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FUBP1表达升高诱导肾透明细胞癌形成及肿瘤增殖

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FUBP1表达升高诱导肾透明细胞癌形成及肿瘤增殖

作者：巫胜攀中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的:在泌尿外科肿瘤疾病中,肾癌发生率位于第二位,其中又以肾透明细胞癌(ccRCC)最为常见。由于缺乏有效的预测指标及治疗靶点,肾癌死亡率较高。采用生物芯片检测,筛选出ccRCC肿瘤组织及对应的瘤旁组织表达量差别较大的基因。远端上游... 详细信息

目的:在泌尿外科肿瘤疾病中,肾癌发生率位于第二位,其中又以肾透明细胞癌(ccRCC)最为常见。由于缺乏有效的预测指标及治疗靶点,肾癌死亡率较高。采用生物芯片检测,筛选出ccRCC肿瘤组织及对应的瘤旁组织表达量差别较大的基因。远端上游原件结合蛋白1 (FUBP1)是原癌基因c-myc转录过程的反式激活因子,在肿瘤形成中具有重要作用。FUBP1在ccRCC中表达水平及功能尚无研究。方法:通过实时荧光定量PCR ( Real-timePCR ),免疫印迹试验(western-blot)及免疫组织化学的方法分析FUBP1表达情况(包括:56对ccRCC肿瘤及瘤旁组织、人胚肾上皮细胞系HKC、肿瘤细胞系786-O、Caki-1),并采用相关性分析和生存分析分别检测肿瘤组织FUBP1基因的mRNA表达水平和临床病理特点及预后的相关性。细胞系及功能实验:人胚肾上皮细胞系HKC、肿瘤细胞系786-O、Caki-1培养于含5%C02、37℃的培养箱中。利用小RNA干扰序列,特异降低FUBP1表达,并通过流式细胞仪及MTS法、平板克隆实验、软琼脂集落培养实验来检测细胞增殖能力变化。免疫组化:共检测了 49对肾透明细胞癌患者肿瘤及瘤旁组织4um石蜡切片,最终的染色指数根据阳性染色率分为阴性及阳性。结果:1.在ccRCC患者,FUBP1在肿瘤组织表达水平高于其对应的瘤旁组织(包括mRNA水平及蛋白水平)。表明FUBP1在ccRCC患者肿瘤发生过程中起促癌基因的作用。2.通过MTS实验、克隆形成实验,我们知道在786-O、caki-1细胞系中,敲低基因FUBP1的表达能抑制细胞的增殖。此外,从软琼脂集落培养实验结果:敲低FUBP1表达的786-O、caki-1细胞后,集落数减少,细胞增殖力降低。3.敲低FUBP1抑制786-O、Caki-1细胞系增殖处于G1-S期阶段。与对照组相比,敲低FUBP1基因表达后,细胞多数停滞于G0/G1期,而S期细胞比例明显降低。***1抑制786-O、Caki-1细胞凋亡。通过流式细胞仪分选,一些蛋白标记物(如活性蛋白酶)可提示细胞凋亡,在敲低FUBP1的786-0及Caki-1细胞系中表达明显增加。在786-0及Caki-1细胞系中,敲低FUBP1基因表达后,细胞更多处于凋亡阶段(膜联蛋白V荧光素阳性率高所提示)。5. c-myc及p21与FUBP1的mRNA表达水平呈正相关。结论:实验结果表明,在肾透明细胞癌患者,FUBP1在肿瘤组织表达水平高于其对应的瘤旁组织。FUBP1能促进肾癌细胞系的增殖,且使细胞凋亡速度减慢。

关键词：远端上游原件结合蛋白肾透明细胞癌增殖凋亡 p21

结节性硬化症伴肾血管平滑肌脂肪瘤患者临床特征的性别差异及雌激素在疾病进展中的作用研究

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解放军医学院学报 2023年第10期44卷 1063-1067页

作者：顾良友李怀康宣云东巫胜攀赵旭鹏郭刚张旭解放军总医院第三医学中心泌尿外科医学部北京100039

背景结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)患者中女性占比高、疾病程度重、进展快,具体机制不明。目的比较男女TSC患者的临床特点,检测雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)在TSC患者肾病变组织中的表达水平,探索雌激素... 详细信息

