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2型糖尿病合并肝纤维化大鼠模型构建的初探

中国实验动物学报 2024年

作者：何宏星廖乃顺福建医科大学实验动物中心福建医科大学孟超肝胆医院福建省孟超肝胆技术联合创新重点实验室

目的采用高脂高糖膳食联合四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)与链脲佐菌素诱导法构建2型糖尿病合并肝纤维化动物模型。方法 SD大鼠按体重随机分为肝纤维化组、糖尿病合并肝纤维化组及正常对照组，每组10只。肝纤维化组、糖尿病合... 详细信息

目的采用高脂高糖膳食联合四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)与链脲佐菌素诱导法构建2型糖尿病合并肝纤维化动物模型。方法 SD大鼠按体重随机分为肝纤维化组、糖尿病合并肝纤维化组及正常对照组，每组10只。肝纤维化组、糖尿病合并肝纤维化组大鼠饲喂高脂高糖饲料4周后，肝纤维化组按体重5 mL/kg腹腔注射20%四氯化碳(CCl4，1次/周)诱导肝纤维化模型，糖尿病合并肝纤维化组大鼠分别按体重5 mL/kg腹腔注射20% CCl4、25 mg/kg链脲佐菌素（1次/周），两组动物继续高脂高糖喂养4周。尾静脉取血检测空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）含量。酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血液中胰岛素（insulin，INS）与糖化血红蛋白（hemoglobin A1c，HbA1c）含量。血清生化分析检测谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、总胆红素（total bilirubin，Tbil）、透明质酸（hyaluronic acid，HA）水平。肝组织匀浆、生化分析羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量。苏木素-伊红（hematoxylin-eosin staining，HE）染色、Masson染色检查肝组织形态改变。结果与正常对照组与肝纤维化组比较，糖尿病合并肝纤维化组大鼠FBG、HbA1c含量和胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR）显著升高，INS含量显著减少。与正常对照组比较，肝纤维化组、糖尿病合并肝纤维化组血清的ALT、AST、Tbil和HA水平，肝组织的HYP含量显著增加，且呈炎症细胞浸润、纤维化增生病变，肝组织炎症分级在G1级、G2级，纤维化分期主要在S2期。结论高脂高糖膳食联合CCl4与链脲佐菌素诱导法可构建2型糖尿病合并肝纤维化大鼠模型。

关键词： 2型糖尿病肝纤维化糖尿病合并肝纤维化大鼠

细胞色素氧化酶P450家族在中药毒性研究中的应用进展

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中国药理学与毒理学杂志 2012年第3期26卷 402-405页

作者：廖乃顺陈文列福建中医药大学中西医结合研究院中药药理国家中医药三级科研实验室福建福州350122

细胞色素氧化酶P450(CYP)是最重要的药物代谢酶,多种中药能抑制或诱导CYP3A,CYP2C等亚型活性,而影响中药代谢,其中抑制作用是药物不良反应的主要原因;CYP1A2和CYP2E1等参与了中药前毒物的活化引起毒性反应。CYP参与中药代谢性相互作用,... 详细信息

细胞色素氧化酶P450(CYP)是最重要的药物代谢酶,多种中药能抑制或诱导CYP3A,CYP2C等亚型活性,而影响中药代谢,其中抑制作用是药物不良反应的主要原因;CYP1A2和CYP2E1等参与了中药前毒物的活化引起毒性反应。CYP参与中药代谢性相互作用,故可通过对CYP抑制或诱导作用的分析,研究中药配伍减毒作用或配伍禁忌的毒性(增毒)作用;应重视研究中西药合用引起不良反应的CYP作用。本文综述了CYP在中药毒性研究中的应用概况,进一步展望CYP的应用前景,以期对中药毒性研究提供新思路。

关键词：细胞色素P450酶系统中草药毒性作用

基于生物正交点击化学修饰吲哚菁绿用于脂肪间充质干细胞活体示踪的实验研究

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中国实验动物学报 2023年第8期31卷 993-998页

