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β-羟基丁酸通过激活TLR4/NF-κB通路诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应

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中国兽医学报 2023年第12期43卷 2546-2553页

作者：常仁旭杨青孙旭东徐闯湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业大学动物医学院北京100083

旨在探究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路在β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate,BHBA)诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应的分子作用机制。通过添加不同浓度的BHBA诱导奶牛乳腺上皮细胞MAC-T以模拟奶牛高酮血症中乳腺上皮细胞的炎性反应,并利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞42 h后加入3.6 mmol/L BHBA再处理24 h;通过RT-qPCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)和IL-6等炎性因子的表达变化,并采用Western blot法测定TLR4/NF-κB通路关键蛋白的相对表达水平。结果表明,与对照组相比,不同浓度BHBA处理后,乳腺上皮细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平升高,当BHBA浓度为1.2 mmol/L或以上时,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值和TRAF6蛋白水平显著升高,浓度为2.4 mmol/L或以上时,TLR4和MyD88蛋白表达量显著升高。此外,与Control siRNA+BHBA组相比,TLR4 siRNA+BHBA组的MAC-T细胞中的TLR4、MyD88和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低,TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达水平显著降低。以上结果表明,BHBA可通过激活TLR4/NF-κB信号通路促进炎症因子的转录,诱导乳腺上皮细胞的炎性反应,下调TLR4可减轻BHBA诱导的乳腺上皮细胞炎性损伤。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞 β-羟基丁酸 TLR4/NF-κB通路炎性反应

加味四君子汤对小鼠非酒精性脂肪肝的预防作用及其机制的研究

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加味四君子汤对小鼠非酒精性脂肪肝的预防作用及其机制的研究

作者：常仁旭黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是除酒精及其他明确的肝损伤因素所引起的一种肝脏病理综合征,在过去的几十年中,中草药作为NAFLD的潜在治疗药物受到越来越多的关注。本课题组谨遵中医药基本理论和前人研究成果,在四君子汤原方基础上进行药材及... 详细信息

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是除酒精及其他明确的肝损伤因素所引起的一种肝脏病理综合征,在过去的几十年中,中草药作为NAFLD的潜在治疗药物受到越来越多的关注。本课题组谨遵中医药基本理论和前人研究成果,在四君子汤原方基础上进行药材及用量的加减,组成新的复方中药-加味四君子汤(CHF)。本试验的目的是确定CHF对NAFLD的预防作用并探讨其作用机制,为后续NAFLD防治药物的研发提供新的思路。在本研究中,我们分别通过体内试验与体外试验两个方面探讨CHF对NAFLD的预防作用及其分子机制。一、在体内试验中:通过高脂日粮的饲喂来诱导小鼠NAFLD模型。选用50只健康雄性昆明小鼠,随机分为5组,其中对照组(CON)饲喂普通日粮,模型组(HFD)饲喂高脂日粮,CHF处理组在饲喂高脂日粮的同时通过灌胃方式用低浓度(HFD+L)、中浓度(HFD+M)和高浓度(HFD+H)CHF持续给药8 w。试验过程中每周对小鼠体重进行称量,试验结束后采集小鼠血液及肝脏;测定血液及肝脏中相关生化指标,并对ERs、NF-κB和SREBP-1c通路中关键蛋白及基因进行检测。二、在体外试验中:通过FFA对AML 12小鼠肝细胞的刺激来建立细胞模型。根据不同处理将试验分为5组:空白对照组(CON)不进行处理,模型组(FFA)细胞加入FFA进行诱导,CHF处理组在用FFA诱导的同时分别加入低浓度(FFA+L)、中浓度(FFA+M)和高浓度(FFA+H)CHF持续处理24 h。试验结束后收集细胞,对细胞内ERs、NF-κB和SREBP-1c通路中关键蛋白及基因进行检测。体内试验结果显示:1、不同浓度CHF的灌服对高脂饮食饲喂导致的小鼠肝脏空泡样变性、炎性浸润、脂沉积等病理变化具有改善作用。2、中浓度及高浓度CHF的灌服显著抑制了高脂饮食饲喂小鼠血清(P<0.001)及肝脏(P<0.05)中TC含量的增加。Western blot结果显示,与HFD组相比,各浓度CHF的灌服极显著抑制小鼠肝脏中SREBP-1c蛋白相对表达量的升高(P<0.001);同时,HFD+M(P<0.05)、HFD+H(P<0.001)组小鼠肝脏ACC1蛋白相对表达量以及HFD+L(P<0.05)、HFD+M(P<0.001)、HFD+H(P<0.001)组小鼠肝脏FAS蛋白相对表达量较HFD组显著下降。此外,各CHF灌服组小鼠肝脏内Fas、Acc1基因相对表达水平的变化与蛋白变化趋势基本一致。3、CHF的灌服能够改善小鼠肝脏内SOD、CAT活性及MDA水平的变化。Western blot结果表明,与HFD组相比,HFD+M(P<0.01)、HFD+H(P<0.01)组小鼠肝脏PERK蛋白相对表达水平极显著降低,HFD+L(P<0.01)、HFD+M(P<0.001)及HFD+H(P<0.001)组小鼠IRE1蛋白相对表达水平极显著降低,HFD+M及HFD+H组小鼠肝脏中CHOP蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。4、CHF的灌服对小鼠血清及肝脏内TNF-α、IL-6等炎性因子及AST、ALT等肝损伤指标的变化具有改善作用。Western blot结果表明,HFD+L(P<0.001)、HFD+M(P<0.001)和HFD+H(P<0.001)组小鼠肝脏中IKK-β蛋白相对表达量较HFD组极显著下降;高浓度CHF的灌服能够极显著抑制小鼠肝脏内NF-κB蛋白相对表达量的升高(P<0.05)。PCR结果显示,不同浓度CHF的灌服能够有效改善高脂饮食饲喂导致的小鼠肝脏内Iκb-α、Ikk-β基因相对表达量的变化。体外试验结果显示:CHF的处理能够有效预防FFA诱导细胞周围脂滴的沉积;同时,CHF显著抑制SREBP-1c通路中关键蛋白及基因的相对表达,有效抑制PERK、IRE1、CHOP蛋白相对表达量的变化;显著抑制细胞中NF-κB通路相关蛋白及基因相对表达量的变化。体外实验最终结果与体内实验基本一致。综上所述,我们通过体内试验与体外试验两个方面对加味四君子汤在NAFLD中的预防作用及其作用机制进行了研究,结果表明,加味四君子汤对小鼠NAFLD具有一定的预防作用,这种预防作用是通过对ERs、NF-κB和SREBP-1c途径中关键蛋白及基因的调控来实现的。

