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盐制对五子衍宗丸化学成分及药效的影响研究

盐制对五子衍宗丸化学成分及药效的影响研究

作者：廖宇娇成都中医药大学

学位级别：硕士

五子衍宗丸,是中医补肾益精的常用方。早在《摄生众妙方》中就有记录,有添精益髓、补肾固精的功效,具有“古今第一种子方”的美誉。由菟丝子、覆盆子、枸杞子、五味子、车前子组成,经君臣佐使配伍后具有补中有泻、涩中有利、补阴扶阳的... 详细信息

五子衍宗丸,是中医补肾益精的常用方。早在《摄生众妙方》中就有记录,有添精益髓、补肾固精的功效,具有“古今第一种子方”的美誉。由菟丝子、覆盆子、枸杞子、五味子、车前子组成,经君臣佐使配伍后具有补中有泻、涩中有利、补阴扶阳的特点,主要用于阳痿不育、遗精早泄等症。《中国药典》2020年版中五子衍宗丸由炒菟丝子、覆盆子、蒸五味子、枸杞子、盐车前子组成,仅车前子使用的是盐制后的饮片。为进一步研究药物盐制后组方五子衍宗丸化学成分及药效的差异,本文在课题组前期研究的基础上,通过研究盐制对五子衍宗丸中化学成分及补肾益精作用的影响,进一步探讨药物盐制后组方五子衍宗丸的科学性,为中药炮制理论“盐制入肾,肾主生殖”及五子衍宗丸中如何选用药物炮制品提供一定的依据。目的本研究以临床补肾益精常用方——五子衍宗丸为基础,结合前期研究成果,以不同炮制品组方的五子衍宗丸为研究对象,研究盐制对五子衍宗丸主要化学成分及其含量的影响,结合中药炮制“盐制入肾,肾主生殖”理论及五子衍宗丸补肾益精作用,通过制备中医肾精亏虚动物模型,考察不同炮制品组方五子衍宗丸对肾精亏虚模型大鼠生精细胞凋亡、抗氧化指标等方面的影响;从药物炮制前后组方五子衍宗丸化学成分变化及药效差异方面出发,探讨药物盐制后组方五子衍宗丸的科学性,有利于阐释中药炮制“盐制入肾,肾主生殖”理论的科学内涵,为临床五子衍宗丸中炮制品的选用提供依据。方法在课题组前期的研究基础上,将枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子、五味子生品及其炮制品,组成五子衍宗丸全生品组、药典组和盐制组,采用“文献研究-化学成分-药效对比”的研究思路,借助高效液相、流式细胞术、免疫组织化学法(IHC)、蛋白免疫印迹法(Western blot)等方法,探讨盐制对五子衍宗丸化学成分及药效的影响,阐明药物盐制后组方五子衍宗丸的科学性。主要研究内容包括以下几方面:1.查阅近年来发表的有关研究五子衍宗丸所含药物的文献,通过整理五子衍宗丸中所含药物在炮制、化学成分分析及药理药效以及临证运用等方面的情况,结合课题组前期研究结果,为本课题研究药物盐制前后组方五子衍宗丸化学成分、药效差异提供相关支持。2.按照中国药典四部中收载的浸出物测定法,考察不同浸提方法及不同浸提溶剂对复方浸出物含量的影响,优化提取条件,测定五子衍宗丸全生品组、药典组、盐制组浸出物含量,比较药物盐制后组方五子衍宗丸对复方浸出物含量的影响。3.建立五子衍宗丸全生品组、药典组、盐制组HPLC指纹图谱,对共有峰归属性进行研究,结合方差分析、CA、PCA、PLS-DA对比研究不同炮制品组方五子衍宗丸对复方化学成分的影响,并对三个组别样品中主要化学成分进行含量测定,探讨炮制对五子衍宗丸主要化学成分的影响,为药物盐制后组方五子衍宗丸的科学性提供依据。4.建立中医肾精亏虚证候模型,比较不同炮制品组方五子衍宗丸对复方补肾益精作用的影响。(1)根据五子衍宗丸补肾益精作用,通过测定生精细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白的表达,探讨不同炮制品组方五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠生精细胞凋亡的影响,为五子衍宗丸中药物盐制的科学性和中药炮制“盐制入肾,肾主生殖”提供依据。(2)通过制备肾精亏虚模型,比较药物炮制前后组方五子衍宗丸抗氧化作用的差异,探讨不同炮制品组方五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠抗氧化能力的影响,为五子衍宗丸盐制后组方的科学性提供依据。结果1.五子衍宗丸中药物炮制后组方浸出物的含量明显增加,增加程度为盐制组>药典组。2.五子衍宗丸全生品组、药典组、盐制组指纹图谱相似度均在0.9以上,标定了18个共有色谱峰,并指认出鞣花酸、金丝桃苷、绿原酸、异槲皮苷、毛蕊花糖苷、紫云英苷、槲皮素、五味子醇甲、山柰酚9个成分,归属性分析表明峰2来源于枸杞子,峰3、5、7、9、11、12、14、15、17来源于菟丝子,峰6、8、10、16来源于覆盆子,峰13来源于车前子,峰18来源于五味子,峰1来源于覆盆子和五味子,峰4来源于枸杞子和覆盆子。药物炮制后组方五子衍宗丸未出现色谱峰的增加,方差分析结果表明药物炮制后组方五子衍宗丸峰面积发生变化;通过CA将五子衍宗丸全生品组、药典组、盐制组聚为3类,PCA筛选出4个主成分,PLS-DA标记出9个差异性成分。3.药典组及盐制组绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、毛蕊花糖苷含量增加,紫云英苷、山柰酚、五味子醇甲含量减少;盐制组鞣花酸含量增加,但药典组鞣花酸含量减少。4.对比空白组,模型组生精细胞总凋亡率显著升高,睾丸中Bax表达显著增加、Bcl-2表达显著减少;对比模型组,各给药组均能降低生精细胞总凋亡率,调节Bcl-2和Bax表达,药典组与盐制组的作用显著优于全生品组,盐制组有优于药典组的趋势。5.对比空白组,模型组大鼠肾脏及附睾中SOD活力降低,MDA含量升高;对比模型组,各给药组均能增加肾脏及附睾中SO

