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板式磁颗粒化学发光免疫分析测定人血清中糖类抗原125

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化学学报 2010年第2期68卷 162-168页

作者：李智勇肖勤应希堂李振甲林金明清华大学化学系生物有机磷教育部重点实验室北京100084 中国科学院生态环境研究中心北京100085 北京科美东雅生物技术有限公司北京100094

在传统的板式化学发光免疫分析法和管式磁颗粒化学发光免疫分析法基础上,建立了人血清中糖类抗原125(CA125)的板式磁颗粒化学发光免疫分析方法.该方法以磁性微粒子作为分离固相,96孔板为反应容器,辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2-luminol... 详细信息

在传统的板式化学发光免疫分析法和管式磁颗粒化学发光免疫分析法基础上,建立了人血清中糖类抗原125(CA125)的板式磁颗粒化学发光免疫分析方法.该方法以磁性微粒子作为分离固相,96孔板为反应容器,辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2-luminol化学发光体系作为检测体系.本法测定CA125的检测灵敏度可达2.0U/mL,线性范围为0～400U/mL.与常用的包被板化学发光免疫分析方法对比,该方法检测范围宽.与管式磁颗粒化化学发光法比较,其分析灵敏度与精密度高、线性范围、分析通量以及分析成本方面均显示了很好的优越性.采用该方法对人血清中CA125进行测定并与罗氏全自动电化学发光系统的测值结果进行了比对,两者显示了良好的相关性.

关键词：化学发光免疫分析磁颗粒微孔板糖类抗原125(CA125)

磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人血清中雌三醇

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化学学报 2007年第23期65卷 2755-2760页

作者：吴丹凝王栩林金明李振甲应希堂清华大学化学系生命有机磷化学与化学生物学教育部重点实验室北京100084 北京科美东雅生物技术有限公司北京科学技术研究院北京100094

利用化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)高灵敏度和高特异性的特点,将磁性微粒子应用于化学发光免疫分析中,用两种不同的方法对人体血清内的雌三醇(E3)含量进行了测定.磁性微粒子分别作为固相一抗包被材料和二抗分... 详细信息

利用化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)高灵敏度和高特异性的特点,将磁性微粒子应用于化学发光免疫分析中,用两种不同的方法对人体血清内的雌三醇(E3)含量进行了测定.磁性微粒子分别作为固相一抗包被材料和二抗分离剂参与反应.两种方法检测雌三醇浓度的线形范围均为0.6～60ng/mL.其中,固相一抗法的批内变异及批间变异系数分别小于11%和15%,回收率为90%～116%,健全性系数为0.9987.二抗分离法的批内变异及批间变异系数分别小于8%和10%,回收率为88%～118%,健全性系数为0.9974.两种方法分别与经典板式化学发光法对比,检测人血清样本,结果相关性较好,且磁性微粒子法更为省时、简便,适于推广应用.

关键词：雌三醇磁性微粒子化学发光免疫分析法人血清

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C-肽化学发光免疫分析方法学研究

中国免疫学杂志 2006年第9期22卷 848-851页

作者：马世俊应希堂李振甲北京科美东雅生物技术有限公司北京100094

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被... 详细信息

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。

关键词：化学发光免疫分析 C-肽方法学单克隆抗体

人血清中雌三醇的磁性微粒子放射免疫分析法研究

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分析化学 2007年第9期35卷 1241-1245页

作者：吴丹凝林金明李振甲王诩淑应希堂清华大学化学系生物有机磷教育部重点实验室北京科美东雅生物技术有限公司

在传统的放射免疫分析的基础上,以磁性微粒子为二抗分离剂和固相一抗为结合反应剂,建立了两种快速、超灵敏、简便的血清及其它样品中雌三醇含量的分析方法。雌三醇测定的曲线范围0.330μg/L;磁性微粒子二抗分离法批内和批间相对标准偏... 详细信息

在传统的放射免疫分析的基础上,以磁性微粒子为二抗分离剂和固相一抗为结合反应剂,建立了两种快速、超灵敏、简便的血清及其它样品中雌三醇含量的分析方法。雌三醇测定的曲线范围0.330μg/L;磁性微粒子二抗分离法批内和批间相对标准偏差分别为4.3%和8.7%;回收率为104%114%;健全性为0.9989。磁性微粒子固相一抗法批内和批间相对标准偏差分别为4.4%和7.6%;回收率为96%115%;健全性为0.9986。两种方法相比,磁性微粒子固相一抗法具有更为简便、快捷的优点。两种磁性微粒子的放射免疫分析不仅缩短了反应时间,其准确性和精密度也均满足临床及环境研究中的检验要求,且灵敏度较现有方法提高了一个数量级。

关键词：雌三醇磁性微粒子放射免疫分析血清

高灵敏度人促甲状腺素（TSH）免疫放射分析法

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中国免疫学杂志 1994年第4期10卷 230-232页

