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2019-nCoV入胞机制及其抑制剂的研究进展

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重庆医科大学学报 2020年第7期45卷 845-848页

作者：师悦嫄汪德强重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)与急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromes coronavirus,SARS-Co V)的核酸和编码的病毒蛋白高度同源,预示其生物学功能也可能非常相似。2019-nCoV利用其刺突蛋白(spike protein,S)的S1亚基与宿主细胞表面的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)受体结合,同时利用宿主蛋白酶切割S蛋白促进发生膜融合,进而内吞入胞。阻断2019-nCoV入胞过程的抑制剂主要可分为中和抗体/受体抑制剂、蛋白酶抑制剂和内吞调节因子抑制剂。目前,对2019-nCoV的认识仍然非常有限。相信随着研究的不断推进,能够更加深刻地认识病毒的致病机制,开发出更高效的抗病毒药物。

关键词：新型冠状病毒入胞机制入胞抑制剂

GRP78单抗多抗的制备鉴定及其免疫学检测方法的建立

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重庆医科大学学报 2020年第6期45卷 817-823页

作者：阳媛夏露露师悦嫄魏杰汪德强牛司强重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:制备与鉴定抗GRP78兔多克隆抗体与腹水型单克隆抗体,进一步建立可检测GRP78蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:利用课题组前期已经成功构建的pW28-GRP78重组质粒,IPTG诱导表达后经过Ni2+-NTA亲和层析柱分离纯化获得高纯度GRP78重组蛋... 详细信息

目的:制备与鉴定抗GRP78兔多克隆抗体与腹水型单克隆抗体,进一步建立可检测GRP78蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:利用课题组前期已经成功构建的pW28-GRP78重组质粒,IPTG诱导表达后经过Ni2+-NTA亲和层析柱分离纯化获得高纯度GRP78重组蛋白;获得的GRP78蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,辛酸-硫酸铵沉淀后DEAE离子交换层析法纯化;制备GRP78腹水型单克隆抗体并鉴定其亚型,Protein G亲合柱纯化;采用Western blot、免疫荧光、免疫组化等方法对获得的GRP78兔多抗与鼠单抗进行鉴定;建立一个可检测GRP78蛋白的双抗夹心ELISA免疫学方法。结果:高效获得高纯度GRP78重组蛋白,成功制备兔多抗,同时获取8株腹水型单克隆抗体,选择效价最高的McAb-1用于后续双抗夹心ELISA实验,McAb-1为G2a型;进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性;单抗作为捕获抗体,多抗作为检测抗体,HRP标记的羊抗兔酶标二抗,成功建立可检测人GRP78的双抗夹心ELISA方法,检测下限为152.3 ng/mL。结论:成功获取了高效价、高灵敏度及高特异性的GRP78兔多抗及腹水型鼠单抗,并在此基础上建立了可检测人GRP78蛋白的双抗体夹心ELISA检测系统,为GRP78的进一步研究奠定重要基础,具有良好的临床应用前景。

关键词： GRP78 多克隆抗体腹水型单克隆抗体鉴定双抗夹心ELISA

分化抑制因子1重组腺病毒的构建及其动物模型的建立

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重庆医科大学学报 2018年第1期43卷 6-12页

作者：魏杰张祥王石磊靳鑫阳媛师悦嫄牛司强汪德强重庆医科大学检验医学院重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:构建分化抑制因子-1(inhibitor 1 of differentiation,Id1)重组腺病毒(recombinant adenovirus,Rad),并建立Id1过表达的小鼠动物模型。方法:在HEK293细胞中将腺病毒重组质粒Ad Easy-Id1进行包装以获得Id1重组腺病毒(RAd-Id1);通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定腺病毒滴度;通过q RT-PCR和Western blot验证RAd-Id1感染的Hep G2细胞中的Id1过表达效果,用MTS比色法检测RAd-Id1对Hep G2细胞增殖的影响;通过尾静脉注射RAd-Id1的感染方式建立肝组织中过表达Id1的小鼠动物模型,病毒载量梯度实验分PBS空白组、RAd-GFP对照组及RAd-Id1实验组(n=5/组)以测定RAd-Id1感染小鼠的适合载量;病毒感染时间梯度实验每5 d检测1次为1组,共7组(n=5/组)以测定感染小鼠的适合时间;通过Western blot检测小鼠肝组织中Id1的过表达效果及甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达水平,再采用ELISA检测小鼠血清中Id1的免疫原性及AFP和CEA的表达情况。结果:成功包装获得RAdId1,测得其滴度为1.5×1011 GFU/m L;RAd-Id1感染Hep G2细胞48 h和72 h后,Id1的转录和蛋白水平均明显升高(P0.05)。结论:成功构建了RAdId1及其介导的小鼠动物模型;RAd-Id1可作为细胞水平上研究Id1对肝癌影响的载体工具;AFP和CEA的升高提示Id1可能参与诱导AFP和CEA的表达。

