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替尼泊甙或表柔比星联合氟尿嘧啶及顺铂治疗晚期胃癌的临床研究

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第三军医大学学报 2009年第3期31卷 193-193,208页

作者：常方方高明周云郑州大学第一附属医院肿瘤内科郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科教研室郑州450052

替尼泊甙(Teniposide,VM-26)是常用的拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,其细胞毒作用是依托泊甙(Etoposide,VP-16)的5～10倍。研究表明,VM-26对胃癌细胞的生长抑制作用强于VP-16,且与顺铂(DDP)联合有协同作用,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合有相加作用[1]。... 详细信息

替尼泊甙(Teniposide,VM-26)是常用的拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,其细胞毒作用是依托泊甙(Etoposide,VP-16)的5～10倍。研究表明,VM-26对胃癌细胞的生长抑制作用强于VP-16,且与顺铂(DDP)联合有协同作用,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合有相加作用[1]。为了进一步观察VM-26联合用药的临床疗效及不良反应,收集我科2006年4月至2008年4月84例胃癌患者,观察其疗效、不良反应及患者生存情况,并进行比较和分析。1资料与方法1.1一般资料84例均为内科住院患者,经病理或细胞学确诊为晚期胃癌,TNM分期Ⅲ～Ⅳ期,KPS评分70～90分。VCF(VM-26+DDP+5-FU)组40例,男性34例,女性6例,中位年龄49.0(35～69)岁;初治者21例,复治者19例;不能手术切除原发灶者18例,原发灶切除后复发转移不能再切除者22例,转移部位包括淋巴结、肝、肺、腹膜;低分化腺癌7例,乳头状腺癌9例,黏液腺癌9例,管状腺癌9例,印戒细胞癌4例,其他2例。

关键词：胃癌替尼泊甙顺铂 5-氟尿嘧啶表柔比星

A\B和J亚群禽白血病病毒抗体ELISA检测方法的建立及初步应用

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A\B和J亚群禽白血病病毒抗体ELISA检测方法的建立及初步应用

作者：常方方中国农业科学院

学位级别：硕士

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的多种肿瘤性疾病的总称。A亚群禽白血病病毒（ALV-A）、B亚群禽白血病病毒（ALV-B）和J亚群禽白血病病毒（ALV-J）是感染鸡的最常见的三种ALV。禽白血病是危害我国养禽业的... 详细信息

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的多种肿瘤性疾病的总称。A亚群禽白血病病毒（ALV-A）、B亚群禽白血病病毒（ALV-B）和J亚群禽白血病病毒（ALV-J）是感染鸡的最常见的三种ALV。禽白血病是危害我国养禽业的重要的种源性遗传病,目前,该病没有可用的疫苗和药物,主要通过种群净化来防控。抗体检测是ALV检测的重要手段。为此,本研究建立了A/B亚群ALV ELISA抗体检测方法和J亚群ALV ELISA抗体检测方法,可为禽白血病的有效防控与净化提供技术支持。为了制备ELISA抗体检测方法的包被抗原,首先分别建立了稳定表达ALV-A、ALV-B和ALV-J gp85的293F细胞系。以毒株RAV-1（ALV-A）、RAV-2（ALV-B）、HLJ09MDJ-1（ALV-J）的cDNA为模板,通过PCR扩增获得gp85基因,并将其分别克隆到pLVX载体上,获得慢病毒表达质粒pLVX-A-gp85、pLVX-B-gp85和pLVX-J-gp85。分别用三个亚群gp85慢病毒表达质粒与psPAX2和pMD2.G质粒共转染293T细胞包装慢病毒。将收获的慢病毒分别感染293F细胞,之后进行流式细胞分选,分选后表达绿色荧光的293F细胞比例达到了90%以上。将分选的细胞继续培养5 d,经Western Blot检测细胞上清蛋白分泌结果表明,细胞系能分泌gp85蛋白至上清中。稳定性检测结果表明,绿色荧光蛋白和ALV gp85蛋白均可在第5、10和15代293F稳定表达细胞系中稳定表达。这些结果表明,表达gp85蛋白的293F稳定细胞系成功建立。经计算三个亚群gp85蛋白在细胞系中的表达量约为30mg/L。稳定表达细胞系表达的ALV-A和ALV-B的gp85蛋白以1:1的比例作为包被抗原,建立了A/B亚群ALV ELISA抗体检测方法。该方法不与ALV-J及其他常见感染禽类的病毒阳性血清反应,特异性好于IDEXX试剂盒。该方法检测ALV-A血清的敏感性（1:6400）为间接免疫荧光实验（IFA）（1:1600）的4倍;检测ALV-B血清的敏感性（1:12800）为IFA（1:1600）的8倍。重复性试验结果表明,该方法检测阳性血清批间和批内的变异系数均≤10%,稳定性好。对1428份临床血清检测结果表明,该ELISA方法与IFA的符合率为99.51%。以稳定表达细胞系表达的ALV-J gp85蛋白作为包被抗原,建立了检测J亚群ALV ELISA抗体检测方法。该方法不与ALV-A和ALV-B及其他常见感染禽类的病毒阳性血清反应,特异性优于IDEXX试剂盒。该方法的敏感性（1:51200）为IDEXX试剂盒（1:25600）的2倍,为IFA（1:3200）的8倍。批间和批内检测变异系数均≤10%。使用该方法与IFA共检测临床血清1180份,两者的符合率为98.31%。本研究成功构建了能稳定表达ALV-A、ALV-B和ALV-J gp85蛋白的293F细胞系,以细胞系表达纯化的gp85蛋白作为包被抗原,成功建立了检测A/B亚群ALV ELISA抗体检测方法和J亚群ALV ELISA抗体检测方法,这两个方法特异性强,敏感性高,稳定性好,与IFA的符合率高,为ALV的血清学监测、诊断和净化提供了重要技术手段。