关键词： NAFLD 加味四君子汤 SREBP-1c NF-κB

孕酮对子宫蓄脓犬子宫内膜基质细胞增殖的影响

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动物医学进展 2023年第4期44卷 20-24页

作者：郭松扬念常仁旭陈指龙刘进辉杨青湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

旨在研究子宫蓄脓对犬子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)增殖的影响及孕酮(progesterone,P_(4))的干预作用。收集健康犬和经腹部B超确诊患子宫蓄脓犬的子宫,采用胶原酶消化法分离ESCs,并通过细胞免疫荧光检测进行鉴定;... 详细信息

旨在研究子宫蓄脓对犬子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)增殖的影响及孕酮(progesterone,P_(4))的干预作用。收集健康犬和经腹部B超确诊患子宫蓄脓犬的子宫,采用胶原酶消化法分离ESCs,并通过细胞免疫荧光检测进行鉴定;采用CCK-8法检测培养不同时间后两种ESCs的细胞活力及孕酮作用的影响。结果显示,胶原酶消化法可分离获得高纯度的犬ESCs;将分离的ESCs培养24 h和48 h时,子宫蓄脓犬ESCs的细胞活力显著高于健康犬(P0.05);作用48 h时,30 ng/mL的P_(4)可显著促进健康犬ESCs的增殖(P0.05)。以上结果表明,子宫蓄脓犬ESCs的快速增殖可能与子宫内膜的囊性增生密切相关,P_(4)可促进健康犬ESCs的增殖,但在一定程度上抑制子宫蓄脓犬ESCs的增殖。

关键词：犬子宫蓄脓子宫内膜基质细胞孕酮

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正交试验优化黄芩中黄芩苷超声提取工艺

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第11期 162-164页

作者：刘昊常仁旭陈博赵璧忱王新黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为了优化黄芩苷最佳超声提取工艺,试验采用正交试验设计,以黄芩苷得率作为考察指标,研究了料液比、超声功率、乙醇浓度、p H值4种因素对黄芩苷超声提取工艺的影响。结果表明:各因素对黄芩苷得率的影响从大到小依次为乙醇浓度、料液比、... 详细信息

