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麝香百合花发育基因LLGLO1在花蕾中的时空表达

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园艺学报 2012年第3期39卷 533-538页

作者：席梦利潘梅施季森徐进南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

为了获得百合花发育相关的B功能基因LLGLO1在调控百合花发育过程中的重要信息,以麝香百合(Lilium longiflorum)未开放的花蕾为试材,以LLGLO1基因的特异片段为探针,应用RNA原位杂交技术,对LLGLO1基因在花发育各个阶段的时空表达动态进行... 详细信息

为了获得百合花发育相关的B功能基因LLGLO1在调控百合花发育过程中的重要信息,以麝香百合(Lilium longiflorum)未开放的花蕾为试材,以LLGLO1基因的特异片段为探针,应用RNA原位杂交技术,对LLGLO1基因在花发育各个阶段的时空表达动态进行了研究。结果表明,LLGLO1基因在外轮花被、内轮花被、雄蕊和心皮等4轮花器官中均有表达,但表达强度随不同的发育阶段而变化。长度2.0和3.0cm的花蕾中LLGLO1基因的表达量明显高于0.5和1.0cm的花蕾,说明随着花器官的发育成熟,该基因在各轮花器官中的表达量逐渐增加。

关键词：百合麝香百合花蕾花发育原位杂交 LLGLO1基因

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杉木成熟合子胚器官发生和体胚发生

林业科学 2006年第9期42卷 29-33,I0002页

作者：席梦利施季森南京林业大学国家林业局林木遗传和基因工程重点实验室南京210037

以杉木成熟合子胚为起始外植体,研究基本培养基、不同种类的细胞分裂素及生长素对杉木器官发生和体胚发生及不定芽生根的影响,并用石蜡切片法观察不定芽和体胚的发生和发育过程.结果表明：DCR＋6-BA 1.0mg·L-1＋TDZ 0.002 mg·L-1＋NAA... 详细信息

以杉木成熟合子胚为起始外植体,研究基本培养基、不同种类的细胞分裂素及生长素对杉木器官发生和体胚发生及不定芽生根的影响,并用石蜡切片法观察不定芽和体胚的发生和发育过程.结果表明：DCR＋6-BA 1.0mg·L-1＋TDZ 0.002 mg·L-1＋NAA 0.1 mg·L-1对成熟合子胚诱导不定芽最有效;DCR＋6-BA 1.0 mg·L-1＋TDZ 0.003mg·L-1＋NAA 0.1 mg·L-1是成熟合子胚诱导体胚的最佳培养基;不定芽在DCR基本培养基中可有效伸长;1/4MS＋IBA 0.2 mg·L-1＋NAA 0.1 mg·L-1对不定芽生根最有效.石蜡切片观察表明：不定芽有2种发生方式,一种是表皮及表皮下的3～4层细胞分生组织化发育而成,另一种是外植体内部的小维管束脱分化发育而成.2种发生方式均为直接器官发生途径.

关键词：杉木成熟合子胚器官发生体胚发生

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不同因素对农杆菌介导的杉木转化效率的影响

林业科学 2007年第3期43卷 46-50页

作者：席梦利施季森南京林业大学国家林业局林木遗传和基因工程重点实验室南京210037

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料，研究6个影响杉木遗传转化效果的因素，初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为：预培养1—3d，OD600 nm为0．1-0．4的菌液浸染10-15min，共培养3—5d，共培养基附加乙酰丁香酮（AS）80μmol·L^-... 详细信息

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料，研究6个影响杉木遗传转化效果的因素，初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为：预培养1—3d，OD600 nm为0．1-0．4的菌液浸染10-15min，共培养3—5d，共培养基附加乙酰丁香酮（AS）80μmol·L^-1，共培养后延迟3d筛选。在初次筛选培养基上共得到186个卡那霉素（Km）抗性芽，在二次筛选培养基上获得39个Km抗性芽。PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性，初步证明外源天麻抗真菌蛋白（GAFP）基因已整合到这2个Km抗性芽的基因组DNA中。

关键词：杉木农杆菌介导天麻抗真菌蛋白基因

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杉木遗传转化受体系统的建立

南京林业大学学报（自然科学版） 2006年第6期30卷 7-11页

作者：席梦利施季森国家林业局江苏省林木遗传和基因工程重点实验室(南京林业大学) 江苏南京210037

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为外植体,通过不同预培养时间及不同浓度6 BA、TDZ、头孢霉素、卡那霉素等处理,分析诸因素对茎段再生芽的影响,建立了以杉木茎段为外植体的高频再生系统。结果表明:DCR+6 BA(1.0 mg/L)+TDZ(0.001 mg/L)+NAA(0... 详细信息