作者：何宏星廖乃顺福建医科大学实验动物中心福州350004 福建医科大学孟超肝胆医院福建省孟超肝胆技术联合创新重点实验室福州350025

目的探究生物正交点击化学修饰可否用于脂肪间充质干细胞(ADSC)的吲哚菁绿(ICG)标记及活体示踪研究。方法收集小鼠脂肪组织进行ADSC的分离与培养,分别添加Ac4ManNAz、DBCO-ICG进行生物正交点击化学反应,评估该方法对ADSC细胞活性的影响... 详细信息

目的探究生物正交点击化学修饰可否用于脂肪间充质干细胞(ADSC)的吲哚菁绿(ICG)标记及活体示踪研究。方法收集小鼠脂肪组织进行ADSC的分离与培养,分别添加Ac4ManNAz、DBCO-ICG进行生物正交点击化学反应,评估该方法对ADSC细胞活性的影响,并利用共聚焦显微镜观察ADSC的ICG标记情况;将标记ICG的ADSC移植到急性肝损伤小鼠体内,利用近红外二区荧光成像开展ADSC的活体示踪研究,收集肝组织进行ADSC归巢性分析;最后,评估生物正交点击化学修饰对ADSC移植治疗急性肝损伤疗效的影响。结果生物正交点击化学可将ICG探针成功地修饰于ADSC细胞内,且不影响ADSC的细胞活性;标记ICG的ADSC移植到体内后主要分布、定位在肝组织内,说明ADSC具有肝向归巢性;生物正交点击化学修饰不影响ADSC改善急性肝损伤小鼠肝功能、减少肝细胞坏死的疗效。结论生物正交点击化学可用于ADSC的ICG探针标记及活体示踪研究。

关键词：生物正交点击化学吲哚菁绿脂肪间充质干细胞活体示踪

基于TLR4/JNK/NF-κB通路探讨凉血解毒化瘀方治疗慢加急肝衰竭的作用机制

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中国实验动物学报 2024年第8期32卷 1032-1038页

作者：刘政芳周文李振挺李芹廖乃顺福建医科大学孟超肝胆医院福州350028 福建省孟超肝胆技术联合创新重点实验室福州350028

目的探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。方法采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨... 详细信息

目的探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。方法采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合诱导法构建慢加急肝衰竭小鼠模型;生化分析检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)肝功能指标。肝组织病理学检查。荧光定量PCR检测肝组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、TLR4的mRNA表达。CCK8筛选凉血解毒化瘀方对Raw264.7细胞的干预浓度,酶联免疫吸附法检测巨噬细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量。蛋白免疫印迹法检测TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白(TLR4、NF-κB、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、p-JNK、JNK)的表达。结果与ACLF模型组比较,凉血解毒化瘀方可降低血清ALT、AST、TBIL含量,减少肝组织细胞坏死、纤维化、炎症细胞浸润程度,及肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4的mRNA表达,并降低肝组织TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达。细胞实验进一步发现凉血解毒化瘀方可抑制巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,下调TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达。结论凉血解毒化瘀方能有效改善ALCF小鼠肝功能、抑制其炎症反应的疗效,其机制与其下调TLR4/JNK/NF-κB通路有关。

关键词：凉血解毒化瘀方慢加急性肝功能衰竭肝功能炎症反应 TLR4

细胞色素氧化酶P450家族在中药毒性研究中的应用进展

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细胞色素氧化酶P450家族在中药毒性研究中的应用进展

第十五届中国神经精神药理学学术会议

作者：廖乃顺陈文列福建中医药大学中西医结合研究院中药药理国家中医药三级科研实验室

关键词：细胞色素P450酶系统中草药毒性作用

来源： cnki会议评论

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成骨细胞与破骨细胞共培养及其应用研究进展

中国骨伤 2013年第4期26卷 349-353页

作者：廖乃顺陈文列黄云梅陈赛楠福建中医药大学福建福州350122 福建中西医结合研究院福建福州350122

成骨细胞与破骨细胞并非孤立存在,两种细胞存在直接接触、分泌旁分泌因子、细胞与骨基质3种相互作用。成骨细胞与破骨细胞共培养技术有直接接触式、间接接触式2类方式,它能最大程度地模拟体内微环境,有利于研究两细胞间的相互作用,探讨... 详细信息

