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致鸭短喙与侏儒综合征的新型鹅细小病毒不同传代毒株基因组分析

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病毒学报 2022年第2期38卷 394-401页

作者：郝雪飘王璐瑶雷白时张武超苗天姿庞洪泽赵款袁万哲河北农业大学动物医学院保定071001 河北省兽医生物技术创新中心保定071001

由新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)引起的鸭短喙与侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)给我国养鸭业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养鸭业的发展。而目前N-GPV的毒力关键基因位点尚不清楚。本... 详细信息

由新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)引起的鸭短喙与侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)给我国养鸭业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养鸭业的发展。而目前N-GPV的毒力关键基因位点尚不清楚。本研究将N-GPV(SD株)在SPF鸭胚上进行多次传代,对SD株F10、F20、F30、F40和F50进行全基因组测序,并选择F50进行致病性试验,结果表明,F50感染组与对照组相比体重与喙长有明显差异,但F50感染组无典型临床症状,表明SD-F50的致病性明显降低;F50与F5序列分析显示,5’和3’的反向重复末端(ITR)中均有4个碱基突变和2个碱基插入,且突变位置相对应;在非结构蛋白Rep中有1个氨基酸位点突变,结构蛋白VP中共有2个氨基酸位点突变。综上所述,N-GPV SD株经过鸭胚连续传代后出现了毒力下降,并且病毒基因组序列也出现了规律性变化,这些突变位点可能是影响N-GPV毒力的关键位点,为N-GPV毒力关键位点的研究提供参考依据。

关键词：新型鹅细小病毒鸭短喙与侏儒综合征序列分析

鸭IFNα-AvBD2融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性检测

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农业生物技术学报 2022年第5期30卷 957-965页

作者：豆子航李秀丽庞洪泽韩颖雷白时赵款庞敬红袁万哲河北农业大学动物医学院河北省兽医生物技术创新中心河北伯瑞动物药业有限公司

鸭(Anas platyrhynchos) α干扰素(interferon α, IFNα)具有广谱的抗病毒活性，禽β防御素2 (avianβ-defensin 2, AvBD2)具有广谱的抗菌活性。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达鸭IFNα-Av BD2融合蛋白并明确IFNα-AvBD2的生物学活性，对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意义。本课题组在前期工作中已成功构建了原核表达质粒pET32a-AplIFNα-AvBD2，并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达。本研究以实验室保存的pET32a-AplIFNα-AvBD2为模板，通过PCR方法扩增得到AplIFNα-AvBD2成熟蛋白的基因片段，构建重组质粒pPICZαA-AplIFNα-AvBD2；将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母KM71H感受态细胞，阳性重组菌经甲醇诱导表达，对表达产物进行体外生物学活性研究。SDS-PAGE和Western blot结果显示，AplIFNα-AvBD2重组蛋白分子量约为24 kD；琼脂扩散法和微量稀释法表明重组蛋白对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌有较强的抗菌活性；细胞病变抑制法检测重组蛋白抗病毒活性为1.2×10~5 U/mL，比活性为5.2×10~5 U/mg;MTT细胞毒性试验显示重组蛋白对非洲绿猴肾细胞(Vero)无毒。上述结果说明，AplIFNα-AvBD2可在毕赤酵母中分泌表达，同时具有抗菌活性和抗病毒活性。本研究为AplIFNα-AvBD2的进一步应用提供了基础资料。

关键词： α干扰素(IFNα) β防御素2 (AvBD2) 毕赤酵母融合蛋白抗菌活性抗病毒活性

一种基于鸽源鹦鹉热衣原体MOMP蛋白的抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1363-1370页