为了优化黄芩苷最佳超声提取工艺,试验采用正交试验设计,以黄芩苷得率作为考察指标,研究了料液比、超声功率、乙醇浓度、p H值4种因素对黄芩苷超声提取工艺的影响。结果表明:各因素对黄芩苷得率的影响从大到小依次为乙醇浓度、料液比、p H值、超声功率;黄芩苷超声提取工艺最佳条件为,乙醇浓度为55%,料液比为1∶18,p H值为4.0,超声功率为59 k Hz,在此条件下黄芩苷提取物的得率可达16.52%。说明优化出的黄芩苷超声工艺稳定、可行,具有良好的提取效果。

关键词：黄芩黄芩苷正交试验提取工艺含量测定超声提取

加减当归芍药汤对小鼠最大耐受量及组织病理学观察

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2019年第1期40卷 51-56页

作者：常仁旭崔一喆徐闯陈媛媛杨威黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为验证新型中药组方加减当归芍药汤的安全性及为新药临床应用提供合理依据,以小鼠为研究对象,进行最大耐受量试验。在预试验中将40只小鼠分为中药高(2.0g·mL^(-1))、中(1.0g·mL^(-1))、低(0.5g·mL^(-1))浓度及对照组4组,各剂量组小... 详细信息

为验证新型中药组方加减当归芍药汤的安全性及为新药临床应用提供合理依据,以小鼠为研究对象,进行最大耐受量试验。在预试验中将40只小鼠分为中药高(2.0g·mL^(-1))、中(1.0g·mL^(-1))、低(0.5g·mL^(-1))浓度及对照组4组,各剂量组小鼠每日灌服相同剂量中药,连续7d,测定LD50值。最大耐受量试验时将20只小鼠随机分为2组,试验组小鼠每日灌服高浓度药液3次,对照组灌服相同剂量蒸馏水,灌胃持续7d,观察小鼠行为及脏器病理学变化。结果表明:2组小鼠各脏器无眼观病变,脏器指数无显著差异。病理切片显示,2组小鼠心脏、脾脏及肾脏结构正常,无明显病变;试验组小鼠可见肝静脉周围肝细胞部分变性;部分肺泡充血。小鼠对该组方的最大耐受量为120g·kg^(-1)。这一研究提示,该中药组方日常用量内安全无毒,但在临床上以高浓度服用时应注意其肺毒性及肝毒性。

关键词：当归芍药汤急性毒性最大耐受量病理变化安全性

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正交试验优化黄芩中黄芩苷水提酸沉工艺

中兽医医药杂志 2017年第4期36卷 59-61页

作者：刘昊常仁旭陈博赵璧忱王新黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为了探索黄芩中黄芩苷水提酸沉的最佳工艺,采用正交试验,以黄芩苷得率作为考察指标,考察提取时间、混悬液醇浓度、酸沉pH值3种因素对黄芩苷水提酸沉工艺的影响。结果表明,黄芩苷水提酸沉工艺最佳条件为提取时间3 h、混悬液醇浓度30%、酸... 详细信息

为了探索黄芩中黄芩苷水提酸沉的最佳工艺,采用正交试验,以黄芩苷得率作为考察指标,考察提取时间、混悬液醇浓度、酸沉pH值3种因素对黄芩苷水提酸沉工艺的影响。结果表明,黄芩苷水提酸沉工艺最佳条件为提取时间3 h、混悬液醇浓度30%、酸沉pH值2.0,此条件下黄芩苷提取物的得率可达9.758 8%。优化的黄芩苷最佳水提酸沉工艺操作简单、方法可行,为黄芩苷的工业化生产提供了理论参考。

关键词：黄芩苷提取工艺正交试验含量测定

加减补中益气汤对小鼠半数致死量及其最大耐受量下的毒理学观察

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黑龙江畜牧兽医 2019年第11期 127-131,183页

作者：常仁旭崔一喆徐闯陈媛媛杨威黑龙江八一农垦大学动物科技学院

为了进一步验证新型中药组方加减补中益气汤的安全性,进行小鼠半数致死量(LD(50))和最大耐受量试验。在测定LD_(50)试验中将40只小鼠分为中药高、中、低剂量组及对照组4组,中药组每日灌服等量的对应浓度的中药,对照组灌服相同剂量纯化水... 详细信息

