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湖北省南漳县中小规模猪场非洲猪瘟防控联合体探索实践

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中国动物检疫 2024年第3期41卷 42-47页

作者：蒋辉胜李仕海许顺鑫李勇胡家连库旭钢裴洁周丹娜何启盖谢军王文建襄阳市农业科学院湖北襄阳441057 南漳县动物疫病预防控制中心湖北南漳441402 南漳县武安镇畜牧特产服务中心湖北南漳441509 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 湖北省动物疫病预防控制中心湖北武汉430064 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430070 襄阳市农业技术推广中心湖北襄阳441021

非洲猪瘟(ASF)对养猪业构成了严重威胁,是全球范围内养猪业面临的主要问题。为有效防控ASF,以湖北省南漳县ASF防控联合体建设为例,探索中小规模猪场的ASF防控新模式。该模式遵循“政府引导、业主自建、行业监管、专家指导”的防控联合... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)对养猪业构成了严重威胁,是全球范围内养猪业面临的主要问题。为有效防控ASF,以湖北省南漳县ASF防控联合体建设为例,探索中小规模猪场的ASF防控新模式。该模式遵循“政府引导、业主自建、行业监管、专家指导”的防控联合体建设原则,以及加强监测预警、强化防控措施、创建合作机制的防控总体规划,利用地理优势和天然屏障,规划出疫病连片防控区,由政府引导中小规模生猪养殖场户组建ASF防控联合体。由政府出资在县界高速、国道、省道等入口处,建设畜禽车辆一级洗消中心,再由联合体成员共同出资在防控区内建设二级洗消中心。防控联合体内,统一防控策略,统一原料及生猪采购,统一防控管理,统一技术指导。防控联合体建设使南漳县ASF防控水平得到了提升,取得了显著的经济和社会效益。该防控联合体模式具有较好的应用推广前景,为中小规模猪场ASF防控和拓宽ASF无疫小区建设提供了新的工作思路。

关键词：中小规模猪场非洲猪瘟防控联合体区域化管理

基于16S rDNA高通量测序技术分析受水灾影响猪场水样的菌群特征

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2092-2100页

作者：洪勃孙琪李栋凡于学祥库旭钢何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括1... 详细信息

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括19份猪饮用水、22份场内积雨水和7份废弃污水,采用菌落计数和高通量测序技术,对样品的细菌总数和菌群丰度进行分析研究,同时对采集的水样开展消毒剂杀菌试验。结果发现:饮用水、积雨水和污水中的平均含菌量分别为1.55×10^(5)、1.88×10^(8)和3.70×10^(9)CFU·mL^(-1),其中污水中的细菌总数最多,其次为积雨水,饮用水中的细菌总数最少,但远超国家饮用水的安全标准。本研究在不同种类的水样中均检测到了链球菌属、埃希氏杆菌属、弓形杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属等潜在的致病菌属,以及嗜低温弓形杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和豚鼠气单胞菌等致病菌。杀菌试验显示,氯制剂终浓度达到2500mg·L^(-1),作用30 min即可杀灭积雨水和污水中所有的细菌。本研究发现,水灾后养猪场内的水样中含有多种致病菌,规模化猪场可选用含氯消毒剂对场内污染的水体进行消杀,以确保人和猪群的健康安全。

关键词： 16S rDNA 猪场洪水细菌

非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用

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畜牧兽医学报 2022年第5期53卷 1517-1526页

作者：于学祥陈晓雨李栋凡孙琪库旭钢范盛先杨汉春何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 中国农业大学动物医学院北京100193

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接EL... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法。结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1μg·mL^(-1),根据ROC曲线下面积确定S/P值>0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均<10%;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78%。用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1∶512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80%(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性。644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61%,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03%、0%、4.94%、7.55%和28.7%。本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段。

关键词：非洲猪瘟 CP204L基因 p30蛋白原核表达 ELISA抗体检测

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猪圆环病毒3型的分离及致病性分析

畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1568-1578页

作者：库旭钢于学祥孙琪李盼盼张梦佳罗锐钱平何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/... 详细信息

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒3型分离致病性病毒载量

IFN-γ-ELISpot方法用于评价猪伪狂犬病疫苗免疫效果

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畜牧兽医学报 2017年第10期48卷 1939-1948页

作者：谭鑫库旭钢于学祥郭恒科何东贤范盛先何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为... 详细信息

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为刺激原的最适浓度、外周血单个核细胞(PBMC)密度和作用时间以建立并优化该方法。将20头gB抗体检测阴性猪,随机分为单独弱毒疫苗免疫组、单独灭活疫苗免疫组、弱毒疫苗-灭活疫苗联合组及对照组,免疫后攻毒。利用所建方法,结合gB-ELISA、中和试验及攻毒保护试验,评价上述三种免疫程序的效果。试验结果表明:IFN-γ-ELISpot最佳条件为刺激原浓度2μg·孔^(-1)、外周血单核细胞(PBMC)浓度106·孔^(-1),培养时间36h。一免弱毒疫苗二免灭活疫苗组二免后2周,试验猪中和抗体效价可达1∶14.48,ELISpot斑点数可达(151.8±26.61)个·孔^(-1),且该免疫程序下,试验猪攻毒后体温、鼻拭子排毒及临床症状均低于其余试验组,攻毒8d后仅表现呼吸道症状;单独灭活疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价可达1∶32.36,而ELISpot斑点数仅为(40.4±9.07)个·孔^(-1);单独弱毒疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价仅为1∶1.36,但ELISpot斑点数可达(189.6±27.36)个·孔^(-1)。综合分析攻毒试验结果和ELISpot斑点数之间的相关性,本试验所建立的IFN-γ-ELISpot可用于猪伪狂犬病疫苗的细胞免疫评估,为免疫程序的评价和选择提供有效手段。

