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脐血单个核细胞和CD34^+细胞体外扩增造血干/祖细胞

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华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第6期28卷 592-596页

作者：王斌康自珍迟占有谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

考察了脐血单个核细胞 ( MNC)和 CD3 4 +富集细胞在 SCF+IL- 3 +IL- 6 +FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性。实验发现 :CD3 4 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,通过 3周培养总细胞扩增了 ( 883 .2± 3 2 2 .4)倍 ,而 MNC仅扩增了 ( 5 3... 详细信息

考察了脐血单个核细胞 ( MNC)和 CD3 4 +富集细胞在 SCF+IL- 3 +IL- 6 +FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性。实验发现 :CD3 4 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,通过 3周培养总细胞扩增了 ( 883 .2± 3 2 2 .4)倍 ,而 MNC仅扩增了 ( 5 3 .3± 6 .2 )倍。对比细胞集落生成和 CD3 4 +细胞的扩增发现 ,MNC的集落密度由最初的 ( 2 70 .9± 5 4 .9) CFCs/ 1 0 5cells上升至第 7天的( 1 496 .3± 41 7.7) CFCs/ 1 0 5cells,CD3 4 +细胞百分比则由最初的 ( 0 .99± 0 .1 8) %上升至第 7天的( 4.4± 1 .9) % ,而 CD3 4 +富集细胞在培养过程中 ,虽然集落总数和 CD3 4 +细胞总数始终呈上升趋势 ,但是其集落密度和 CD3 4 + 细胞百分比则始终呈下降趋势。在两种起始细胞培养中 ,CFU- GM(粒细胞 -巨噬细胞集落形成单位 )在集落中的含量逐渐增加 ,BFU- E(爆式红细胞集落形成单位 )含量则逐渐降低。在 3周的短期培养中 ,MNC可以得到更多的集落形成细胞 ( CFC)和 CD3 4

关键词：造血干/祖细胞脐血 MNC CD34^+细胞体外扩增

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GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成

华东理工大学学报（自然科学版） 2003年第4期29卷 363-366页

作者：蔡海波康自珍孙淑惠谭文松张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 复旦大学医学院上海200032

在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多... 详细信息

在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多倍体的作用。结果发现:在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加GM-CSF有利于总细胞的扩增,对巨核细胞的纯度没有显著的影响。体外培养14d后,培养物巨核细胞中多倍体(≥8N)巨核细胞比例明显提高,从中可以看出GM-CSF能促进巨核细胞多倍体的形成。

关键词： CD34^+细胞 CD41^+细胞巨核细胞多倍体

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从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第6期28卷 588-591页

作者：徐莉康自珍蔡海波谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪... 详细信息

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激

关键词：脐血树突状细胞单个核细胞定向诱导细胞表面标志

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从脐血单个核细胞定向诱导巨核细胞的生成

华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第5期28卷 492-495页

作者：蔡海波康自珍徐莉谭文松张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

采用 SCF、TPO、IL- 3、IL- 6、IL- 1细胞因子 ,从脐血单个核细胞定向诱导巨核细胞的形成。比较了 SCF+ TPO+ IL- 1、SCF+ TPO+ IL- 3、SCF+ TPO+ IL- 63种细胞因子组合对刺激巨核细胞生成的作用 ,经体外培养 8d后 ,CD41 + 细胞占培养... 详细信息