关键词：禽白血病病毒抗体 ELISA gp85

“互联网+”混合式教学在内科学教学中的应用研究

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现代医药卫生 2022年第7期38卷 1234-1236页

作者：常方方何辉皇甫赟张凤娟李平河南医学高等专科学校内科教研室河南郑州451191 河南医学高等专科学校实训中心河南郑州451191

目的探讨互联网背景下内科学混合式教学模式的实施效果。方法以该校2019级三年制临床专业学生为研究对象,采用“互联网+”混合式教学模式+综合理论实训相结合考核模式,并采用问卷调查方法进行效果评价。结果学生对该种教学模式认可度较... 详细信息

目的探讨互联网背景下内科学混合式教学模式的实施效果。方法以该校2019级三年制临床专业学生为研究对象,采用“互联网+”混合式教学模式+综合理论实训相结合考核模式,并采用问卷调查方法进行效果评价。结果学生对该种教学模式认可度较高,考核成绩较传统教学模式明显提升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论学生对互联网背景下内科学混合式教学模式认可度较高,该模式注重课堂的延伸,互联网的合理使用,学生全员参与,师生随时沟通,有利于增强学生分析思考解决问题的临床能力,适合在临床内科教学中实施。

关键词：互联网内科学教学方法混合式教学

以奥沙利铂、顺铂为主的联合用药诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

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以奥沙利铂、顺铂为主的联合用药诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

作者：常方方郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,化疗是胃癌尤其是进展期胃癌综合治疗中必不可少的组成部分。但由于胃癌对化疗药物有天然耐药性,研究者开展了多方面的研究,以提高药物的疗效,减轻药物对正常组织的毒性,如如何科学合理的联... 详细信息