关键词：猪伪狂犬病 IFN-γ-ELISpot 细胞免疫疫苗免疫程序

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猪A群轮状病毒的分离与鉴定

畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 275-281页

作者：库旭钢张坤刘羽茜何启盖农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行... 详细信息

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行病毒分离传代。再对分离毒株进行常规RT-PCR鉴定和电镜观察,并对分离毒株的VP6、VP7和VP8基因进行测序及序列分析。结果成功分离猪A群轮状病毒TM-a株,经序列同源性分析发现,与TM-a株VP6、VP7和VP8基因同源性最高的毒株分别为中国北京人源LL3354株、印度人源RMC321株和日本野猪源GUB-71株,其相似性为96.0%、95.1%和97.0%。该TM-a株轮状病毒不同基因表现出与人源轮状病毒和猪源轮状病毒的高度同源性,推测猪A群轮状病毒可能在人畜间传播,发生基因重组现象。

关键词：猪A群轮状病毒分离鉴定

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山东某猪场一起猪伪狂犬病的诊断与控制

畜牧与兽医 2016年第9期48卷 111-113页

作者：谭鑫库旭钢周春陵许拓郭恒科何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

从疑似发生猪伪狂犬病（PR）的山东某猪场中,采集流产母猪的血清及发病仔猪和死胎等样品,进行实验室血清学和病原学检测。检测结果是：流产母猪血清PRV-g E抗体检测阳性率为100%（12/12）;同群表现正常母猪血清g E抗体阳性率100%（10/1... 详细信息

从疑似发生猪伪狂犬病（PR）的山东某猪场中,采集流产母猪的血清及发病仔猪和死胎等样品,进行实验室血清学和病原学检测。检测结果是：流产母猪血清PRV-g E抗体检测阳性率为100%（12/12）;同群表现正常母猪血清g E抗体阳性率100%（10/10）。病料提取DNA的g E-PCR检测阳性率为80%（8/10）;同时从阳性病料中分离到猪伪狂犬病病毒SD2015,对分离株g B、g C、g E、TK、RR1和RR2基因进行测序发现,该分离株与Ea株和Bartha株的g B基因同源性分别为99.5%和98.1%,且与我国近年分离的PRV毒株同源性高,亲缘关系近。此外,该场分离株与我国2012年以来流行毒株在g C、g E、TK、RR1和RR2基因序列同源性在99.3%-99.9%。结合临床表现,可确诊该场发生了猪伪狂犬病。使用伪狂犬病疫苗（HB98株）紧急接种,1个月后,疫情得到有效控制。

关键词：猪伪狂犬病血清学检测 PCR检测基因测序

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某规模化猪场猪肺疫的诊断与防治

畜牧与兽医 2016年第5期48卷 151-152页

作者：许拓库旭钢张丙周何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

1发病情况与临床症状湖南某新建猪场存栏3 500头左右。近半个月以来,出现130日龄左右育肥猪发生急性死亡的情况,每天死亡十多头。病猪死亡前临床表现均为体温升高,喘气,鼻腔有黏稠液体,有时口腔混有血液。张口呼吸,呈犬坐姿势。消瘦无力... 详细信息

1发病情况与临床症状湖南某新建猪场存栏3 500头左右。近半个月以来,出现130日龄左右育肥猪发生急性死亡的情况,每天死亡十多头。病猪死亡前临床表现均为体温升高,喘气,鼻腔有黏稠液体,有时口腔混有血液。张口呼吸,呈犬坐姿势。消瘦无力,卧地不起,无食欲。

关键词：猪肺疫规模化猪场犬坐姿势临床症状副猪嗜血杆菌氟苯药敏试验个体治疗病原分离传染性胸膜肺炎

ASFV、CSFV、PRRSV多重荧光PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2021年第11期41卷 2107-2113页

作者：牛伟杰于学祥高宇库旭钢何启盖罗锐华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心湖北武汉430070

非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的基因保守片段设计特异性引物和探针,建立了多重荧光PCR检测方法。结果显示,所建立的多重荧光PCR可同时检测ASFV、CSFV、PRRSV 3种病原,特异性好、灵敏度高,对3种病原的检测下限分别达到13,16,26个拷贝;重复性良好,组内及组间重复试验的变异系数(CV)均在2%以内。将ASFV OIE标准、CSFV、PRRSV国家标准荧光qPCR作为金标准,同时对180份样品进行检测对比,结果显示,本研究方法对CSFV灵敏性和特异性分别为94.59%和100.00%,总符合率为98.89%;对PRRSV灵敏性为92.68%,特异性为98.56%,总符合率为97.22%;未检测到ASFV。使用所建立的方法对839份临床样品进行检测,结果显示,CSFV、PRRSV是当前猪群疾病的主要病原,且育肥阶段猪只CSFV、PRRSV核酸检出率均显著高于保育阶段猪只(P<0.01)。结果表明,本研究所建立的方法具有较高的灵敏性和特异性,可用于临床样品检测,猪场在防控非洲猪瘟的同时也须加强对CSF、PRRS的防控工作。

关键词：多重荧光定量PCR 鉴别诊断非洲猪瘟经典猪瘟猪繁殖与呼吸综合征