采用 SCF、TPO、IL- 3、IL- 6、IL- 1细胞因子 ,从脐血单个核细胞定向诱导巨核细胞的形成。比较了 SCF+ TPO+ IL- 1、SCF+ TPO+ IL- 3、SCF+ TPO+ IL- 63种细胞因子组合对刺激巨核细胞生成的作用 ,经体外培养 8d后 ,CD41 + 细胞占培养物的比例分别达到 ( 5 .64± 0 .77) %、( 5 .73± 1 .2 4 ) %和 ( 2 0 .1± 2 .5 3) % ;每 1 0 4个细胞可形成巨核祖细胞集落形成单位 ( CFU- MK)为( 1 3.7± 5 .7)个、( 1 5 .0± 3.6)个和 ( 93.7± 1 6.0 )个。在 SCF+ TPO+ IL- 6体系中增加 IL- 6的浓度 ,可提高培养液中 CD41 + 细胞的纯度。当 IL- 6的浓度从 1 0μg/L增加到 5 0μg/L时 ,CD41 + 细胞的比例可从 ( 2 0 .1± 2 .5 3) %提高到 ( 2 6.81± 3.2 0 ) % ,但每 1 0 4个细胞形成 CFU- MK数目却从( 93.7± 1 6.0 )个减少到 ( 4 5± 8.6)个 ;这说明 IL- 6对巨核细胞的刺激主要作用在其发育的后期。采用 SCF+ TPO+ IL- 3+ IL - 6细胞因子组合 ,由 1× 1 0 6个单个核细胞培养一周后可诱导出 ( 1 .61±0 .5 8)× 1 0 5个 CD41 + 细胞 ,占培养物的比例可达到 ( 1 8.8± 1 .64) % ,每 1 0 4个细胞形成 CFU- MK数目可达到 ( 1 2 1 .8± 1 0 .3)个。

关键词：脐血单个核细胞定向诱导巨核细胞细胞因子体外扩增血小板生成癌症治疗

体外培养脐血单个核细胞与CD34^+富集细胞

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生物工程学报 2002年第3期18卷 343-347页

作者：王斌康自珍迟占有谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

对比MNC和CD34 +富集细胞在SCF +IL 3+IL 6 +FL +Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性 ,发现 :CD34 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,在本实验条件下其总细胞持续扩增了 8周 ,扩增倍数达 312 70 9± 86 40 5倍 ;而MNC在培养至第 4周扩增就... 详细信息

对比MNC和CD34 +富集细胞在SCF +IL 3+IL 6 +FL +Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性 ,发现 :CD34 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,在本实验条件下其总细胞持续扩增了 8周 ,扩增倍数达 312 70 9± 86 40 5倍 ;而MNC在培养至第 4周扩增就已呈现下降趋势 ,最大仅扩增了 5 3 3± 6 2倍。对比集落和CD34 +细胞的扩增发现 ,MNC的集落密度和CD34 +细胞含量由第 0天至第 7天有一个上升的过程 ,而CD34 +富集细胞在培养过程中 ,集落密度和CD34 +细胞含量却始终呈下降趋势。在体外培养过程中 ,CD34 +富集细胞的CFU GM和CD34 +细胞最大分别扩增了 185 7± 14 1和 191 7± 188 8倍 ,明显高于MNC的 12 4± 3 2和 5 0 6± 33 2倍 ;而CD34 +富集细胞和MNC的BFU E则只实现了少量扩增 ,分别为 7 2± 5 2和 10 1± 3 4倍。结果显示 ,从CD34 +富集细胞出发扩增造血干祖细胞 ,可以得到更多的CD34 +细胞和CFU

关键词：体外培养脐血单个核细胞 CD34^+富集细胞

脐血CD_(34)^+细胞与单个核细胞的体外扩增特性研究

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中华血液学杂志 2003年第2期24卷 74-77页

作者：王斌康自珍迟占有徐莉谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的　探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法　利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细... 详细信息

目的　探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法　利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细胞的培养。结果　虽然CD34+ 富集细胞具有很高的扩增潜力 ,但在培养过程中 ,其集落密度和CD34 + 细胞含量却始终呈下降趋势 ,而MNC在培养中却出现了一个上升的趋势 ,集落密度和CD34+ 细胞含量分别由第 0天的 (4 12± 16 7) 10 5细胞和 (1.12± 0 .4 2 ) %增至第 7天的 (116 2± 5 6 6 ) 10 5细胞和 (4 .17± 1.4 4 ) % ;再次富选可以使培养过的CD34+ 富集细胞的总细胞和CD34+ 细胞扩增能力大大提高 ;MNCCD34- 细胞具有集落形成和转化为CD34+ 细胞的能力 ;MNC SN对CD34+ 富集细胞的集落形成有促进作用 ,而同时又对CD34+ 细胞有促分化作用。结论　CD34+ 富集细胞在体外大量扩增的同时存在大量分化 ,其在培养过程中产生的CD34-细胞对CD34+ 细胞的扩增有抑制作用 ;脐血MNC中大量的CD34- 细胞含有造血干祖细胞 ,其分泌的细胞因子有促进CD34+ 细胞向较为成熟的集落形成祖细胞分化的作用。

