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金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素（PVL）对多形核粒细胞的影响

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金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素（PVL）对多形核粒细胞的影响

作者：常文娇安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是危害人民生命健康的超级细菌,产PV-杀白细胞毒素(PVL)的MRSA毒力增强,危害更广,可引起社区人群的严重感染。临床研究发现,产PVL的MRSA所引起的坏死性肺炎病情进展快,治疗困难,死亡率高,常伴有多... 详细信息

目的:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是危害人民生命健康的超级细菌,产PV-杀白细胞毒素(PVL)的MRSA毒力增强,危害更广,可引起社区人群的严重感染。临床研究发现,产PVL的MRSA所引起的坏死性肺炎病情进展快,治疗困难,死亡率高,常伴有多核形粒细胞(PMNs)在呼吸道表面聚集,发生严重的炎症反应,但其机制尚不清楚。本课题将诱导含重组表达载体的宿主菌表达,纯化获得重组PVL蛋白(rPVL),观察rPVL对人PMNs的杀伤作用,探讨rPVL对PMNs细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α表达的影响,并探讨其胞内信号传导通路,同时研究rPVL对不同种属来源的PMNs的杀伤作用,为阐释PVL的致病机制,寻求治疗PVL相关肺损伤的新靶点提供理论依据。方法:(1)异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含重组表达载体的大肠埃希菌(***) BL21(DE3)株,纯化后获得可溶性重组蛋白,Western blot对其鉴定。(2)从正常人外周血分离PMNs,分别加入6nmol/L,100nmol/L rPVL蛋白,共同孵育6h,台盼兰染色观察细胞活力,瑞氏吉姆萨染色观察细胞形态,透射电子显微镜观察细胞超微结构,流式细胞法检测细胞凋亡/坏死率。同时,分离人、新西兰白兔、BALB/c小鼠、C57/ BL6小鼠的PMNs,分别加入PBS和20nmol/L rPVL蛋白,共同孵育4h,台盼兰染色观察细胞活力,瑞氏吉姆萨染色观察细胞形态,流式细胞法检测细胞凋亡/坏死率。(3)收集细胞,提取总RNA,应用RT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8、TNF-α、TLR2、TLR4、CD14 CXCR4及NF-κB p65 mRNA表达。同时收集细胞培养上清,ELISA法检测IL-6、IL-8及TNF-α浓度变化。结果:(1)经IPTG诱导后, SDS-PAGE鉴定可获得到与预期分子量相符的表达产物。亲和层析法纯化的rPVL-F和rPVL-S,经Western-blotting鉴定,能够被鼠源性抗His抗体识别。(2)rPVL作用后,台盼兰染色可见人、新西兰白兔及BALB/c小鼠的PMNs着色细胞增多,瑞氏吉姆萨染色可见细胞中出现不规则团块样物,核固缩,细胞形态缩小,部分细胞胞浆可见空泡,核碎裂。电镜检查可见rPVL作用后,细胞核固缩,胞浆空泡增多,并可见凋亡小体。流式细胞仪检测发现,相较之于PBS对照组,rPVL组细胞凋亡率和坏死率均明显升高,具有统计学意义。而C57/BL6小鼠的PMNs在rPVL作用前后,细胞活力、形态学及凋亡和坏死率均无变化。(3)rPVL作用PMNs后,细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α浓度及mRNA表达量明显增加,且随着浓度升高,增加更为明显。PMNs TLR2、TLR4及其相关信号通路分子CD14、CXCR4 mRNA表达量均增高。同时,PMNs NF-κB p65 mRNA表达量也明显增高。结论:(1)成功建立了PVL基因高效表达体系,经亲和层析纯化法可获得重组蛋白,为研究PVL分子致病机制奠定基础。(2)rPVL对人PMNs具有特异性杀伤作用,可诱导PMNs凋亡,甚至坏死,使得细胞活力减低,形态改变。同时,对不同种属来源的PMNs,显示出不同的杀伤作用。(3)rPVL能促进PMNs细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α的表达,同时,可上调PMNs TLR2、TLR4表达,提示rPVL可通过TLR信号传导通路,促进NF-κB活化,进而促进细胞因子的表达和分泌。

关键词：金黄色葡萄球菌 Panton-Valetine杀白细胞素多形核细胞(PMNs)

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染的基因分型及耐药性研究

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中华预防医学杂志 2010年第4期44卷 364-366页

