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TGEV单克隆抗体的制备及检测方法的建立

TGEV单克隆抗体的制备及检测方法的建立

作者：师一鸣东北农业大学

学位级别：硕士

猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of pigs,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis virus of swine,TGEV)引起的一种高度接触性的消化道传染性疾病,多发于冬春季,主要临床症状为腹泻和呕吐,仔猪感染... 详细信息

猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of pigs,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis virus of swine,TGEV)引起的一种高度接触性的消化道传染性疾病,多发于冬春季,主要临床症状为腹泻和呕吐,仔猪感染后死亡率达到70%以上,造成了严重的经济损失。因此,在感染初期对TGE快速准确的诊断,是至关重要的。通过对TGE抗原和抗体检测方法的研究,可以更好的防控疫情。本实验通过超速离心和蔗糖密度梯度离心对TGEV进行纯化,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后细胞融合,通过间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法对阳性细胞进行克隆,4次亚克隆后获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,分别为3G11、1D6、2E5和5D1。通过Western blot发现4株单抗均是特异性针对TGEV-N蛋白;4株细胞中,3G11、2E5和5D1的亚类均为IgG,1D6的亚类为IgM;间接免疫荧光实验鉴定4株单抗均能与感染TGEV的细胞结合;特异性反应实验中,4株单抗与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)和II型猪圆环病毒(PCV2)均不反应。用BALB/c小鼠制备3G11单抗细胞的腹水,通过纯化柱对腹水进行纯化,测定效价为10。用实验室保存的TGEV-N蛋白单抗E10F10D5和本研究制备的3G11单抗建立了双抗体夹心ELISA检测方法。与传统的双抗体夹心ELISA相比,本实验将检测抗体3G11与HRP进行偶联,省去了酶标二抗的孵育,减少了操作步骤和时间。通过对反应条件的摸索和优化,确定了当E10F10D5单抗包被浓度为4μg/mL,HRP-3G11单抗工作浓度为1∶800稀释时,检测效果最佳。而且处理粪便样品时,不需要加入病毒裂解液,只需混匀冻融即可。通过进一步的分析,证实该方法有良好的特异性、敏感性和重复性,临床样品检测的符合率达到92.6%,可以用于临床检测。本实验还用HRP标记的3G11单抗建立了检测组织中病毒的免疫酶组织化学法。为了确定HRP标记的3G11单抗是否可用于检测组织病料中感染的TGEV,首先通过细胞培养的TGEV检测病毒与HRP-3G11的反应情况,结果可见HRP-3G11单抗可以特异性与TGEV结合。通过对一周龄仔猪攻毒感染TGEV,分别取十二指肠、空肠和回肠,用HRP标记的3G11抗体作为一抗,建立了检测病料组织中TGEV的免疫酶组织化学法。与未标记抗体的检测结果比较没有明显差异,表明HRP标记的3G11单抗可以用于小肠组织中TGEV的检测。为建立检测TGEV抗体的间接ELISA方法,对实验室保存的表达TGEV-N蛋白的菌种pProExHTb-TGEV-N/BL21进行活化,诱导表达并纯化了TGEV-N蛋白,用纯化的蛋白作为包被抗原,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法。优化后的反应条件为包被抗原浓度0.5μg/mL,最佳封闭时间为37℃1 h,血清样品最佳检测的稀释度为1∶160,作用时间为37℃1 h,二抗HRP标记的兔抗猪IgG最佳作用时间为37℃45 min。该方法可以特异性的检测TGEV阳性血清,有良好的敏感性和重复性,可用于临床上TGEV抗体的检测。综上,本实验利用HRP标记的3G11单克隆抗体,建立了检测TGEV粪便病料的双抗体夹心ELISA方法和检测组织病料的免疫酶组织化学方法;利用纯化的TGEV-N蛋白,建立了检测TGEV抗体的间接ELISA方法。这三种检测方法的建立为临床上TGE的有效防控奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA 免疫酶组织化学法间接ELISA