关键词：五子衍宗丸盐制化学成分肾精亏虚生精细胞

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玻色-爱因斯坦凝聚体的光学色散关系

华东师范大学学报（自然科学版） 2020年第2期 76-82页

作者：廖宇娇董光炯华东师范大学精密光谱科学与技术国家重点实验室上海200062

最近的研究表明,玻色-爱因斯坦凝聚体(Bose-Einstein Condensate,BEC)可作为量子电介质材料对光场产生反作用,实现光场-物质波的协同操控.然而BEC的色散性质还没有被研究.为此,解析得到了BEC对大失谐光的一阶色散和二阶色散的计算公式.... 详细信息

最近的研究表明,玻色-爱因斯坦凝聚体(Bose-Einstein Condensate,BEC)可作为量子电介质材料对光场产生反作用,实现光场-物质波的协同操控.然而BEC的色散性质还没有被研究.为此,解析得到了BEC对大失谐光的一阶色散和二阶色散的计算公式.数值计算表明,BEC的折射率以及二阶色散系数与红、蓝失谐的性质有关:在红失谐时,折射率大于1,且二阶色散是正常色散;在蓝失谐时,折射率小于1,二阶色散为反常色散.二阶色散系数会随着失谐量的改变而剧烈变化,当失谐量在GHz数量级时,表现为强色散介质.一阶色散和红、蓝失谐的性质关系不大,随着失谐量的增加,一阶色散减小,相应的群速度增加.因此,对于超短脉冲光,BEC是一种新型的色散介质.

关键词：玻色-爱因斯坦凝聚色散群速度色散

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五子衍宗丸补肾涩精有效部位的谱效关系

中成药 2020年第8期42卷 2150-2153页

作者：张希廖宇娇杨卓陈志敏李文兵胡昌江成都中医药大学药学院四川成都611137 成都市妇女儿童中心医院药学部四川成都611137 四川新绿色药业科技发展有限公司四川成都611930

目的研究五子衍宗丸(枸杞子、菟丝子、覆盆子等)补肾涩精有效部位的谱效关系。方法石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、水依次提取药液浸膏后,考察各提取物对雷公藤多苷致肾精亏虚证大鼠FSH、T、NO水平的影响以筛选有效部位。建立10批样品... 详细信息

