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马铃薯甲虫抗药性分子检测及潜在治理措施的发掘

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马铃薯甲虫抗药性分子检测及潜在治理措施的发掘

作者：师晓琴南京农业大学

学位级别：硕士

马铃薯甲虫[Leptinotarsa decemlineata (Say)],属鞘翅目,叶甲科,是国际公认的毁灭性检疫害虫,也是我国对外重大检疫对象和重要外来入侵物种之一。马铃薯甲虫于上世纪90年代从哈萨克斯坦入侵中国,现分布于新疆维吾尔自治区北疆的大部分... 详细信息

马铃薯甲虫[Leptinotarsa decemlineata (Say)],属鞘翅目,叶甲科,是国际公认的毁灭性检疫害虫,也是我国对外重大检疫对象和重要外来入侵物种之一。马铃薯甲虫于上世纪90年代从哈萨克斯坦入侵中国,现分布于新疆维吾尔自治区北疆的大部分县(市)。马铃薯甲虫在新疆北疆严重为害马铃薯和茄子。化学防治是一种经济、高效的治理措施,但马铃薯甲虫极易对化学药剂产生抗药性。因此,监测其抗药性及研究其抗性机制十分重要和迫切。一、马铃薯甲虫抗药性的分子检测马铃薯甲虫乙酰胆碱酯酶AChE S291G突变和钠离子通道LdVssc1L1014F突变分别导致对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯的抗药性。采用改进的Bi-PASA技术,于2010年分别检测了新疆特克斯县、察布查尔县、昌吉市、乌鲁木齐市和奇台县马铃薯甲虫田间种群AChE S291G抗性突变,抗性纯合子(RR)和杂合子(RW)分别是17.6%和14.7%、50.6%和42.2%、49.9%和41.7%、51.3%和41.4%、以及44.8%和47.4%。检测了LdVssc1L1014F抗性突变,抗性纯合子(RR)和杂合子(RW)分别是5.8%和8.7%、36.1%和27.0%、41.8%和24.8%、12.2%和9.7%、以及7.9%和10.6%。用RT-PCR检测了察布查尔县、昌吉市、乌鲁木齐市和奇台县马铃薯甲虫田间种群共18头,未发现突变I392T,但是大多数马铃薯甲虫有突变S291G。这些数据显示,具有抗性突变纯合子MM的个体概率很高,含敏感纯合子WW的个体概率很低。二、不同靶标农药及其复配剂对马铃薯甲虫的毒力通过浸液法测定特克斯马铃薯甲虫2龄、3龄、4龄幼虫和成虫对硫丹的胃毒毒力。2龄的马铃薯甲虫对硫丹的胃毒毒力最大,3龄、4龄依次减小,成虫的最小。在LDso值水平,硫丹的相对毒力指数依次是698.4、247.7、11.4和1.0;在LD90值水平,硫丹的相对毒力指数依次是546.8、212.7、10.1和1.0。运用点滴法测定各农药不同比例混合物对马铃薯甲虫成虫的触杀毒力。硫丹和辛硫磷以1：24混合,CI显著小于1,表现为增效作用。硫丹和水胺硫磷以1：72和1：288比例混合,CI显著小于1,表现为增效作用。三、马铃薯甲虫细胞色素P450单加氧酶分子克隆及组织表达马铃薯甲虫转录组中,细胞色素P450超家族现已验证的基因片段共38条,并由P450国际委员会Nelson博士命名。为了全面分析马铃薯甲虫P450基因,我们综合了NCBI已有序列以及本实验室前期结果,发现马铃薯甲虫中CYP450属于人类对应基因的CYP2、CYP3、CYP4和线粒体CYP450群,共93个。其中CYP2群具有CYP18、CYP305、CYP306和CYP307家族基因各1个。CYP4群中包括CYP4家族、CYP350家族、CYP412家族和CYP413家族基因分别为20、3、2和1个。CYP3群中包括CYP6家族基因23个,CYP9家族基因17个,CYP345家族基因7个,CYP347家族基因1个。线粒体CYP450群中,CYP12、CYP49、CYP301、CYP302、CYP314、CYP315. CYP334和CYP353分别有7、1、2、1、1、1、1、1个。还发现三个未知的新基因CYP412a1、CYP412a2和CYP413al。利用RACE技术获得与蜕皮激素代谢相关CYP18al、CYP306a1、CYP307a1、CYP302a1、CYP314a1和CYP315a1基因的全长。四、马铃薯甲虫持家基因筛选及干扰蜕皮激素代谢相关P450基因产生的效应分析本章首先筛选了相对荧光定量PCR的2个内参基因ARF1和RP18。接着运用喂食表达dsRNA的大肠杆菌的方法,干扰马铃薯甲虫6个编码蜕皮激素代谢相关CYP18a1、CYP306a1、CYP307a1、CYP302a1、CYP314a1和CYP315a1的Cyp基因。Qpcr证实RNAi后,对应靶基因相对表达量均有明显的下调。这些基因被干扰后,严重影响了马铃薯甲虫的存活率,存活个体体重、化蛹率和发育历期。喂食表达dsRNA大肠杆菌的同时用点滴法给马铃薯甲虫施加20-羟基蜕皮酮(20E)或蜕皮激素类似物氯虫酰肼后(Hal),可以部分补偿蜕皮激素合成相关酶基因被干扰后的不利影响,加重蜕皮激素降解酶被干扰后的不利影响。这一方法的成功,为基因的功能验证及RNAi方法的田间应用奠定了基础。