2021—2022年规模化猪场主要疫病抗体统计分析报告

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猪业科学 2023年第4期40卷 100-101页

作者：孙建宏关野陶启蒙闫丽辉闫平师一鸣周蔷吴仪刘爽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物卫生检测中心黑龙江哈尔滨150030

随着我国规模化猪场的增加、养猪水平的提高,猪场越来越重视猪群抗体水平的监测,根据实验室检测结果指导猪场疫病科学防控和猪场生产,为健康养殖提供科学依据和数据支持,提高猪场生产效益。我们对2021.9—2022.8哈兽研动物卫生检测中心... 详细信息

随着我国规模化猪场的增加、养猪水平的提高,猪场越来越重视猪群抗体水平的监测,根据实验室检测结果指导猪场疫病科学防控和猪场生产,为健康养殖提供科学依据和数据支持,提高猪场生产效益。我们对2021.9—2022.8哈兽研动物卫生检测中心检测的我国河南以北的北方地区背景清楚的规模化猪场血清样品的猪瘟、蓝耳病、伪狂犬和口蹄疫病毒O型ELISA抗体检验结果进行了统计分析,为猪场疫病防控提供参考。

关键词：规模化猪场口蹄疫病毒哈兽研科学防控蓝耳病血清样品健康养殖主要疫病

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猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的制备及其在检测组织中病毒的初步应用

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畜牧与兽医 2022年第10期54卷 74-80页

作者：徐明丽师一鸣张柳王晓娜周晗单智夫崔文姜艳平王丽乔薪瑗李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制重点实验室黑龙江哈尔滨150030

旨在建立一种在感染初期对猪传染性胃肠炎(TGE)进行快速准确诊断的方法。本试验使用猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)经蔗糖梯度离心后用于免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经4次亚克隆及Western blot、间接免疫荧光(IFA)鉴定后筛选出1株能够稳... 详细信息

旨在建立一种在感染初期对猪传染性胃肠炎(TGE)进行快速准确诊断的方法。本试验使用猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)经蔗糖梯度离心后用于免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经4次亚克隆及Western blot、间接免疫荧光(IFA)鉴定后筛选出1株能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3G11。通过试剂盒将3G11单抗与辣根过氧化物酶(HRP)偶联,然后以HRP-3G11作为一抗,利用免疫酶组织化学法检测小肠组织病料中的TGEV。结果表明:HRP-3G11作为一抗经镜检可见特异性红棕色沉淀,即HRP-3G11单抗可以与小肠组织中病毒发生特异结合,试验过程耗时少且可视化显色结果优于未标记一抗使用酶标二抗组,证实了标记后单抗HRP-3G11可以作为直接检测抗体应用于免疫酶组织化学法中检测用小肠组织中的TGEV。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体免疫酶组织化学法

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数字技术赋能旅游产业发展 017

数字技术赋能旅游产业发展

中小学教师情绪劳动、师生关系与工作投入的纵向作用机制——基于变量中心和个体中心的视角

人民日报

作者：陈一鸣谢亚宏曹师韵

随着人工智能、大数据等信息技术的快速发展，全球旅游业正加快数字化转型。本报记者近日调研发现，巴西、意大利、印度尼西亚等一些国家积极采取措施，借助数字技术打造沉浸式旅游新体验，开发在线文旅平台等新业态，并不断提升智能化... 详细信息

随着人工智能、大数据等信息技术的快速发展，全球旅游业正加快数字化转型。本报记者近日调研发现，巴西、意大利、印度尼西亚等一些国家积极采取措施，借助数字技术打造沉浸式旅游新体验，开发在线文旅平台等新业态，并不断提升智能化管理运营能力，通过数字技术赋能旅游产业?