关键词：重组腺病毒分化抑制因子1 肝癌动物模型

14-3-3家族在HBV复制的肝癌细胞中的表达研究

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重庆医科大学学报 2017年第7期42卷 781-786页

作者：张祥魏杰靳鑫王石磊阳媛师悦嫄牛司强汪德强重庆医科大学检验医学院重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达。方法:运用q RT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;q RT-PCR、Western blot检测HBV复制在Hep G2细胞中对14-3-3ζ表达的... 详细信息

目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达。方法:运用q RT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;q RT-PCR、Western blot检测HBV复制在Hep G2细胞中对14-3-3ζ表达的影响;Western blot检测HBV复制在小鼠肝组织中对14-3-3ζ表达的影响。结果:在Hep G2.2.15中,14-3-3η、γ、ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep G2对照组明显增加(m RNA:t=16.5、27.86、17.23,P=0.000、0.000、0.000;蛋白:t=35.7、16.97、22.51,P=0.000、0.000、0.000);在Hep AD38(Tet-)中只有14-3-3ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep AD38(Tet+)对照组明显增加(m RNA:t=14.27,P=0.000;蛋白:t=12.11,P=0.000);HBV复制能使Hep G2中14-3-3ζm RNA和蛋白的表达显著升高(m RNA:F=98.8,P=0.000;蛋白:F=118.3,P=0.000);HBV复制能使小鼠肝组织中14-3-3ζ蛋白的表达显著升高(F=109.4,P=0.000)。结论:HBV可以促进肝癌细胞内14-3-3η、γ、ζ的表达,这一发现为控制HBV感染的治疗策略提供新的靶点。

关键词：乙型肝炎病毒 14-3-3ζ 14-3-3家族

葡萄糖调节蛋白GRP78与HBV的PreS1相互作用位点的初步研究

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重庆医科大学学报 2018年第1期43卷 47-52页

作者：靳鑫王石磊吴爽张祥魏杰阳媛师悦嫄牛司强汪德强重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:初步研究78 k D的葡萄糖调节蛋白(the 78 k D glucose-regulated protein,GRP78)与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的前S1蛋白(Pre S1)的相互作用位点。方法:利用PCR技术扩增GRP78的基因,将扩增的目的基因克隆至p W28载体质粒... 详细信息

目的:初步研究78 k D的葡萄糖调节蛋白(the 78 k D glucose-regulated protein,GRP78)与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的前S1蛋白(Pre S1)的相互作用位点。方法:利用PCR技术扩增GRP78的基因,将扩增的目的基因克隆至p W28载体质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli,***)B834中表达,经过镍离子亲和层析柱纯化GRP78蛋白;将Pre S1 3个截短片段的重组质粒(p GST-Pre S1-X1/X2/X3)在B834中表达后,经过GST亲和层析柱纯化相应蛋白;利用蛋白质体外结合实验(pull down)、微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)检测GRP78与Pre S1 3个截短片段的相互作用。结果:成功构建重组质粒p W28-GRP78;获得GRP78蛋白及Pre S1 3个截短片段的融合蛋白;pull down及MST实验验证了GRP78可以与Pre S1的3个片段结合,且GRP78与GST-Pre S1-X1结合效果最好。结论:利用分子克隆技术及蛋白质表达纯化技术,获得GRP78蛋白及Pre S1截短片段的融合蛋白,并初步筛选了Pre S1与GRP78的相互作用位点,为后续研究打基础。

关键词：葡萄糖调节蛋白前S1蛋白蛋白质体外结合实验微量热泳动

乙型肝炎病毒复制对肝细胞Id家族表达的影响

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重庆医科大学学报 2019年第11期44卷 1439-1446页

作者：王石磊汪德强魏杰靳鑫阳媛师悦嫄夏露露牛司强重庆市中医院皮肤美容科重庆400021 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

目的:研究肝细胞中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制对分化抑制因子(inhibitor of differentiation,Id)家族表达的影响。方法:利用q RT-PCR、Western blot检测分析Id家族在HBV瞬时或稳定复制的肝癌细胞中表达水平的变化,并在HB... 详细信息

