剂涂抹、PCR、PAT/bar转基因检测试纸检测后,6株为阳性,表明该方法可筛选出对大豆花叶病毒具有抗性的转基因大豆新种质,为SMV抗病育种工程提供良好的亲本材料。

关键词：大豆花叶病毒 CP基因 RNAi GATEWAY技术农杆菌介导大豆转基因

自读自悟自主发展——《向命运挑战》一课两式

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小学教学设计（文科版） 2003年第11期 22-23页

作者：廖文林萧芬湖南河北