关键词：旅游产业发展创意经济旅游业数字技术

来源： cnki报纸评论

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教育学报 2024年第2期20卷 92-105页

作者：胡莹莹杨一鸣张翠平王文静河南师范大学教育学部河南新乡453007 北京师范大学认知神经科学与学习国家重点实验室北京100875 教育部师德师风建设基地(北京师范大学) 北京100875

基于变量中心和个体中心的双重视角,探讨中小学教师情绪劳动对工作投入的影响,以及师生关系的中介作用。采用情绪劳动问卷、师生关系问卷和工作投入量表对829名中小学教师进行为期六个月的短期追踪问卷调查,结果发现:(1)T1表层行为显著... 详细信息

基于变量中心和个体中心的双重视角,探讨中小学教师情绪劳动对工作投入的影响,以及师生关系的中介作用。采用情绪劳动问卷、师生关系问卷和工作投入量表对829名中小学教师进行为期六个月的短期追踪问卷调查,结果发现:(1)T1表层行为显著负向预测T2工作投入,T1深层行为和自然行为则无法显著预测T2工作投入,T1师生关系在T1表层行为与T2工作投入之间具有部分中介作用,而在T1深层行为、自然行为与T2工作投入之间具有完全中介作用;(2)潜在剖面分析识别出4类不同的教师情绪劳动剖面,即自然展现组、低展现组、中等展现组和高展现组,其中自然展现组师生关系品质最佳,工作投入水平最高,并且各亚组分布受教师性别、是否班主任以及发展阶段等因素影响;(3)以自然展现组为参照组,T1师生关系在低展现组、中等展现组与T2工作投入之间分别具有完全中介和部分中介作用。研究结论为改善教师情绪劳动和提升教师工作投入的教育实践提供了理论依据,为助力教育的情感转向和教师队伍建设提供了新视角。

关键词：情绪劳动工作投入师生关系中小学教师潜在剖面分析

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AI辅助设计工具在平面设计中的应用

玩具世界 2024年第5期 154-156页

作者：高一鸣天津工艺美术职业学院

20世纪50年代，科学界首次提出“人工智能”（artificial intelligence, AI）一词，随着互联网技术的不断发展，AI的应用领域越来越广泛，尤其是在设计领域。在当今的平面设计领域，AI辅助设计工具的重要性正日渐显现，其在平面设计领... 详细信息

20世纪50年代，科学界首次提出“人工智能”（artificial intelligence, AI）一词，随着互联网技术的不断发展，AI的应用领域越来越广泛，尤其是在设计领域。在当今的平面设计领域，AI辅助设计工具的重要性正日渐显现，其在平面设计领域的应用对设计师产生了深远的影响。借助于深度数据分析与前沿的机器学习算法，AI辅助设计工具正在赋能设计师们以更快速地孕育出革新的创意，并精细化他们的设计策略，同时大幅提高生产流程的效率。文章首先总结了AI辅助设计工具的优势，包括提高设计效率、改善创意、降低成本、打破专业壁垒，其次探讨了AI辅助设计工具在平面设计中的具体应用，包括在插图创作中的应用、在版式设计中的应用，最后分析了AI辅助设计工具在平面设计中的应用局限性。希望文章的研究为相关人员可以提供资料性参考。

关键词： AI辅助设计工具平面设计创新应用提高效率

淫羊藿苷对MC3T3-E1增殖及成骨分化的影响研究

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口腔颌面外科杂志 2023年第4期33卷 219-223页

作者：钱虹静刘钰莲张云鹏师一鸣黄光辉周也然罗光明昆明医科大学口腔医学院/医院云南省口腔医学院重点实验室云南昆明650106

目的:研究传统中药淫羊藿的主要活性成分淫羊藿苷(icariin,ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(preosteoblasts in mice calvarium,MC3T3-E1)的细胞活性及成骨分化的影响。方法:筛选出ICA的最佳干预浓度,将MC3T3-E1细胞分为空白对照组及不同浓度... 详细信息