关键词：马铃薯甲虫乙酰胆碱酯酶复配剂细胞色素P450 蜕皮激素

同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗食管癌的疗效及毒副反应分析

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同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗食管癌的疗效及毒副反应分析

作者：师将兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗食管癌的疗效及毒副反应分析。方法:前瞻性、随机选取2016-2017年8月72例在西安市第三医院进行治疗的食管癌患者作为研究对象,将其随机的划分为两组。对照组36例患者采用化疗灌注联合同步调强放疗... 详细信息

目的:探讨同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗食管癌的疗效及毒副反应分析。方法:前瞻性、随机选取2016-2017年8月72例在西安市第三医院进行治疗的食管癌患者作为研究对象,将其随机的划分为两组。对照组36例患者采用化疗灌注联合同步调强放疗,观察组36例患者应用同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗的方法。比较两组72例患者治疗时的疗效、生活质量、毒副反应以及总结影响预后因素。结果:和对照组相比,观察组的疗效、生活质量更好,存在统计学差异(P0.05)。观察两组患者各方面生存指标。结论:同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗食管癌患者可取得显著成效,毒副反应可耐受,可促使患者顺利完成治疗,可改善患者生活质量,制定治疗方案应考影响预后的相关因素。近年来我国人们饮食习惯发生了明显改变,吸烟人群、酗酒人群均较之前增加,加之食品卫生问题严峻,使得我国食管癌发病率越来越高。食管癌表现出治疗难度大,容易复发等特征。临床中,食管癌患者就诊时大多已到了中晚期,大部分患者往往失去了手术机会,而调强放疗是治疗食管癌的主要方式之一,但术后复发严重影响了手术疗效,单纯放射治疗虽可暂时缓解患者病情,但效果并不明显,近年来化疗灌注联合同步调强放疗已经成为治疗食管癌的主要方式,为了提高临床治疗水平,医学重点展开关于靶向治疗食管癌患者的研究[1～3]。食管癌的主要致癌因素是亚硝铵,常食用酸菜的人群以及长期吸烟人群食管癌发生率均较高,主要是因为亚硝胺等致癌物在患者体内积蓄逐渐积蓄,增加患者发病几率。食管癌是一个渐进过程,如酒精等刺激性物质会对食粘膜造成刺激使其受损,在长期酗酒、吸烟等因素影响下,食粘膜损害持续性和进行性加重。无论针对食管癌进行根治性手术或者进行术后放疗,患者的局部复发率很高,生活质量也受到明显的影响。随着近些年分子生物学的研究,我国与巴西联合研究出了尼妥珠单抗作为靶向治疗新型药物,并且其得到了多个前瞻性、多中心随机临床研究证实,几项一期和二期临床研究证实了尼妥珠单抗联合放射治疗的安全性。尼妥珠单抗联合放疗或放化疗在临床上已证明是有益的,可提高头颈癌患者的总体生存率(OS)和无进展生存率(PFS)。2008年11月至2010年7月,有关研究在得到中国国家食品药品监督管理局(CFDA)的批准进行了II期临床试验,其中II期(不能手术或拒绝手术)至IV期(仅锁骨上淋巴结转移)食管癌患者接受尼莫妥珠单抗联合放疗,此研究中的大多数患者以前拒绝化疗,而其他患者不能耐受化疗,多中心II期研究的目的是确定尼莫图单抗联合放疗治疗食管癌的安全性和疗效,该试验已在中国医学科学院癌症研究所和医院(CAMS)根据良好的临床实践进行注册,证实了尼妥珠单抗联合放疗可作为高效低毒的治疗方法对提高食管癌患者生存期以及生活质量有重要价值。据研究调查表明同步放化疗具有增加放疗敏感度、抗癌活性广、在肿瘤细胞内浓度高、毒性作用轻等特点。调强放疗使放射视野和靶区保持在同一形状,这种方法对正常组织照射量很小,还可对肿瘤区同步加量。加之通过采用癌细胞敏感、抗癌谱广以及无交叉耐药的常用联合化疗药物联合放疗可增强疗效。利用动脉灌注化疗复发进行局部的治疗,这样可很好的堵塞相应的肿瘤供血管阻塞,不会对患者产生明显的创伤,相应的手术时间较短,患者的耐受度也明显的提高,对附近的正常部位不会明显损害。为此本次研究选取2016年8月到2017年8月我方医院收治的336例食管癌患者采用同步放化疗联合尼妥珠单抗治疗的方式,获得了显著成效,相关研究情况如下。