目的研究五子衍宗丸(枸杞子、菟丝子、覆盆子等)补肾涩精有效部位的谱效关系。方法石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、水依次提取药液浸膏后,考察各提取物对雷公藤多苷致肾精亏虚证大鼠FSH、T、NO水平的影响以筛选有效部位。建立10批样品HPLC指纹图谱,通过灰色关联度考察其与补肾涩精药效的关系。结果与模型组比较,水饱和正丁醇提取物组NO、T水平升高(P<0.05),FSH水平降低(P<0.05),故以其为有效部位。该部位所含成分对补肾涩精作用贡献度最大的为7号峰(绿原酸),其次为14号峰(槲皮素)、16号峰、13号峰。结论五子衍宗丸补肾涩精药效成分主要集中在水饱和正丁醇部位(即大极性成分),可为进一步研究其物质基础提供参考。

关键词：五子衍宗丸 HPLC指纹图谱补肾涩精有效部位灰色关联度

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不同炮制方法对川芎中化学成分的影响研究

中国中药杂志 2021年第2期46卷 374-379页

作者：廖宇娇敖明月李星陈志敏胡昌江成都中医药大学药学院四川成都611137

通过测定川芎不同炮制品中浸出物的含量及绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯的含量,研究不同炮制方法对川芎醇溶性浸出物及6种成分含量的影响。浸出物的测定按照2020年版《中国药典》四部2201项下醇... 详细信息

通过测定川芎不同炮制品中浸出物的含量及绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯的含量,研究不同炮制方法对川芎醇溶性浸出物及6种成分含量的影响。浸出物的测定按照2020年版《中国药典》四部2201项下醇溶性浸出物测定法进行;含量测定采用Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.5%醋酸溶液(B),梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-1,检测波长285 nm,进样量10μL。结果表明,与生川芎相比,川芎炮制品的浸出物含量均明显增加,增加程度为蜜川芎>酒川芎>芷川芎>茶川芎。高效液相测定方法便捷、可靠,川芎及其炮制品中绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯线性关系良好,精密度、重复性、稳定性及加样回收率均良好。川芎炮制前后共有色谱峰15个,指认了其中8个,与炮制前相比,川芎蜜炙、酒炙后新增2个色谱峰,白芷提取物炮制后新增了4个色谱峰;酒川芎中绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、藁本内酯的含量均减少;蜜川芎、茶川芎、芷川芎中除阿魏酸含量增加外,其余5种成分含量均减少。黄酒、蜂蜜、茶叶及白芷提取物均能促进川芎中化学成分的溶出,增加浸出物的含量;川芎不同炮制品中6种成分含量的变化可为研究川芎不同炮制品化学成分、药效变化提供一定的依据。

关键词：川芎炮制浸出物化学成分含量

五子衍宗丸中所含药物盐制后组方对大鼠生精细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2021年第10期27卷 1-7页

作者：廖宇娇张希敖明月胡昌江陈志敏许润春成都中医药大学药学院成都611137

目的:观察由不同炮制品组方的五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨其对生精细胞的保护作用。方法:将SD大鼠随机分成空白组、模型组、全生品组、药典组、盐制组,每组8只。通过给予雷公藤多苷片复制肾精亏虚模型(剂量20 mg·... 详细信息

目的:观察由不同炮制品组方的五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨其对生精细胞的保护作用。方法:将SD大鼠随机分成空白组、模型组、全生品组、药典组、盐制组,每组8只。通过给予雷公藤多苷片复制肾精亏虚模型(剂量20 mg·kg^(-1)),利用流式细胞术(FCM)分析睾丸中生精细胞凋亡情况,运用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测睾丸中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。采用高效液相色谱法(HPLC)比较由不同炮制品组方的五子衍宗丸中8个成分(绿原酸、鞣花酸、金丝桃苷、异槲皮苷、毛蕊花糖苷、紫云英苷、山柰酚、五味子醇甲)的含量,流动相乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~5 min,5%~15%A;5~10 min,15%~17%A;10~25 min,17%A;25~35 min,17%~26%A,35~60 min,26%~56%A),检测波长254 nm。结果:与模型组比较,各给药组对生精细胞总凋亡率,Bcl-2和Bax表达均有改善作用,且药典组与盐制组有显著作用(P<0.01);同时,药典组与盐制组的改善作用明显优于全生品组(P<0.05)。药物炮制后组方的五子衍宗丸中绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、毛蕊花糖苷含量增加;盐制组鞣花酸含量增加,但药典组鞣花酸含量减少;盐制组样品中毛蕊花糖苷、紫云英苷、山柰酚、五味子醇甲的含量高于药典组样品。结论:五子衍宗丸可能通过抑制Bax和促进Bcl-2的蛋白表达来减少大鼠睾丸中生精细胞的凋亡,发挥其补肾益精作用;组方药物炮制后抗生精细胞凋亡作用增强可能与炮制后化学成分含量的变化有关。