目的:研究传统中药淫羊藿的主要活性成分淫羊藿苷(icariin,ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(preosteoblasts in mice calvarium,MC3T3-E1)的细胞活性及成骨分化的影响。方法:筛选出ICA的最佳干预浓度,将MC3T3-E1细胞分为空白对照组及不同浓度的实验组,实验组以含10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L的ICA完全培养液分别处理MC3T3-E1细胞。分别于培养2、4、6 d后用CCK8试剂盒检测MC3T3-E1细胞增殖能力;于培养3、6、9 d后用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测其ALP活性;根据检测结果,分别用完全培养液、成骨诱导液、含10-7 mol/L的ICA完全培养液处理MC3T3-E1细胞21 d后,再分别作茜素红染色。结果:与空白对照组相比,药物处理组明显抑制了MC3T3-E1细胞的增殖,但促进了MC3T3-E1细胞的ALP活性;而不同浓度的ICA培养的细胞对其钙结节的形成影响不明显。结论:在我们的实验条件下,ICA可能抑制了MC3T3-E1细胞的增殖,促进了MC3T3-E1细胞的成骨分化。

关键词：淫羊藿苷小鼠颅顶前成骨细胞增殖成骨分化

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安徽濉溪：“古琴声”萦绕嵇康故里

安徽濉溪：“古琴声”萦绕嵇康故里

面向智能交互产品的创意服务设计模式研究与构建

光明日报

作者：丁一鸣常河

濉水畔的古濉书院，百余年后，再度响起了悠扬的琴声。重修后的古濉书院雕梁画栋，古雅清幽。6月18日，“万世师表”匾额下，一堂古琴课正在进行。“同学们，你们知道古琴为什么长三尺六寸五分吗？因为这正对应着我们一年的光阴。而四... 详细信息

濉水畔的古濉书院，百余年后，再度响起了悠扬的琴声。重修后的古濉书院雕梁画栋，古雅清幽。6月18日，“万世师表”匾额下，一堂古琴课正在进行。“同学们，你们知道古琴为什么长三尺六寸五分吗？因为这正对应着我们一年的光阴。而四寸的宽度，则代表着一年四季……”古濉......

关键词：《广陵散》安徽濉溪

来源： cnki报纸评论

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包装工程 2024年第10期45卷 1-14页

作者：刘永红殷彦琳宋一鸣白翔天陈清霞湖南大学长沙410082 泉州湖南大学工业设计与机器智能创新研究院福建泉州362006 清华大学北京100084

目的探索数智时代下创意服务设计产业应用于智能交互产品创新的模式机制与路径。方法阐述创意服务产业时代的内涵与特征,梳理数字时代智能交互产品的创意服务需求,并从产品的品质创新需求、创新绩效提升需求和经济价值转化路径优化需求... 详细信息

目的探索数智时代下创意服务设计产业应用于智能交互产品创新的模式机制与路径。方法阐述创意服务产业时代的内涵与特征,梳理数字时代智能交互产品的创意服务需求,并从产品的品质创新需求、创新绩效提升需求和经济价值转化路径优化需求三个视角剖析创意服务设计模式的创新策略。结果提出“多元设计大数据创新-智能生成式设计工具优化-利益相关者协同设计平台重构”三段式创意服务设计模式,并结合案例进行分析。结论通过对创意服务设计的数据资源创新、设计工具的智能优化和协同创新的价值链重构,可有效提升智能交互产品设计结果的输出品质和数量,优化设计迭代周期,实现设计驱动的产品价值创新绩效和经济价值效益的双向提升。通过对知识生产力要素进行数智化整合重构,构建全链设计要素集成的智能辅助设计工具体系,提升设计师群体的创新能力,从而为社会经济价值提升带来强劲的可持续创新设计新动力。

关键词：设计大数据生产性服务业创意服务设计智能交互产品利益相关者协同设计平台生成式设计工具

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