作者：荚恒敏马筱玲常文娇杨凯安徽医科大学附属省立医院检验科合肥230001 安徽医科大学第二附属医院检验科

金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus，SA）是医学上重要的致病菌，在医院环境中广泛分布、致病力强，可引起皮肤黏膜及软组织的脓肿、中耳炎、关节炎、肺炎等临床常见的感染^[1-3]，也可以引起骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎和菌血症等... 详细信息

金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus，SA）是医学上重要的致病菌，在医院环境中广泛分布、致病力强，可引起皮肤黏膜及软组织的脓肿、中耳炎、关节炎、肺炎等临床常见的感染^[1-3]，也可以引起骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎和菌血症等严重感染^[4]。近年来，随着抗生素的广泛使用，其耐药现象日益严重，导致临床诊断和用药困难，

关键词：葡萄球菌医院感染金黄色葡萄球菌耐甲氧西林基因分型耐药性 aureus 临床诊断医院环境

NF—κB信号通路蛋白和细胞因子在金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素相关肺炎症性损伤中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 43-47页

作者：张翠萍马筱玲常文娇周馨安徽医科大学附属省立医院中心实验室合肥230001 安徽医科大学附属省立医院检验科合肥230001

目的探讨NF—κB信号通路蛋白和细胞因子在金黄色葡萄球菌PV杀白细胞毒素（PVL）介导的肺炎症性损伤中的变化和作用。方法取30只新西兰大白兔随机分为2组，每组各15只。rPVL组用重组PVL灌入，正常对照组使用PBS灌入。造模后，于3、6、9... 详细信息

目的探讨NF—κB信号通路蛋白和细胞因子在金黄色葡萄球菌PV杀白细胞毒素（PVL）介导的肺炎症性损伤中的变化和作用。方法取30只新西兰大白兔随机分为2组，每组各15只。rPVL组用重组PVL灌入，正常对照组使用PBS灌入。造模后，于3、6、9h处死兔，每个时间段5只，取肺组织做病理学检查；ELISA方法检测肺组织匀浆IL-6、IL-8、IL-10、TNF—α蛋白含量；免疫组织化学染色检测肺组织中NF—κBp65蛋白。结果rPVL组兔肺组织病理检查显示有弥漫性炎性细胞浸润、出血、水肿等肺损伤表现；肺组织匀浆中IL-6、IL-8、TNF—α含量随感染时间延长逐渐升高，IL-10含量于9h开始升高；NF-κBp65蛋白活化强度随感染时间延长逐渐增强。结论NF-κB信号通路蛋白激活及细胞因子大量释放是PVL相关肺损伤重要的发病机制之一，下调肺内NF-κB激活细胞数量有望成为治疗PVL相关肺损伤的途径。

关键词：金黄色葡萄球菌杀白细胞素细胞因子核转录因子-κB

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《到黑夜想你没办法》的地母形象探析

牡丹 2017年第8期 41-44页

作者：常文娇云南民族大学文学与传媒学院

由耕种土地的生产实践派生出了关于土地和女性、母亲相认同的神话类比,从而产生了"地母神"(Mother Earth)观念。地母以其子宫的生育释放功能孕育万物,以其乳房的滋养给予功能哺育众生,并以其腹腔藏污纳垢的功能包容一切,曹乃谦的《到黑... 详细信息

由耕种土地的生产实践派生出了关于土地和女性、母亲相认同的神话类比,从而产生了"地母神"(Mother Earth)观念。地母以其子宫的生育释放功能孕育万物,以其乳房的滋养给予功能哺育众生,并以其腹腔藏污纳垢的功能包容一切,曹乃谦的《到黑夜想你没办法——温家窑风景》(以下简称《到黑夜想你没办法》)所塑造出的一系列女性形象所具有

关键词：曹乃谦地母神藏污纳垢

金黄葡萄球菌杀白细胞素（PVL）对THP-1巨噬细胞IL-8、IL-6表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第10期31卷 875-880页

作者：周馨马筱玲常文娇张翠萍谢强安徽医科大学附属省立医院检验科合肥230001

目的研究金黄葡萄球菌杀白细胞素（panton-valentineleucocidin，PVL）对THP．1巨噬细胞Toll样受体4（TLR4）／核因子KB（NF-KB）信号通路及IL-8、IL-6的表达影响，探讨PVL相关肺组织损伤的致病机制。方法实验前用100nmol／L佛波酯（PM... 详细信息