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为外植体,通过不同预培养时间及不同浓度6 BA、TDZ、头孢霉素、卡那霉素等处理,分析诸因素对茎段再生芽的影响,建立了以杉木茎段为外植体的高频再生系统。结果表明:DCR+6 BA(1.0 mg/L)+TDZ(0.001 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)最适于杉木茎段诱导芽发生,预培养时间为2d时,芽诱导频率、平均芽数和芽形成能力最高。切片观察发现,茎段发生的芽多起源于茎段表面,是农杆菌容易抵达的位置,说明茎段附着农杆菌的细胞与再生芽的部位相一致。

关键词：杉木器官发生受体系统

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杉木合子胚愈伤组织的诱导及植株再生

南京林业大学学报（自然科学版） 2006年第2期30卷 6-10页

作者：席梦利施季森国家林业局江苏省林木遗传和基因工程重点实验室(南京林业大学) 江苏南京210037

以杉木成熟及未成熟合子胚为外植体，研究了基本培养基、植物激素、合子胚的发育阶段等因素对杉木愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明：1／2MS＋2mg／L 2，4-D＋1．0mg／L 6-BA＋1．0mg／L KT＋30g／L蔗糖是成熟合子胚诱导愈... 详细信息

以杉木成熟及未成熟合子胚为外植体，研究了基本培养基、植物激素、合子胚的发育阶段等因素对杉木愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明：1／2MS＋2mg／L 2，4-D＋1．0mg／L 6-BA＋1．0mg／L KT＋30g／L蔗糖是成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基；处于胚胎选择阶段或者组织与器官分化阶段的幼胚，能诱导出松软、晶莹透明的愈伤组织，诱导频率为2％～6％。成熟阶段的幼胚诱导出的愈伤组织的外观形态与成熟合子胚诱导出的愈伤组织相似，愈伤组织的诱导频率随着合子胚发育的成熟而迅速提高；DCR＋1．5mg／L 6-BA＋1．5mg／L KT＋20g／L蔗糖是诱导不定芽发生的最佳培养基。高约1．5cm的不定芽转入生根培养基，生根率可达100%。

关键词：杉木愈伤组织植株再生

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马尾松高效再生体系的建立(简报)

分子细胞生物学报 2006年第3期39卷 271-276页

作者：张宇卫志明席梦利施季森中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032 南京林业大学林木遗传育种与基因工程开放实验室南京210037

Pinus massoniana L. is one of the important trees for afforestation in South China. The efficient system of plant regeneration from mature zygotic embryos and seedlings of masson pine was established in this study. The influences of basal media, hormones and methods for buds induction, shoots elongation and rooting were studied. The results indicate that DCR medium with 0.5 mg/L BA and 0.05 mg/L IBA shows the highest differentiation rate of adventitious buds. Induction and multiplication of axillary buds take aseptic seedlings as explants. KT has better effect than BA on the axillary buds induction. The best axillary buds induction medium is DCR medium supplemented with 1 mg/L KT and 0.2 mg/L IBA. After culturing on GD medium with 0.1 mg/L BA and 0.2 mg/L IBA for elongation,the buds were transferred on the 1/2 GD medium with 2 mg/L IBA and 0.05 mg/L BA for adventitious roots induction. Paraffin slice indicates that the adventitious buds developed from the meristematic tissue of cotyledonary epicuticula.

关键词：马尾松成熟合子胚不定芽诱导腋芽增殖生根培养

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麝香百合LLGLO1基因的克隆和表达

植物生理学通讯 2006年第5期42卷 871-876页

作者：吴小萍席梦利施季森南京林业大学国家林业局和江苏省林木遗传与基因工程重点实验室南京210037

用RACE方法克隆的麝香百合花发育的GLOBOSA(GLO)类B功能基因LLGLO1,与其他多种单子叶植物的GLO类基因高度同源,且C区具有典型的PI结构基序。通过RT-PCR检测,百合不同组织中的LLGLO1基因表达模式与郁金香的GLO类基因相似。即主要集中在... 详细信息

用RACE方法克隆的麝香百合花发育的GLOBOSA(GLO)类B功能基因LLGLO1,与其他多种单子叶植物的GLO类基因高度同源,且C区具有典型的PI结构基序。通过RT-PCR检测,百合不同组织中的LLGLO1基因表达模式与郁金香的GLO类基因相似。即主要集中在百合第一、二、三轮花器官中表达,心皮和茎中有微量表达,而且随着心皮的成熟,其在心皮中的表达量逐渐增加,但在百合叶片中则未检测到LLGLO1的表达,因此认为LLGLO1在百合花器官中呈特异性表达。LLGLO1在百合第一轮花器官中的表达支持了vanTunen对ABC模型的修正。