关键词：五子衍宗丸盐制肾精亏虚生精细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) Bcl-2相关X蛋白(Bax) 化学成分

基于指纹图谱及化学模式识别研究盐制对五子衍宗丸化学成分的影响

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中草药 2021年第11期52卷 3224-3233页

作者：廖宇娇敖明月彭颖胡昌江陈志敏许润春成都中医药大学药学院四川成都611137

目的建立不同炮制品组方五子衍宗丸(Wuzi Yanzong Pills,WYP)的HPLC指纹图谱,研究盐制对WYP化学成分的影响。方法采用HPLC法建立不同炮制品组方WYP的指纹图谱,并进行相似度评价,采用方差分析、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)与偏最小二... 详细信息

目的建立不同炮制品组方五子衍宗丸(Wuzi Yanzong Pills,WYP)的HPLC指纹图谱,研究盐制对WYP化学成分的影响。方法采用HPLC法建立不同炮制品组方WYP的指纹图谱,并进行相似度评价,采用方差分析、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)与偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对结果进行评价。结果WYP全生品组、药典组、盐制组指纹图谱相似度均大于0.9,标定了18个共有峰,利用对照品指认出绿原酸(5号峰)、鞣花酸(10号峰)、金丝桃苷(11号峰)、异槲皮苷(12号峰)、毛蕊花糖苷(13号峰)、紫云英苷(14号峰)、槲皮素(15号峰)、山柰酚(17号峰)、五味子醇甲(18号峰)9个成分,归属性分析表明峰2来源于枸杞子,峰3、5、7、9、11、12、14、15、17来源于菟丝子,峰6、8、10、16来源于覆盆子,峰13来源于车前子,峰18来源于五味子,峰1是覆盆子和五味子共有成分,峰4是枸杞子和覆盆子共有成分。药物炮制后组方WYP未出现色谱峰的增加,但峰面积发生变化。通过CA将WYP全生品组、药典组、盐制组聚为3类,PCA筛选出4个主成分,PLS-DA标记出峰1、13(毛蕊花糖苷)、10(鞣花酸)、7、4、11(金丝桃苷)、12(异槲皮苷)、3、5(绿原酸)共9个差异性成分;绿原酸、鞣花酸、金丝桃苷、异槲皮苷、山柰酚、五味子醇甲及峰1、3、4、7、8共11个成分可能是不同炮制品组方WYP的差异标志物。结论建立的指纹图谱测定方法稳定、可靠,炮制后组方WYP的化学成分发生变化,结果可为WYP中如何选用药物炮制品提供一定的依据。

关键词：五子衍宗丸盐制指纹图谱化学模式识别聚类分析主成分分析偏最小二乘法-判别分析绿原酸鞣花酸金丝桃苷异槲皮苷毛蕊花糖苷紫云英苷槲皮素山柰酚五味子醇甲枸杞子菟丝子覆盆子车前子五味子

覆盆子盐制前后对肾阳虚多尿大鼠肾脏改善作用研究

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中华中医药学刊 2021年第2期39卷 140-142,I0030页

作者：张希廖宇娇杨卓陈志敏胡昌江昆明市中医医院云南昆明611137 成都中医药大学药学院四川成都611137

目的比较覆盆子盐制前后对肾阳虚多尿模型大鼠血清中CAMP和CGMP的影响及其对肾脏病理变化的改善作用。方法采用腺嘌呤200 mg·kg^(-1)复制肾阳虚多尿大鼠模型,比较覆盆子盐制前后对大鼠血清cAMP和cGMP及肾脏病理变化的影响。结果与正常... 详细信息