目的研究金黄葡萄球菌杀白细胞素（panton-valentineleucocidin，PVL）对THP．1巨噬细胞Toll样受体4（TLR4）／核因子KB（NF-KB）信号通路及IL-8、IL-6的表达影响，探讨PVL相关肺组织损伤的致病机制。方法实验前用100nmol／L佛波酯（PMA）孵育THP-1细胞48h，使其诱导分化成巨噬细胞，同体外诱导PVL重组表达载体表达纯化的LukS-PVI。和***组分共同孵育，采用ELISA法检测细胞上清IL-8、IL-6蛋白的表达，RT-PCR法检测TLR4、IL-8和IL-6mRNA水平表达，免疫组化和Westernblot检测NF-KB的移位及其表达。结果rPVL能促进THP-1巨噬细胞分泌IL-6和IL-8，而且具有明显的浓度和时间依赖性。同时，rPVL能上调TLR4表达，活化***蛋白。结论PVL相关肺组织损伤机制可能与PVL激活TLR4／NF-KB信号通路，启动炎性因子大量释放有关。

关键词：杀白细胞素 THP-1巨噬细胞核因子.KB IL-8 IL-6

多形核粒细胞在金黄色葡萄球菌杀白细胞素相关肺炎性损伤中的作用

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中华传染病杂志 2012年第3期30卷 131-136页

作者：张翠萍马筱玲常文娇周馨安徽医科大学附属省立医院中心实验室合肥230001

目的探讨多形核粒细胞（PMN）在金黄色葡萄球菌Panton—Valentine杀白细胞素（PVL）介导的肺炎性损伤中的作用。方法取15只新西兰大白兔均分为3组，构建肺炎性损伤模型。对照组使用PBS灌肺，粒细胞正常兔直接用重组PVL灌肺（rPVL组），... 详细信息

目的探讨多形核粒细胞（PMN）在金黄色葡萄球菌Panton—Valentine杀白细胞素（PVL）介导的肺炎性损伤中的作用。方法取15只新西兰大白兔均分为3组，构建肺炎性损伤模型。对照组使用PBS灌肺，粒细胞正常兔直接用重组PVL灌肺（rPVL组），粒细胞减少症兔先用长春新碱（VCR）处理，再用rPVL灌肺（VCR＋rPVL组）。造模后9h，计数外周血和支气管肺泡灌洗液（BALF）中PMN，同时检测BALF上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量、肺通透指数（LPI），BALF中PMN凋亡率、坏死率、活性氧自由基（ROs）释放量。取肺组织检测肺湿干比，并进行病理学检查。组间比较采用t检验。结果rPVL组外周血PMN为（2．69±0．34）×10^6／mL，显著低于对照组的（3．63±0．38）×10^6／mL（t=4．12，P〈0．05）。对照组、rPVL组和VCR＋rPVL组BALF中PMN分别为（O．57±0．01）×10^6／mL、（3．01±0．02）×10^6／mL和（O．10±0．02）×10^6／mL，rPVL组显著高于对照组（t=254．39，P％0．05）。rPVL组兔LDH、LPI和肺湿重／干重比均显著高于对照组，但后者与VCR＋rPVL组比较，差异无统计学意义。rPVL组BALF中PMN晚期凋亡率和坏死率分别为（18．98±1．04）％、（63．56±3．53）％，对照组分别为（1．03±0．17）％、（0．95±0．33）％（t=8．24，39．48；均P〈0．05），VCR＋rPVL组凋亡率和坏死率分别为（1．17±0．24）％、（1．13±0．17）％。rPVL组、对照组和VCR＋rPVL组ROS分别为1．56±0．39、0．41±0．03和0．39±0．02，rPVL组明显升高（t=．58，P％0．05）。rPVL组肺组织有弥漫性炎性细胞浸润、出血、水肿，VCR＋rPVL组仅见支气管周围与肺泡间隔极少量炎性细胞浸润。结论rPVL可引起粒细胞正常兔肺炎性损伤，但对粒细胞减少症兔肺损伤极小。PVL引起肺炎性损伤可能是依赖PMN的招募和聚集，继而坏死和（或）激活，释放细胞毒素颗粒内容物和（或）活性氧代谢产物等。

关键词：葡萄球菌金黄色中性白细胞肺炎疾病模型动物

金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用

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安徽医科大学学报 2012年第12期47卷 1389-1392页