关键词：麝香百合 ABC模型 GLOBOSA 基因表达

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喜树原形成层到形成层转化的研究

西北植物学报 1997年第5期17卷 83-87页

作者：席梦利包少康西南师范大学生物系重庆630715

观察了枣树茎中原形成层到形成层的转化过程。距茎端0．5mm处，节间开始伸长之前，横切面上4—5个原形成束及束间的分生组织组成原形成层环。径向切面观，原形成层环呈现出较均一的结构。随着节间开始伸长，由于原形成层细胞发生假横向... 详细信息

观察了枣树茎中原形成层到形成层的转化过程。距茎端0．5mm处，节间开始伸长之前，横切面上4—5个原形成束及束间的分生组织组成原形成层环。径向切面观，原形成层环呈现出较均一的结构。随着节间开始伸长，由于原形成层细胞发生假横向分裂，出现了长短两类细胞，长细胞多数端壁倾斜，短细胞多数端壁平截。以后，长细胞发育为纺缍状原始细胞，短细胞发育为射线原始细胞，部分射线原始细胞可以伸长井侵入生长而转化为纺缍状原始细胞。在节间伸长将停止时，此种转化基本完成。喜树为非叠生形成层，纺缍状原始细胞和射线原始细胞都有多核现象发生。

关键词：喜树原形成层形成层转化

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绣球染色体制片技术优化及rDNA物理定位

林业科学 2021年第11期57卷 59-67页

作者：郭瑞红邱帅刘光欣高凯魏建芬席梦利南京林业大学林木遗传与生物技术教育部重点实验室南京210037 杭州市园林绿化股份有限公司杭州310020

【目的】建立染色体形态良好、分裂相内染色体分散且无细胞质背景的绣球根尖高质量染色体制片技术,完善中期染色体45S rDNA和5S rDNA荧光原位杂交(FISH)技术体系,为深入开展绣球属植物分子细胞遗传学研究奠定基础。【方法】以绣球‘无... 详细信息

【目的】建立染色体形态良好、分裂相内染色体分散且无细胞质背景的绣球根尖高质量染色体制片技术,完善中期染色体45S rDNA和5S rDNA荧光原位杂交(FISH)技术体系,为深入开展绣球属植物分子细胞遗传学研究奠定基础。【方法】以绣球‘无尽夏’当年生半木质化枝条水培长出的幼嫩根尖为材料,分别采用1 MPa一氧化二氮(N2O)、0.7 mmol·L^(-1)环己酰胺、2 mmol·L^(-1)8-羟基喹啉对根尖进行不同时间预处理。预处理后的根尖分生组织在4%纤维素酶和2%果胶酶混合酶液中酶解后进行染色体制片。以45S rDNA和5S rDNA为探针,对中期染色体进行原位杂交。【结果】1)1 MPa一氧化二氮预处理的材料中,预处理0.5 h,大部分中期分裂相染色体较长,浓缩不充分;预处理1 h,染色体浓缩适当,大部分染色体的着丝粒位置可辨;预处理2 h,染色体浓缩过度,呈点状。0.7 mmol·L^(-1)环己酰胺预处理的材料中,预处理1 h和3 h,染色体偏长,浓缩不充分;预处理5 h,染色体浓缩适当,但着丝粒位置显示不明显。2 mmol·L^(-1)8-羟基喹啉预处理的材料中,2、4、6 h 3个时间梯度均可得到染色体浓缩适当的材料,各处理时间之间对染色体形态的影响差异并不明显,但着丝粒位置不可辨。综合考虑后认为,绣球根尖预处理的最适条件为1 MPa一氧化二氮预处理1 h。2)3个酶解时间梯度中,酶解0.5 h的染色体制片,中期分裂相和细胞核周围存在明显的细胞质残留;酶解1 h的染色体制片,中期分裂相背景干净、染色体分散程度好;酶解2 h的染色体制片,观察到很多不完整分裂相,分裂相间无法区分,染色体容易丢失。因此,绣球根尖分生组织在4%纤维素酶和2%果胶酶混合酶液中37℃酶解1 h比较合适。3)绣球‘无尽夏’是二倍体,染色体数目为36(2n=2x=36)。45S rDNA长、短探针的FISH效果相似,均产生很强的杂交信号,位点位于1对近端着丝粒染色体的短臂末端;5S rDNA长、短探针的FISH信号均较弱,长探针的检出率高于短探针,杂交信号位于1对端着丝粒染色体的长臂末端。【结论】成功建立绣球‘无尽夏’根尖高质量中期染色体制备及rDNA物理定位技术体系,该体系可高效确定绣球属植物的染色体数目及rDNA分布,为绣球属资源鉴定、杂交育种的亲本选配提供参考,从而指导绣球属植物的杂交育种实践。

关键词：绣球染色体制片 rDNA 荧光原位杂交(FISH)