关键词：预后放化疗毒副反应尼妥珠单抗食管癌

个体叙事与生活记忆 ——全民K歌用户的田野考察

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个体叙事与生活记忆 ——全民K歌用户的田野考察

作者：师满满云南大学

学位级别：硕士

新媒体的出现和发展,改变了信息的传播生态,信息传播的主体和途径更加多元。移动K歌类软件在这样的背景下产生,一方面,影响着人们传统的歌唱方式;另一方面,人们也在K歌实践中创造出了丰富的媒介内容。研究选定全民K歌手机APP为田野点,... 详细信息

新媒体的出现和发展,改变了信息的传播生态,信息传播的主体和途径更加多元。移动K歌类软件在这样的背景下产生,一方面,影响着人们传统的歌唱方式;另一方面,人们也在K歌实践中创造出了丰富的媒介内容。研究选定全民K歌手机APP为田野点,以其用户为调查对象,通过参与式观察、深度访谈和个案研究的方法展开。在重点梳理40份个案访谈的基础上发现,全民K歌手机APP区别于人们以往的唱歌实践,构建了一个以移动性、社交性、叙事性为特点的K歌场景。用户在该场景中以歌抒己、以歌会友、以歌记录,其K歌实践以“歌曲”为核心,围绕个体生活经验和日常生活习惯展开。由此,用户K歌实践的新场景也成为进行个体叙事的场景。用户的个体叙事围绕歌唱日常生活、完成K歌任务、回忆旧时经历展开,呈现出三种特征:媒介化,个体叙事的内容是日常生活的媒介化表达;日常化,以K歌实践为个体叙事的方式融入到用户的日常生活中;作品化,用户的个体叙事蕴涵着个体生命历程的点滴片段和情感体验,叙事文本具象为凝结用户生活记忆的音像作品。个体叙事建构的生活记忆,其本质上是个体的经验再现和认知。同时个体在K歌实践的过程中展开着社会交往,其生活记忆经由他者视角的叙事书写得到补充,并印刻着个体所处时代的烙印。生活记忆建构的过程受到个体媒介参与程度、媒介技术的渗透以及商业运营主体介入的影响。移动K歌类软件搭建的K歌场景成为特殊的记忆之场,提供了一个具备实在性、象征性、功能性的记忆空间。个体叙事建构的生活记忆是个体经验的自我表达及在社会交往中共同构建的意义网络,其指向为生活文化的记忆实践。媒介的变迁影响着记忆实践的秩序形态,在当前媒介化社会的语境下,个体的记忆实践呈现出新的秩序形态。

关键词：个体叙事生活记忆全民K歌用户

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绝顶好辣诱人香辣料理

丛书名：美味进行式

2008年

作者：桑师启周玥

本书内容包括：入门篇，代代相传的经典辣料理；品味篇，充满极至辛香滋味的辣料理鸡鸭禽肉篇；猪牛羊肉篇；水产海鲜篇……

ISBN: (纸本)7542740016

本书内容包括：入门篇，代代相传的经典辣料理；品味篇，充满极至辛香滋味的辣料理鸡鸭禽肉篇；猪牛羊肉篇；水产海鲜篇……

关键词：菜谱

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红雨集思想文艺杂谈

红雨集思想文艺杂谈

1960年

作者：师田手

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井震联合薄储层沉积微相表征实例研究

石油地球物理勘探 2016年第5期51卷 1002-1011,838-839页

作者：夏竹李中超贾瑞忠赵师权熊运斌张胜中国石油东方地球物理公司油藏地球物理研究中心河北涿州072751 中国石化中原油田分公司勘探开发研究院河南濮阳457001

油田开发中晚期阶段对薄储层沉积微相精细描述的要求更高,采取井震联合手段、半定量或定量地描述是必然趋势。本研究以地质统计学及平面插值算法为数学工具,分别探讨了井点离散型沉积相数据与连续型砂地比数据的互换关系、地震属性与井... 详细信息

油田开发中晚期阶段对薄储层沉积微相精细描述的要求更高,采取井震联合手段、半定量或定量地描述是必然趋势。本研究以地质统计学及平面插值算法为数学工具,分别探讨了井点离散型沉积相数据与连续型砂地比数据的互换关系、地震属性与井点砂地比参数的相关性、敏感地震属性的优选等;同时,建立了储层目标砂地比预测模型,并依据模型相关度,选择合适的平面插值算法进行砂地比成图;最后,利用砂地比与薄储层沉积微相的转换模式,结合单井相及沉积背景,获得了相对合理的薄储层单元沉积微相地质成果平面表征图件。通过研究区实际应用与验证,取得了良好的应用效果,也形成了一套较可行的井震联合储层特征精细描述的研究思路与技术流程。

关键词：井震联合薄储层沉积微相地质统计学敏感属性优选平面插值