为了进一步验证新型中药组方加减补中益气汤的安全性,进行小鼠半数致死量(LD(50))和最大耐受量试验。在测定LD_(50)试验中将40只小鼠分为中药高、中、低剂量组及对照组4组,中药组每日灌服等量的对应浓度的中药,对照组灌服相同剂量纯化水,连续7d,测定LD(50)。在最大耐受量试验中将20只小鼠随机分为两组,试验组每日3次灌服高浓度药液,对照组灌服相同剂量纯化水,连续7d。记录小鼠行为变化,计算心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的脏器指数,并观察小鼠脏器病理学改变。结果表明:在LD_(50)试验中,灌服各浓度中药均未导致小鼠死亡。在最大耐受量试验中,灌胃后两组小鼠行为、精神状态、采食量等无明显差异;解剖未见各脏器病变,小鼠心脏指数、肺脏指数及肾脏指数两组间差异不显著(P>0.05),肝脏指数差异极显著(P<0.01),脾脏指数差异显著(P<0.05);病理切片显示两组小鼠各脏器结构均正常,无明显病变;小鼠对加减补中益气汤耐受量为2.4g,为成人日常用量的240倍。说明该组方在日常服用剂量内对小鼠安全无毒,但在临床中若以极高剂量使用时应注意对肝脏、脾脏的影响。

关键词：补中益气汤新型中药组方最大耐受量组织病理学半数致死量毒理学

广藿香水提液对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化和改善胰岛素抵抗的作用

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中国兽医学报 2021年第11期41卷 2213-2218,2224页

作者：高海云常仁旭侯林彤岳学青徐闯崔一喆黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

本研究旨在探讨藿香(Pogostemon cablin,PC)水提取物在促进脂肪细胞分化和改善脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)中的作用。于诱导分化第1天,在3T3-L1前脂肪细胞培养板中加入不同质量浓度PC水提液(0.5,1.0,2.5,5.0 g/L),第8天,采用油红O染色和染... 详细信息

本研究旨在探讨藿香(Pogostemon cablin,PC)水提取物在促进脂肪细胞分化和改善脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)中的作用。于诱导分化第1天,在3T3-L1前脂肪细胞培养板中加入不同质量浓度PC水提液(0.5,1.0,2.5,5.0 g/L),第8天,采用油红O染色和染色比色法对3T3-L1脂肪细胞的脂质沉积进行观察和分析,通过ELISA检测细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)水平,Western blot测定过氧化物酶体增殖物激活的受体γ-2(peroxisome proliferator-activated receptor-γ2,PPARγ2)蛋白表达情况,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析PC对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测分化成熟的脂肪细胞的葡萄糖消耗情况。结果表明,PC水提液能抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖(P<0.01),并促进细胞向成熟脂肪细胞分化(P<0.05)。随着PC质量浓度的增加,3T3-L1前脂肪细胞内脂质沉积逐渐增加,TG水平逐渐上升(P<0.05)。与诱导分化组比较,PC水提液组(1.0,2.5 g/L)PPARγ2蛋白表达显著上升(P<0.05)。与成熟3T3-L1脂肪细胞IR组对比发现,PC能极显著促进成熟脂肪细胞的葡萄糖消耗(P<0.01),改善IR。结果表明,PC可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖并促进其分化,促进细胞内脂滴的积累并调节糖脂代谢,从而改善IR。

关键词：广藿香 3T3-L1前脂肪细胞脂质积累胰岛素抵抗

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黄芩苷提取工艺的筛选

现代畜牧兽医 2017年第5期 15-18页

作者：常仁旭陈博赵璧忱王新黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

本研究比较了不同提取方法对黄芩中黄芩苷的提取效果,采用煎煮法、超声法与微波法提取了黄芩中的黄芩苷,通过分光光度计法测定了黄芩苷的含量,比较了3种提取方法的提取效果。结果表明,超声法、煎煮法与微波法提取的黄芩苷含量分别为95.... 详细信息

本研究比较了不同提取方法对黄芩中黄芩苷的提取效果,采用煎煮法、超声法与微波法提取了黄芩中的黄芩苷,通过分光光度计法测定了黄芩苷的含量,比较了3种提取方法的提取效果。结果表明,超声法、煎煮法与微波法提取的黄芩苷含量分别为95.24%、90.15%和86.95%;超声法、煎煮法与微波法提取的黄芩苷得率分别为10.55%、5.46%和4.89%。超声法提取的黄芩苷得率高于煎煮法与微波法,含量接近于黄芩苷标准品含量。

关键词：黄芩苷煎煮法超声法微波法提取工艺