目的比较覆盆子盐制前后对肾阳虚多尿模型大鼠血清中CAMP和CGMP的影响及其对肾脏病理变化的改善作用。方法采用腺嘌呤200 mg·kg^(-1)复制肾阳虚多尿大鼠模型,比较覆盆子盐制前后对大鼠血清cAMP和cGMP及肾脏病理变化的影响。结果与正常组相比,模型组的cAMP显著下降(P<0.05),cGMP显著升高(P<0.01),覆盆子盐制高剂量组与模型组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);且与生品组比较,盐制覆盆子组对升高cAMP,降低cGMP的作用显著增强。同时,模型组大鼠肾脏可见肾小体数量明显减少,肾小管管腔扩大等病理改变。生品低、高剂量组、桂附地黄丸组、盐制覆盆子低高剂量组大鼠肾脏与模型组相比均有不同程度的改善。结论覆盆子对肾阳虚多尿模型大鼠的cAMP及cGMP有一定的调节作用,同时对肾脏病理有一定的改善作用,且以盐制覆盆子效果较佳。

关键词：覆盆子盐制肾阳虚多尿 cAMP cGMP

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覆盆子盐制前后化学成分及药效学变化研究

时珍国医国药 2020年第1期31卷 82-84页

作者：张希廖宇娇杨卓陈志敏李文兵胡昌江成都中医药大学四川成都611137 成都市妇女儿童中心医院药学部四川成都611137 四川新绿色药业科技发展有限公司四川成都611930

目的比较覆盆子盐制前后化学成分及药效变化,初步探讨覆盆子盐制增强补肾固涩的作用机制。方法采用HPLC法测定覆盆子盐制前后鞣花酸及黄酮含量的变化;利用腺嘌呤复制肾阳虚多尿大鼠模型,并检测覆盆子不同炮制品对其醛固酮(ALD)、尿量和... 详细信息

目的比较覆盆子盐制前后化学成分及药效变化,初步探讨覆盆子盐制增强补肾固涩的作用机制。方法采用HPLC法测定覆盆子盐制前后鞣花酸及黄酮含量的变化;利用腺嘌呤复制肾阳虚多尿大鼠模型,并检测覆盆子不同炮制品对其醛固酮(ALD)、尿量和脏器指数的影响;采用煎煮法比较炮制对浸出率的影响。结果比较HPLC图谱发现覆盆子经盐制后,鞣花酸含量增加,并有共有峰吸收增强,且新增一个化合物(峰S);比较炮制前后浸出物的出膏率发现,盐制后的出膏率增加;与模型组比较,盐覆盆子能显著增加模型大鼠的醛固酮(ALD)(P<0.05),覆盆子生品和盐制品均有显著的缩尿作用(P<0.05),且盐制品的效果更佳(P<0.01),盐覆盆子组的肾和睾丸指数与模型组比较均具有显著改善作用(P<0.05)。结论覆盆子盐制后能增加鞣花酸含量,且峰数量增加;并对腺嘌呤所致肾阳虚多尿模型大鼠的醛固酮(ALD)、尿量和肾脏指数有显著改善作用。

关键词：覆盆子盐制鞣花酸肾阳虚醛固酮

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五子衍宗丸中各药物的炮制方法及研究现状

亚太传统医药 2019年第9期15卷 195-198页

作者：张希廖宇娇陈志敏杨卓李文兵胡昌江成都中医药大学药学院四川成都611137 成都市妇女儿童中心医院药学部四川成都611137 四川新绿色药业科技发展有限公司四川成都611930

辨证施治、饮片炮制、复方入药是中医临证用药的三大特色。五子衍宗丸作为中医补肾益精的经典名方,由枸杞子、炒菟丝子、覆盆子、蒸五味子、盐车前子组成。为了体现饮片炮制复方入药的中医药理论,通过查阅五子衍宗丸中五味药物的相关文... 详细信息

辨证施治、饮片炮制、复方入药是中医临证用药的三大特色。五子衍宗丸作为中医补肾益精的经典名方,由枸杞子、炒菟丝子、覆盆子、蒸五味子、盐车前子组成。为了体现饮片炮制复方入药的中医药理论,通过查阅五子衍宗丸中五味药物的相关文献,对枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、车前子的炮制研究进展、化学成分和药理药效的研究进展进行了综述,并对现代饮片炮制入药方法进行了归纳总结和理论提升,以期为临床辨证施治、合理利用炮制饮片提供参考。

关键词：五子衍宗丸炮制辨证施治复方入药