作者：路文彬庞洪泽刘琳敏田甜张武超袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001

为建立一种检测鸽源鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)抗体的间接ELISA方法,将Cps的主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因分别克隆至2个原核表达载体,获得了2种带有不同标签的重组蛋白MOMP-GST和MOMP-His,利用MOMP-His重组蛋白免疫制备多克隆抗体,MOMPGST重组蛋白经抗MOMP的家兔源多抗验证后作为包被抗原,经条件优化,建立基于鸽源Cps的MOMP蛋白的间接ELISA方法。结果显示,成功表达了大小约为51 ku的MOMP-His和65 ku的MOMP-GST重组蛋白,制备的抗MOMP家兔源多克隆抗体效价在1∶409 600以上。该ELISA方法的最适条件为:抗原包被质量浓度为0.5 mg/L,抗原包被液为CBS,抗原包被条件为37℃1 h;封闭液为50 mL/L FBS,封闭条件为37℃2 h;血清稀释度为1∶200,血清孵育时间为30 min;酶标二抗稀释度为1∶8 000,酶标二抗孵育时间为1 h;底物反应时间为5 min。特异性试验结果显示,该方法仅能检测鸽源Cps阳性血清,与鸽Ⅰ型副黏病毒等其他常见鸽病毒阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果显示,当鸽阳性血清稀释到1∶1 600时检测结果仍为阳性,且批内批间的重复变异系数均在6%以内。结果表明,本研究建立的检测Cps的MOMP抗体的间接ELISA方法特异性强、敏感性高和重复性好,且可用于鸽Cps疫苗免疫抗体水平检测与流行病学调查。

关键词：鹦鹉热衣原体 MOMP蛋白间接ELISA

新型鹅细小病毒VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2023年第9期53卷 1145-1151页

作者：刘琳敏田甜郝雪飘庞洪泽雷白时赵款张武超袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001

为探究造成鸭短喙与侏儒综合征的病原即新型鹅细小病毒(NGPV) VP2蛋白的生物学功能,根据NGPV SD株序列,扩增VP2基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。将纯化的蛋白按照标准程序免疫7周龄BALB/c小鼠制... 详细信息

为探究造成鸭短喙与侏儒综合征的病原即新型鹅细小病毒(NGPV) VP2蛋白的生物学功能,根据NGPV SD株序列,扩增VP2基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。将纯化的蛋白按照标准程序免疫7周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,NGPV VP2基因全长为2 199 bp;通过大肠杆菌BL21(DE3)成功表达出大小约为83 ku的His-VP2融合蛋白。ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别VP2蛋白。间接免疫荧光试验表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别受感染细胞中的NGPV和鹅细小病毒。综上所述,本研究成功表达并纯化了VP2蛋白,并成功制备了效价高反应性好的多克隆抗体,为进一步探究NGPV VP2蛋白生物学功能奠定了基础。

关键词：鸭短喙与侏儒综合征新型鹅细小病毒多克隆抗体 VP2

GM-CSF和大肠杆菌鞭毛蛋白对口蹄疫灭活疫苗免疫效果的影响

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 358-365页

作者：李亚宁雷白时李丽敏庞洪泽赵款张武超郑世学袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术工程技术创新中心河北保定071001

为探究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和大肠杆菌鞭毛蛋白(FliC)对口蹄疫(FMD)灭活疫苗免疫效果的影响,通过大肠杆菌表达系统成功表达了重组猪GM-CSF蛋白和重组FliC蛋白,之后进行了重组蛋白的纯化与复性。将制备好的重组蛋白与口... 详细信息

为探究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和大肠杆菌鞭毛蛋白(FliC)对口蹄疫(FMD)灭活疫苗免疫效果的影响,通过大肠杆菌表达系统成功表达了重组猪GM-CSF蛋白和重组FliC蛋白,之后进行了重组蛋白的纯化与复性。将制备好的重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗混合后免疫小鼠,免疫后第4、7、10、14天采集小鼠血清,用间接ELISA检测VP1结构蛋白抗体水平,第14天无菌分离小鼠脾用qPCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的相对表达量。ELISA检测结果表明,免疫后第7、10、14天,GM-CSF佐剂组和FliC佐剂组的抗体水平明显高于FMD疫苗组,复合佐剂的抗体水平高于FMD疫苗组和其他佐剂组。q PCR结果显示,GM-CSF佐剂组、FliC佐剂组与复合佐剂组中IL-2、IL-4、IL-10的相对表达量显著高于疫苗组和PBS组。由此可见,重组FliC蛋白和重组猪GM-CSF蛋白可以提高FMD灭活疫苗的免疫应答水平,且重组蛋白联合使用的效果更佳。

关键词： GM-CSF FliC 口蹄疫疫苗

2015—2022年我国部分地区Ⅰ群禽腺病毒分子流行病学调查

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中国兽医科学 2023年第1期53卷 57-63页

作者：田甜刘琳敏路文彬庞洪泽刘小娜曹立辉雷白时赵款张武超袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001 农业农村部动物疫病病原生物学华北区观测实验站河北保定071001 正定县动物疫病预防控制中心河北石家庄050899

为了解我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的分子流行病学情况,对采自6个不同省份及地区的324份疑似FAdV感染组织利用PCR进行病原学检测,通过扩增其Hexon基因并连接至pMD19-T载体进行测序和遗传进化分析。结果显示,324份样品中阳性... 详细信息