成骨细胞与破骨细胞并非孤立存在,两种细胞存在直接接触、分泌旁分泌因子、细胞与骨基质3种相互作用。成骨细胞与破骨细胞共培养技术有直接接触式、间接接触式2类方式,它能最大程度地模拟体内微环境,有利于研究两细胞间的相互作用,探讨两者失衡在骨质疏松症等骨代谢疾病形成中的作用;细胞共培养应根据病理状态下两细胞的比例选用种属来源一致的细胞。目前该技术主要用于探讨药物防治骨质疏松症的作用机制,已有淫羊藿、三七、补骨脂、雷奈酸锶等既促进成骨细胞骨形成,又抑制破骨细胞骨吸收活性的双重药理作用研究等报道。成骨细胞与破骨细胞共培养的一个新的应用方向,将是应用于软骨下骨重建功能活动的探讨以及中西药干预骨性关节炎的研究。

关键词：成骨细胞破骨细胞共培养体系骨重建药理作用

草珊瑚植物叶、茎显微结构与黄酮组织化学定位研究

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中国中药杂志 2012年第4期37卷 438-441页

作者：葛楚源陈文列李钻芳廖乃顺黄云梅梁一池刘献祥福建中医药大学福建中西医结合研究院福建福州350108

目的:以药用植物草珊瑚叶、茎为材料,研究黄酮类物质在其中的分布。方法:在观察草珊瑚植物叶、茎显微结构的基础上,用NaOH显色和醋酸镁甲醇液显色的组织化学方法进行黄酮类化合物定位。结果:黄酮类化合物在叶中主要分布在表皮和位于上... 详细信息

目的:以药用植物草珊瑚叶、茎为材料,研究黄酮类物质在其中的分布。方法:在观察草珊瑚植物叶、茎显微结构的基础上,用NaOH显色和醋酸镁甲醇液显色的组织化学方法进行黄酮类化合物定位。结果:黄酮类化合物在叶中主要分布在表皮和位于上下表皮内的厚角组织、类栅栏组织、维管束、分泌细胞中;在茎中主要分布在表皮、厚角组织、分泌细胞、韧皮部。结论:黄酮类化合物的NaOH显色法,相对其他以醇类为显色剂溶剂的荧光显色法是较为简便可行、定性迅速的组织化学鉴定方法。叶中黄酮含量高于茎部。因此,若以总黄酮为草珊瑚有效成分,可以只采收叶,保留其根部和茎部,以达到可持续性地有效利用中药资源的目的。

关键词：草珊瑚显微结构黄酮类化合物组织化学定位显微鉴定

凉血解毒化瘀方预防慢性肝损伤小鼠向急性肝衰竭转化及其对TLR4的调控作用

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福建中医药 2024年第7期55卷 7-10,16页

作者：刘政芳余绍雄廖乃顺福建医科大学孟超肝胆医院福建福州350028 福建省孟超肝胆技术联合创新重点实验室福建福州350028

目的探讨凉血解毒化瘀方对慢性肝损伤小鼠向急性肝衰竭转化的预防效果及其对Toll样受体4(TLR4)的调控作用。方法取6周龄SPF级雄性BALB/c小鼠60只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。除正常组... 详细信息