关键词：脐血 CD34^细胞单个核细胞体外扩增

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生物浸出的历史、现状与展望

湖南有色金属 1996年第4期12卷 16-17,7页

作者：胡岳华康自珍王军徐兢中南工业大学矿物系

文章简单回顾了生物浸出的历史，阐述了生物浸出的现状，包括应用现状和研究现状，对浸出机理、菌种改良及数模的研究作了较为详细地阐述，对生物浸出的前景作了具体描述。

关键词：生物浸出细菌基因工程

不同激活方式影响细胞因子诱导杀伤细胞的扩增与活性

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免疫学杂志 2003年第6期19卷 439-442页

作者：秦晓亮康自珍蔡海波谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的　研究不同激活方式对CIK细胞 (Cytokine inducedkillercells ,CIK)体外扩增的影响。方法　使用植物血球凝集素 (Phytohemagglutinin ,PHA)或抗CD3单抗刺激细胞增殖 ,从脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)分析法分... 详细信息

目的　研究不同激活方式对CIK细胞 (Cytokine inducedkillercells ,CIK)体外扩增的影响。方法　使用植物血球凝集素 (Phytohemagglutinin ,PHA)或抗CD3单抗刺激细胞增殖 ,从脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)分析法分析细胞毒活性 ,用流式细胞分析法对不同培养条件下CIK细胞的纯度进行分析。结果　使用抗CD3mAb刺激生成的CIK细胞在扩增能力、纯度和细胞毒性方面都优于使用PHA刺激生成的CIK细胞。在细胞因子和有丝分裂原加入 3d后 ,将其洗脱 ,但仍加入IL 2 ,有利于提高细胞的扩增能力。另外 ,使用包被的方法将抗CD3mAb固定在孔板上比悬浮加入效果好。

关键词：激活方式细胞因子杀伤细胞细胞扩增细胞活性脐血

两步法从CD34^+造血干细胞诱导树突状细胞

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免疫学杂志 2002年第5期18卷 393-396页

作者：徐莉康自珍王斌蔡海波谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的　研究如何从有限的造血干细胞获得大量的树突状细胞 (DC) ,为进一步研究树突状细胞的生化特性及临床应用提供技术支持。方法　利用免疫磁珠法 (MACS)富集CD34+ 细胞 ,先在培养体系中加入FLT3配体 (FL)、血小板生成素(TPO)及干细胞... 详细信息

目的　研究如何从有限的造血干细胞获得大量的树突状细胞 (DC) ,为进一步研究树突状细胞的生化特性及临床应用提供技术支持。方法　利用免疫磁珠法 (MACS)富集CD34+ 细胞 ,先在培养体系中加入FLT3配体 (FL)、血小板生成素(TPO)及干细胞因子 (SCF)等细胞因子 ,然后对富集的细胞进行扩增 ,扩增后的细胞在GM CSF和IL 4的作用下诱导 7d ,诱导后的细胞用流式细胞仪分析树突状细胞特征性表面标记CD1a。结果　两步法能够获得大量的DC ,在第一步中用TPO/FL/SCF/IL 3/IL 6来扩增CD34+ 细胞能获得最多的DC。在相同的培养时间下 (3周 ) ,两步法能扩增出 2 74倍的DC ,大大的超过了直接诱导的扩增倍数 (2 4倍 )。并且 ,随着培养时间的增长 ,DC的扩增倍数不断上升。结论　两步法能从少量的脐血CD34+ 前体细胞诱导扩增出大量的DC ,为从病人动员的CD34+

关键词：两步法造血干细胞树突状细胞 CD34^+细胞诱导分化扩增时间