为了解我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的分子流行病学情况,对采自6个不同省份及地区的324份疑似FAdV感染组织利用PCR进行病原学检测,通过扩增其Hexon基因并连接至pMD19-T载体进行测序和遗传进化分析。结果显示,324份样品中阳性检出率为23.4%,鸡、鹅、鹌鹑、鸽、鸭中均有检出,其中2021年FAdV的检出率高达61.8%。另外,在扩繁得到76株病毒中,通过序列对比发现,血清1型(FAdV-1)占比较少为7.9%,血清4型(FAdV-4)占比较高为92.1%。FAdV-1样本株与国内外流行毒株处于同一遗传进化分支,Hexon L1区域的核苷酸同源性为98.7%~100%,部分FAdV-4样本株与中国参考毒株处于同一遗传进化分支。本研究在2015—2022年采集了我国部分地区疑似FAdV感染的病料进行Ⅰ群禽腺病毒的分子流行病学调查和遗传进化分析,为进一步做好相关防控工作提供理论参考。

关键词： Ⅰ群禽腺病毒流行病学调查遗传进化分析

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辽东湾新区分类“孵化”小微企业 001

盘锦日报

作者：庞洪泽张帆

本报讯(庞洪泽首席记者张帆)日前，辽东湾新区在田庄台街道开展了促进小微企业发展政策宣传活动，面向广大居民群众和经营业者现场讲解我市发展小微企业的相关政策，介绍在新区创业投资的优势及服务流程，真正将发展小微企业的新理念...

本报讯(庞洪泽首席记者张帆)日前，辽东湾新区在田庄台街道开展了促进小微企业发展政策宣传活动，面向广大居民群众和经营业者现场讲解我市发展小微企业的相关政策，介绍在新区创业投资的优势及服务流程，真正将发展小微企业的新理念新政策送到了百姓家门口。以市政?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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貉源细小病毒和沙门氏杆菌混合感染的诊治

黑龙江畜牧兽医 2019年第4期 162-163页

作者：肖丽荣周琦李巧玲庞洪泽贾青辉张召兴史秋梅河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604 河北旅游职业学院畜牧兽医系河北承德067000

为了研究秦皇岛某养殖场母貉死亡的原因,笔者无菌采集死亡貉的心血、肝脏、肠内容物等病料组织,采用胶体金试纸条法、PCR法、细菌分离鉴定、K-B纸片法等分别检测细小病毒、病原菌感染情况及病原菌的耐药性。结果表明:死亡貉细小病毒阳性... 详细信息

为了研究秦皇岛某养殖场母貉死亡的原因,笔者无菌采集死亡貉的心血、肝脏、肠内容物等病料组织,采用胶体金试纸条法、PCR法、细菌分离鉴定、K-B纸片法等分别检测细小病毒、病原菌感染情况及病原菌的耐药性。结果表明:死亡貉细小病毒阳性,病原菌为沙门氏杆菌;分离到的沙门氏杆菌对头孢曲松、头孢拉啶、环丙沙星等5种药物敏感,对其他药物存在不同的耐药性。说明貉源细小病毒和沙门氏杆菌混合感染是引起母貉死亡的主要原因。临床上对细小病毒无特效治疗药物,接种疫苗是预防该病的主要方法。

关键词：貉沙门氏杆菌细小病毒混合感染防治

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禽腺病毒概述

动物医学进展 2020年第7期41卷 125-129页

作者：庞洪泽袁万哲杨宇晴马爱团河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071001 河北农业大学现代科技学院河北保定071001

禽腺病毒是一种对禽类危害极大的病原体,感染后发病快、病死率高,易造成混合感染,给禽养殖业造成了巨大的经济损失。研究病毒的致病机理对于禽腺病毒病的防控有重要意义,疫苗是目前防控该病毒病最好的方法。论文就禽腺病毒的分类、病原... 详细信息

禽腺病毒是一种对禽类危害极大的病原体,感染后发病快、病死率高,易造成混合感染,给禽养殖业造成了巨大的经济损失。研究病毒的致病机理对于禽腺病毒病的防控有重要意义,疫苗是目前防控该病毒病最好的方法。论文就禽腺病毒的分类、病原结构、致病机制和疫苗研制的研究进展进行综述,以期为禽腺病毒病的研究与防控提供参考。

关键词：禽腺病毒致病机制疫苗