目的探讨凉血解毒化瘀方对慢性肝损伤小鼠向急性肝衰竭转化的预防效果及其对Toll样受体4(TLR4)的调控作用。方法取6周龄SPF级雄性BALB/c小鼠60只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。除正常组外,其余4组按体质量5 mL/kg腹腔注射20%四氯化碳(CCl4)以构建慢性肝损伤小鼠模型,正常组腹腔注射等剂量生理盐水,2次/周,连续8周。经组织病理学与血清生化分析证实慢性肝损伤造模成功后,低、中、高剂量组按体质量10 mL/(kg·d)分别灌胃0.75、1.50、3.00 g/mL凉血解毒化瘀方药液,正常组、模型组灌胃等剂量生理盐水,连续灌胃28 d后,模型组与各剂量组分别按体质量5 mL/kg一次性腹腔注射2μg/mL脂多糖(LPS)和0.2 g/mL D-氨基半乳糖(D-GalN)以诱导慢性肝损伤小鼠向急性肝衰竭转化,正常组腹腔注射等剂量生理盐水。3 d后采用生化分析法检测5组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)含量,HE染色观察5组小鼠肝组织病理形态变化,qPCR检测5组小鼠肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、Toll样受体4(TLR4)mRNA转录水平,采用免疫荧光染色检测5组小鼠肝组织TLR4蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组血清ALT、AST、TBIL含量显著提高(P<0.05),HE染色结果显示肝组织出现肝细胞坏死,伴随大量纤维化改变及炎症细胞浸润,肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4 mRNA转录水平升高(P<0.05),肝组织TLR4蛋白表达水平增高。与模型组比较,各剂量组血清ALT、AST、TBIL含量降低(P<0.05),HE染色结果显示肝细胞坏死、纤维化,炎症细胞浸润程度减少,肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4 mRNA转录水平降低(P<0.05),肝组织TLR4蛋白表达量减少。与低剂量组比较,中、高剂量组血清ALT、AST水平降低更明显(P<0.05),HE染色结果显示肝细胞坏死、纤维化,炎症细胞浸润程度更轻,肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4 mRNA转录水平降低更明显(P<0.05),肝组织TLR4蛋白表达水平减少更明显。结论凉血解毒化瘀方可用于预防慢性肝损伤小鼠向急性肝衰竭转化,并具有抗炎作用,其机制可能通过抑制TLR4高表达而实现的。

关键词：慢性肝损伤急性肝衰竭凉血解毒化瘀方炎症反应 TLR4

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OPG/RANKL/RANK系统在调控骨性关节炎软骨下骨骨重建中的作用

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骨科 2013年第4期4卷 214-217页

作者：陈赛楠廖乃顺陈文列黄云梅福建中医药大学福建中西医结合研究院福州350122 国家中医药三级科研实验室-中药药理(细胞结构与功能)实验室福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福州350122

目的对OPG/RANKL/RANK系统调节骨重建的研究进展进行综述,为调控骨性关节炎骨重建的治疗提供研究依据。方法以"骨性关节炎"、"软骨下骨"、"骨重建"、"osteoarthritis"、"subchondral bone"、"remodeling"、"OPG/RANKL"为检索词,检索Pub... 详细信息

目的对OPG/RANKL/RANK系统调节骨重建的研究进展进行综述,为调控骨性关节炎骨重建的治疗提供研究依据。方法以"骨性关节炎"、"软骨下骨"、"骨重建"、"osteoarthritis"、"subchondral bone"、"remodeling"、"OPG/RANKL"为检索词,检索PubMed数据库、ELSEVIER数据库、万方数据库、中国知网数据库、维普数据库等文献,排除重复或类似的同一研究,纳入29篇文献进行总结。结果资料显示在骨组织的动态骨重建中,OPG/RANKL/RANK系统是调控骨吸收与骨形成最重要的分子系统之一。软骨下骨重建失衡、重建模式异常在骨性关节炎发生发展中起重要作用,实验证明双膦酸盐类等骨吸收抑制剂、锶制剂等骨形成促进剂及中药,可通过调控OPG/RANKL/RANK系统,来调整骨重建速率,抑制骨吸收,而在延缓骨性关节炎病理进程中起防治作用。结论 OPG/RANKL/RANK系统能调控软骨下骨骨重建,可成为研究治疗早中期骨性关节炎的新靶点,应用该系统探讨中医药防治骨性关节炎的作用机制,将为今后研究方向之一。

关键词：核因子κB受体活化因子骨保护素骨关节炎关节成形术软骨下骨重建