背景与目的胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,化疗是胃癌尤其是进展期胃癌综合治疗中必不可少的组成部分。但由于胃癌对化疗药物有天然耐药性,研究者开展了多方面的研究,以提高药物的疗效,减轻药物对正常组织的毒性,如如何科学合理的联合用药、选择更优化的联合方式及给药途径,以及靶向治疗的研究等,并不断取得了新的进展。铂类是细胞周期非特异性抗癌药物,类似双功能烷化剂,DNA是其作用靶点;在低氯环境中解离,与DNA等生物大分子结合形成链内交联、链间交联、DNA-蛋白质分子间交联,从而使DNA链局部纽结或解旋,阻止DNA聚合酶推进,致使DNA复制、转录失败,造成肿瘤细胞死亡。自从发现顺铂具有抑制肿瘤细胞增长的活性以来,铂类药物在肿瘤化疗中的研究与临床应用取得了迅速的进展,现已成为目前临床上不可或缺的一线化疗药物。目前,国内常用的铂类药物有顺铂(cisplatin,DDP)、卡铂(carboplatin,CBP)和奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)。顺铂严重的耳肾毒性使其临床剂量受到一定限制,从而影响疗效,为了开发高效低毒的新型铂类抗癌药物,研究者用1,2-二氨基环己烷(DACH)基团替代顺铂(CDDP)NH4的氨基则产生奥沙利铂。奥沙利铂作用机制与顺铂相似,抗肿瘤活性优于顺铂,对耐顺铂的肿瘤细胞亦有作用。奥沙利铂主要剂量限制性毒性是外周神经毒性,无耳肾毒性,与顺铂毒副作用不叠加,值得进一步研究探讨二者联合应用以起到增效减毒的临床疗效。目前铂类药物联合应用主要集中在顺铂、卡铂联合治疗胃癌、食管癌、肺癌、卵巢癌等;也有报道顺铂、奥沙利铂联合应用治疗卵巢癌、食管癌、贲门癌、生殖细胞肿瘤有协同作用,但涉及到顺铂、奥沙利铂静脉联合应用治疗胃癌的临床和基础研究很少。DDP、OXA、5-FU是临床胃癌化疗方案中的常用药物,PF方案是胃癌一线基础治疗方案,但是药物毒性限制了铂类临床大剂量应用。本研究以多种实验方法观察以DDP、OXA为主联合用药对胃癌细胞体外的抑瘤活性和诱导凋亡能力,以及联合用药价值,为开发高效低毒的临床化疗方案提供科学的实验依据。材料与方法: 1.细胞:人胃癌细胞系BGC-823。 2.实验药物:奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)、顺铂(cis-dismine dichoroplatinum,DDP)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)。 ***比色法测定不同浓度的单药及联合用药处理后细胞的生长抑制率,并绘制生长曲线。 4.流式细胞仪检测细胞的周期分布。 5.免疫组化测定凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。 6.统计学处理:采用SPSS13.0统计软件,数据用均数士标准差((?)±s)表示,计量资料符合正态性,方差齐时多组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA),相同处理组前后的比较用配对t检验;P≤0.05具有显著性。结果: 1.不同浓度的OXA单药作用48h后,胃癌细胞生长受到不同程度的抑制,所有实验组与对照组及不同浓度实验组之间OD值比较有显著差异(P＜0.05)。结果显示,OXA单药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。 2.不同浓度的OXA、DDP联合用药作用于胃癌细胞,所有实验组与对照组及各实验组之间OD值比较有显著差异(P＜0.05)。实验结果表明,OXA与DDP联合用药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。OXA联合DDP作用胃癌细胞48h后对细胞生长抑制率较OXA单药组增高,OXA的IC值下降。 3.不同浓度的OXA、DDP、5-FU联合用药作用于胃癌细胞,所有实验组与对照组及各实验组之间OD值比较有显著差异(P＜0.05)。实验结果表明,OXA、DDP与5-FU联合用药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。OXA、DDP联合5-FU作用胃癌细胞48h后对细胞生长抑制率较OXA单药组及OXA/DDP联合用药组增高(P＜0.05),OXA的IC值显著下降。 4.根据MTT结果绘制OXA单药及联合用药对胃癌细胞BGC-823的生长曲线:不同浓度的OXA单药及联合用药作用胃癌细胞48h的体外生长抑制曲线表明,对胃癌细胞的抑制作用均呈剂量依赖性,在相同摩尔浓度下,对细胞生长的抑制作用由强到弱为OXA/DDP/5-FU＞OXA/DDP＞OXA。 5.流式细胞仪检测OXA单药及联合用药对胃癌细胞BGC-823细胞周期变化:OXA单药处理细胞后,12,24,48h S期细胞为(21.40±0.46)%,(46.30±1.68)%,(64.93±0.68)%逐渐增加,表现为S期的阻滞。OXA、DDP联合处理细胞后,12,24,48h S期细胞为(31.67±0.72)%,(49.73±0,76)%,(81.80±0.96)%,G/M期细胞逐渐减少,表现

关键词：胃癌细胞周期凋亡奥沙利铂顺铂 5-氟尿嘧啶

希罗达联合多西他赛或伊立替康治疗晚期胃癌的临床对照研究

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中国综合临床 2008年第9期24卷 938-940页

作者：高明常方方周云郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052

目的比较多西他赛与伊立替康分别联合希罗达治疗晚期胃癌的近期疗效和不良反应。方法 65例患者随机分为两组，A组33例应用多西他赛联合希罗达，B组32例联合应用多西他赛、伊立替康和联合希罗达，均化疗2周期以上。结果 A组有效18例（54... 详细信息

目的比较多西他赛与伊立替康分别联合希罗达治疗晚期胃癌的近期疗效和不良反应。方法 65例患者随机分为两组，A组33例应用多西他赛联合希罗达，B组32例联合应用多西他赛、伊立替康和联合希罗达，均化疗2周期以上。结果 A组有效18例（54．54％），中位无进展生存期（PFS）为6．1个月；B组分别为17例（53．13％）和6．2个月（均P〉0．05）。A组贫血较重，B组腹泻较重。结论两种方案对晚期胃癌患者均有较好疗效且疗效相当，不良反应可以耐受。