作者：周馨马筱玲常文娇张翠萍卜素谢强安徽医科大学附属省立医院检验科合肥230001 安徽医科大学附属省立医院中心实验室合肥230001

目的探讨金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素(PVL)对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用。方法采用CCK-8比色法检测重组PV-杀白细胞素(rPVL)对THP-1巨噬细胞活性的影响;应用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞凋亡/坏死率;用Western blot法检测rPV... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素(PVL)对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用。方法采用CCK-8比色法检测重组PV-杀白细胞素(rPVL)对THP-1巨噬细胞活性的影响;应用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞凋亡/坏死率;用Western blot法检测rPVL刺激THP-1巨噬细胞NF-κB的蛋白表达。结果随着rPVL对THP-1巨噬细胞作用的浓度和时间的增加,细胞活性进行性下降,在低浓度(5 nmol/L rPVL)以凋亡为主,在高浓度(40 nmol/L rPVL)以坏死为主,且具有时间依赖性。NF-κB的蛋白在高浓度(40 nmol/L rPVL)刺激下活化,2 h量表达最大,具有时间依赖性。结论 rPVL对THP-1细胞有毒性作用,低浓度诱导其凋亡、高浓度促进坏死,并能活化NF-κB的蛋白。

关键词： PV-杀白细胞素 THP-1巨噬细胞细胞凋亡 NF-κB

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阿尼玛原型视域下的鲁迅小说女性形象解读

阴山学刊 2018年第1期31卷 26-29页

作者：常文娇云南民族大学文学与传媒学院云南昆明650500

阿尼玛作为无意识的一个方面,深深地影响着人的精神生活。阿尼玛形象通常都是通过女人得到外向化,男性心中的阿尼玛原型决定了他们对于异性的情感投射,在阿尼玛原型的关照下可以更好地解读鲁迅小说中的女性形象所形成和表现的"无妻性"... 详细信息

阿尼玛作为无意识的一个方面,深深地影响着人的精神生活。阿尼玛形象通常都是通过女人得到外向化,男性心中的阿尼玛原型决定了他们对于异性的情感投射,在阿尼玛原型的关照下可以更好地解读鲁迅小说中的女性形象所形成和表现的"无妻性"特点。

关键词：鲁迅阿尼玛女性妻性

121株金黄色葡萄球菌临床分离株的分子流行病学及遗传学特征

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中华医院感染学杂志 2024年第3期34卷 321-326页

作者：何倩常文娇黄开泉张士杰安徽中医药大学第一附属医院医院感染管理科安徽合肥230031 中国科学技术大学附属第一医院检验科安徽合肥230001 安徽中医药大学第一附属医院医院临床研究实验中心安徽合肥230031

目的研究临床分离的金黄色葡萄球菌株的分子及遗传学特征.方法收集中国科学技术大学附属第一医院及安徽中医药大学第一附属医院2018-2019年临床检出的非重复金黄色葡萄球菌121株,检测其δ溶血、mecA基因、Agr系统分型、Spa分型等,并对me... 详细信息

目的研究临床分离的金黄色葡萄球菌株的分子及遗传学特征.方法收集中国科学技术大学附属第一医院及安徽中医药大学第一附属医院2018-2019年临床检出的非重复金黄色葡萄球菌121株,检测其δ溶血、mecA基因、Agr系统分型、Spa分型等,并对mec A基因阳性菌株进行SCCmec分型.结果121株金黄色葡萄球菌中有甲氧西林耐药菌株(MRSA)67株,甲氧西林敏感菌株(MSSA)54株;MRSA菌株主要携带Ⅲ型SCCmec元件(18,26.86%)和Ⅳ型SCCmec元件(24,35.82%);Agr系统主要为Ⅰ型和Ⅱ型;121株临床菌株中共有Spa类型54种,最为常见的是t437(15,12.40%)和t034(9,7.44%);在12株δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌中有11株(91.67%)为MRSA菌株,δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌携带的Agr系统类型主要为Ⅱ型(50.00%),携带的SCCmec元件主要为Ⅱ型(占58.33%),δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌中共有Spa类型8种,最为常见的是t18363(41.67%).结论本研究阐述了医院分离的金黄色葡萄球菌分子及遗传学特征信息,有助于追踪医院内流行性金黄色葡萄球菌株的出现、传播,并提供对临床感染控制策略.

关键词：金黄色葡萄球菌分子流行病学遗传学特征感染控制