目的:研究肝细胞中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制对分化抑制因子(inhibitor of differentiation,Id)家族表达的影响。方法:利用q RT-PCR、Western blot检测分析Id家族在HBV瞬时或稳定复制的肝癌细胞中表达水平的变化,并在HBV复制质粒PCH9-HBV1.1转染的正常肝细胞和HBV转基因小鼠肝组织细胞模型中进一步验证。将乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(hepatitis B virus DNA polymerase,HBp)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染HepG2细胞,检测各组与载体对照组细胞中Id家族表达水平的变化,分析比较乙肝病毒编码的4种蛋白对Id家族的调控作用。利用荧光素酶报告基因检测病毒各组分蛋白对Id蛋白启动子活性的影响。结果:瞬时转染HBV表达质粒的HepG2细胞较对照组细胞,Id1、Id3的mRNA和蛋白表达水平均降低(mRNA:t=3.952、3.189,P=0.017、0.033;蛋白:t=10.532、4.155,P=0.000、0.014);HepG2.2.15中Id1、Id3 mRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组均下降(m RNA:t=5.553、7.211,P=0.005、0.002;蛋白:t=4.193、3.849,P=0.014、0.018);HepAD38(Tet-)中Id1、Id3蛋白的表达量较HepAD38(Tet+)组均降低(t=3.052、3.712,P=0.038、0.021)。同时,HBV的复制可以抑制LO2细胞及小鼠肝组织中Id1、Id3的表达(mRNA:t=14.564、3.281、3.489、3.495,P=0.000、0.030、0.025、0.025;蛋白:t=5.651、5.336、4.948、5.149,P=0.005、0.006、0.008、0.007)。转染HBV病毒各编码蛋白质粒的HepG2细胞中,HBc组Id1、Id3较载体对照组的mRNA表达水平降低最明显(77.7%、76.2%,F=9.945、37.528,t=6.481、10.915,P=0.000、0.000),Western blot结果显示HBx组Id1、Id3蛋白表达量下降最明显(86.2%、68.4%,F=38.225、7.159,t=12.550、5.295,P=0.000、0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,HBc组Id1、Id3启动子活性较对照组降幅最大(62.2%、56.3%,F=16.530、5.210,t=5.442、3.222,P=0.000、0.019)。结论:乙型肝炎病毒可以抑制肝组织、细胞中Id1及Id3的表达,其中HBc对Id1、Id3 m RNA的下调最明显,HBx则对Id1、Id3蛋白水平上的抑制作用最明显。

关键词：乙型肝炎病毒 Id家族乙型肝炎病毒C蛋白乙型肝炎病毒X蛋白

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韩国汉籍《方言类释》所附《中州乡语》考源

中国语文 2024年第4期 465-470,512页

作者：曹嫄南京师范大学文学院南京

韩国汉文辞书《方言类释》是一部多语多译的词汇集,其中所附《中州乡语》记录了当时中国多个省份的方言词。有学者据此评价该书记录了七大汉语方言和八大官话,是一份难得的方言学域外文献。我们经过考索发现,《中州乡语》抄撮自中土文... 详细信息

韩国汉文辞书《方言类释》是一部多语多译的词汇集,其中所附《中州乡语》记录了当时中国多个省份的方言词。有学者据此评价该书记录了七大汉语方言和八大官话,是一份难得的方言学域外文献。我们经过考索发现,《中州乡语》抄撮自中土文献《古今图书集成》,并非韩国学者原创。目前学界对《中州乡语》文献性质的判断、学术价值的评价以及所收词语方言属性的分析均值得商榷。

关键词：《方言类释》《中州乡语》《古今图书集成》

基于深度学习的下行大规模MIMO OFDM系统的1比特预编码算法

维普期刊数据库评论

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电子与信息学报 2024年第3期46卷 886-894页

作者：周宸颢温利嫄钱骅康凯中国科学院上海高等研究院上海201210 中国科学院大学北京100049 上海科技大学信息科学与技术学院上海201210

大规模多输入多输出(MIMO)系统中通过在基站端配备数百根天线,在提高频谱利用效率的同时,也带来了系统成本的增加。本课题组之前提出了一种适用于下行大规模MIMO正交频分复用(OFDM)系统的收敛保证的多载波1比特预编码算法(CG-MC1bit),... 详细信息

大规模多输入多输出(MIMO)系统中通过在基站端配备数百根天线,在提高频谱利用效率的同时,也带来了系统成本的增加。本课题组之前提出了一种适用于下行大规模MIMO正交频分复用(OFDM)系统的收敛保证的多载波1比特预编码算法(CG-MC1bit),能够获得较优的系统性能,但相应的计算复杂度较高,阻碍了其在实时系统中的应用。为进一步解决大规模MIMO系统中的成本和功耗问题,该文提出了一个模型驱动的神经网络,在CG-MC1bit算法的基础上迭代展开(Unfolding)得到了一种更加高效的CG-MC1bit-Net算法。具体而言,将迭代算法展开为一个神经网络,并引入可训练的参数来替代前向传播中的高复杂性操作。实验结果表明,该方法能够自动更新参数,与传统的预编码算法相比,收敛速度更快,计算复杂度更低。

关键词：大规模多输入多输出预编码正交频分复用(OFDM) 迭代展开神经网络

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也谈《方言类释》所收方言词的释义问题

语言研究 2024年第3期44卷 123-127页

作者：曹嫄南京师范大学文学院南京210097

梅雪吟等《韩国朝鲜时代〈方言类释〉所收汉语方言词例释》一文考察了《方言类释》中8个方言词。文章就梅文“[月來][月隺]”“[衤頼][衤杀殳]”“利市”“硬雨”4个词语指出其在文献调查上的疏漏,并提出与其不同的观点。

关键词：《方言类释》方言词释义