作者：应希堂许正芳段云富王建明方荣谢汝泰北京北方免疫试剂研究所

用两种抗人促甲状腺紊（ＴＳＨ）分子不同抗原决定簇，彼此互不干扰的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）建立了ＴＳＨ一步双位夹心，固相免疫放射分析法（ＩＲＭＡ）简便快速、不需离心、灵敏度高、（０．０２Ｉμ／ｍｌ）特异性强。

关键词：促甲状腺素单克隆抗体免疫技术

管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇

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分析化学 2011年第1期39卷 62-66页

作者：郑国金方卢秋陈惠李振甲应希堂林金明楚雄医药高等专科学校化学教研室清华大学化学系长江师范学院化学化工学院北京科美东雅生物技术有限公司

待测尿液中的雌三醇、辣根过氧化物酶标记的雌三醇与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗雌三醇抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场中经分离、洗涤后加发光底物,检测发... 详细信息

待测尿液中的雌三醇、辣根过氧化物酶标记的雌三醇与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗雌三醇抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场中经分离、洗涤后加发光底物,检测发光强度(RLU),测定尿液中雌三醇的含量。通过对检测条件的优化,建立了磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中雌三醇的方法,并对正常男性、女性和孕妇的尿液中雌三醇含量进行了测定。结果表明,本方法的线性范围为1～100μg/L,检出限为0.25μg/L,具有很高的灵敏度;批内相对标准偏差<14%;批间相对标准偏差<7%,具有良好的稳定性和重现性。

关键词：雌三醇化学发光免疫分析磁性微粒子尿液

微孔板化学发光免疫分析法检测人血清中三碘甲状腺原氨酸

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科学通报 2010年第1期55卷 20-25页

作者：汪阿恋肖勤应希堂陈国南林金明福州大学化学化工学院福州350002 清华大学化学系北京100084 北京科美东雅生物技术有限公司北京100094

建立了一种定量人血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)的化学发光免疫分析方法,使用辣根过氧化物酶(HRP)标记T3抗原,HRP催化鲁米诺-过氧化氢化学发光为检测体系.对几种影响因素,如包被抗体、酶标物的滴度进行选择,对温育及检测时间等进行优化.... 详细信息

建立了一种定量人血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)的化学发光免疫分析方法,使用辣根过氧化物酶(HRP)标记T3抗原,HRP催化鲁米诺-过氧化氢化学发光为检测体系.对几种影响因素,如包被抗体、酶标物的滴度进行选择,对温育及检测时间等进行优化.进行了方法学评价:灵敏度为0.07ng/mL;批内和批间变异均小于10%;回收率在80%～90%之间;与结构相似物T4及rT3均无明显交叉.使用本方法与现有的发光试剂盒进行比对,相关性良好,相关系数为0.9547.

关键词：三碘甲状腺原氨酸化学发光免疫分析辣根过氧化物酶

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应重视放射免疫分析总体质量的提高

放射免疫学杂志 2006年第3期19卷 161-162页

作者：应希堂李振甲北京科美东雅生物技术有限公司 100094

Yalow-Berson创建放射免疫分析(RIA)是超微量检验方法发展史上划时代的进展,因具有高灵敏度、高特异性、简便、快速等诸多特点,在相当长的一段时间成为生物医学研究及临床疾病诊疗中必不可缺少的实验手段.

关键词：放射免疫分析方法总体质量生物医学研究放射性标记物检验方法高灵敏度高特异性实验手段临床疾病制备工艺

水体及人体液中的雌二醇的高灵敏度化学发光酶免疫分析

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分析化学 2007年第3期35卷 320-324页

作者：魏慧斌林金明吴丹凝赵利霞李振甲应希堂清华大学化学系中国科学院生态环境研究中心北京科美东雅生物技术有限公司

采用高灵敏度的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA)研究测定了环境水体及人体尿液中17β-雌二醇(17β-estradiol)的含量。以FITC-anti-FITC体系为固相,生物素-亲和素体系作为信号放大体系,高灵敏度的3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-羟... 详细信息

采用高灵敏度的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA)研究测定了环境水体及人体尿液中17β-雌二醇(17β-estradiol)的含量。以FITC-anti-FITC体系为固相,生物素-亲和素体系作为信号放大体系,高灵敏度的3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-羟基)苯1,2-二氧杂环丁烷磷酸钠(AMPPD)-碱性磷酸酶(ALP)化学发光反应作为信号检测体系。优化分析条件后,测量的线性范围为2.52000ng/L;检出限为1.1ng/L;批内、批间分析误差均在10%以内,稀释回收率和加标回收率均在92%112%之间。测得环境水样中雌二醇的含量在0.150.57ng/L范围内,而人体尿液中雌二醇含量在0·75135μg/L范围内。

关键词：化学发光酶免疫分析 17β-雌二醇水体尿液