关键词：晚期胃癌多西他赛伊立替康希罗达

奥沙利铂联合顺铂对体外培养BGC-823细胞增殖及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

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郑州大学学报(医学版) 2009年第2期44卷 359-362页

作者：常方方高明周云郑州大学第一附属医院肿瘤内科

目的:观察奥沙利铂(OXA)联合顺铂(DDP)对胃癌细胞BGC-823体外增殖和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法:采用MTT法测定OXA单药组(3.125、6.250、12.500、25.000mg/L)、DDP单药组(1.5625、3.1250、6.2500、12.5000mg/L)及联合组(3.125/1.5625、6.250/3.1250、12.500/6.2500、25.000/12.5000mg/L)对BGC-823细胞的体外生长抑制率。免疫细胞化学法检测联合用药(3.125/1.5625mg/L)和对照细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果:OXA、DDP单药组及联合组BGC-823细胞生长抑制率随着时间和浓度的增加逐渐增高(P均<0.01)。OXA、DDP单药作用于BGC-823细胞24、48、72h的IC50值分别为39.5、20.9、10.5mg/L和11.3、7.09、4.07mg/L,2者联合时24、48、72h的IC50值分别为14.68/7.33、6.27/3.14、3.48/1.74mg/L。经OXA(3.125mg/L)、DDP(1.5625mg/L)联合处理48h后,与对照组比较,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达降低[(37.4±2.4)%vs(73.7±2.2)%],Bax蛋白[(56.4±0.7)%vs(19.9±0.7)%]、Caspase-3蛋白[(40.9±1.6)%vs(9.5±1.6)%]表达升高(P均<0.001)。结论:DXA和DDP单药可抑制胃癌细胞BGC-823的生长,2者联合对胃癌细胞的抑制作用增强,其机制与通过线粒体途径激活下游的Caspase-3诱导细胞凋亡有关。

关键词：奥沙利铂顺铂胃癌细胞增殖 Bcl-2 Bax Caspase-3 BGC-823细胞体外

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罗红霉素的水杨基荧光酮荷移分光光度法测定

中国现代应用药学 2009年第8期26卷 664-667页

作者：李俊赵海明常方方李全民河南焦作师范高等专科学校河南焦作454000 河南焦作大学河南焦作454000 河南师范大学化学与环境科学学院河南新乡453007

目的测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量,增加质量控制和保证方法。方法利用罗红霉素与水杨基荧光酮(SAF)形成1∶1荷移络合物,应用分光光度法测定胶囊中罗红霉素含量。结果络合物的最大吸收波长是516nm,表观摩尔吸光系数ε为5.01×103L·... 详细信息

目的测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量,增加质量控制和保证方法。方法利用罗红霉素与水杨基荧光酮(SAF)形成1∶1荷移络合物,应用分光光度法测定胶囊中罗红霉素含量。结果络合物的最大吸收波长是516nm,表观摩尔吸光系数ε为5.01×103L·mol-1·cm-1,罗红霉素在33.5～217.6mg·L-1内符合比尔定律,RSD为0.64%(n=8),平均回收率为100.9%。结论方法简单、灵敏、准确,可作为该药的含量测定方法。

关键词：罗红霉素水杨基荧光酮荷移反应分光光度法

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新形势下国有企业纪检监察工作创新的研究

各界 2020年第20期 87-88页

作者：常方方山西国信文化旅游投资发展集团有限公司

面对当前全面改革的发展形势,国有企业纪检监察工作的开展要注重创新观念和方式,需要和新形势的工作要求相契合,从而才能真正保障国有企业的良好发展。基于此,本文先就新形势下国企纪检监察工作的作用和问题加以阐述,然后就工作创新的... 详细信息

面对当前全面改革的发展形势,国有企业纪检监察工作的开展要注重创新观念和方式,需要和新形势的工作要求相契合,从而才能真正保障国有企业的良好发展。基于此,本文先就新形势下国企纪检监察工作的作用和问题加以阐述,然后就工作创新的措施详细探究,希望能从理论层面就纪检监察工作创新的研究对实际工作开展有一定启示意义。

关键词：新形势纪检监察工作创新

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探析办公室做好纪检工作的重要意义

办公室业务 2021年第2期 50-51页

作者：常方方山西国信文化旅游投资发展集团有限公司

办公室在企事业单位不仅位置关键、责任重大且拥有广泛的职能,办公室做好纪检工作是角色使然、职能使然,因此,要发挥办公室的整体效能,综合使用多种方法,做好纪检工作,辅助科学决策,规范内部行为,协调外部关系,保障单位整体健康平稳发展。

关键词：办公室纪检工作意义