背景结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)患者中女性占比高、疾病程度重、进展快,具体机制不明。目的比较男女TSC患者的临床特点,检测雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)在TSC患者肾病变组织中的表达水平,探索雌激素对TSC2-/-小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)增殖能力的影响。方法本研究分两部分,临床研究部分收集2015年1月-2020年12月在解放军总医院第三医学中心泌尿外科医学部接受治疗的结节性硬化症患者资料,比较男女患者临床特征差异,免疫组织化学检测TSC患者肾血管平滑肌脂肪瘤(renal angiomyolipoma,RAML)组织中ERα的表达水平;细胞学研究部分采用MTS实验检测雌二醇和雌激素受体拮抗剂氟维司群对TSC2-/-MEF细胞增殖能力的影响。结果本中心共诊治145例伴发RAML的TSC患者,中位年龄29(IQR:24~36)岁,女性(77.2%)显著多于男性(22.8%)。与男性患者比较,女性患者病灶>3 cm的比例更高(47.3%vs 27.3%,P=0.041),差异有统计学意义;女性患者进展中病灶(22.3%vs 12.1%)、RAML引起相关疼痛(10.7%vs 6.1%)、肾功能受损(5.4%vs 3.0%)和破裂出血(8.9%vs3.0%)比例更高,但差异无统计学意义(P>0.05)。本组患者中6例患者进行了免疫组化检测,其中4例(均为女性)RAML组织中阳性表达ERα。MTS实验发现雌二醇能够促进TSC2-/-MEF细胞的增殖能力,而氟维司群能够抑制细胞的增殖能力。结论女性TSC患者RAML体积更大,症状更重。ERα在部分TSC患者RAML组织中高表达,且雌激素能促进TSC2-/-MEF细胞增殖,ERα可能在TSC疾病进展中发挥重要作用。

关键词：结节性硬化症肾血管平滑肌脂肪瘤雌激素雌激素受体α 女性

硒蛋白PP1(SEPP1)过表达抑制786-O和769-P人肾癌细胞增殖并引起G2/M期阻滞

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第6期32卷 764-769页

作者：刘侃赵超飞陈建文巫胜攀姚远新武翀罗国雄张旭解放军总医院泌尿外科北京100853

目的构建硒蛋白PP1(SEPP1)基因的慢病毒质粒并研究SEPP1对人肾透明细胞癌细胞增殖的影响。方法以HEK293T细胞的c DNA为模板,通过PCR法获得人SEPP1全长序列片段,并与慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro质粒相连接,获得重组p LV-EGFP(2A)Pur... 详细信息

目的构建硒蛋白PP1(SEPP1)基因的慢病毒质粒并研究SEPP1对人肾透明细胞癌细胞增殖的影响。方法以HEK293T细胞的c DNA为模板,通过PCR法获得人SEPP1全长序列片段,并与慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro质粒相连接,获得重组p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1载体并进行基因测序验证。将重组慢病毒载体与包装质粒共同转染HEK293T细胞,进行病毒包装。用病毒上清感染786-O和769-P细胞,采用Western blot法检测SEPP1蛋白表达。按照重组慢病毒感染细胞、空载体感染细胞、未感染细胞进行分组,通过MTS法检测细胞增殖活性、细胞平板克隆形成实验检测克隆形成能力、流式细胞术检测细胞周期。结果酶切后凝胶电泳得到与SEPP1的DNA大小相一致的片段与空载体片段,基因测序的结果与SEPP1序列完全一致。经p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1感染的786-O、769-P细胞在感染48 h后,荧光显微镜下可见EGFP明显表达,实验组与空载体组、空白对照组相比较,SEPP1蛋白表达水平均明显提高。p LV-EGFP(2A)Puro-SEPP1感染组的细胞增殖能力降低,SEPP1过表达细胞集落形成能力明显降低,SEPP1过表达引起肾癌细胞G2/M期阻滞。结论在786-O和769-P细胞过表达SEPP1显著降低细胞增殖能力,并在786-O细胞中引起G2/M期阻滞。

关键词：硒蛋白PP1(SEPP1) 重组慢病毒载体肾透明细胞癌肿瘤增殖

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面向无人机绝对定位的遥感影像快速检索方法

中国惯性技术学报 2024年第4期32卷 363-370,378页

作者：王小攀李建胜王安成杨子迪信息工程大学地理空间信息学院郑州450000 河南机电职业学院郑州450000

针对在复杂环境下无人机景象匹配导航中的视觉绝对定位问题,提出了一种聚合深度学习特征的实时影像快速检索方法。首先,引入可训练软分配深度学习框架—NetVLAD,结合VGG16网络提取并聚合生成影像稳定的全局特征表达向量;其次,在初始检... 详细信息

针对在复杂环境下无人机景象匹配导航中的视觉绝对定位问题,提出了一种聚合深度学习特征的实时影像快速检索方法。首先,引入可训练软分配深度学习框架—NetVLAD,结合VGG16网络提取并聚合生成影像稳定的全局特征表达向量;其次,在初始检索阶段,使用KD树结构对影像全局特征向量构建检索索引,在不损失检索精度的前提下提高检索速度;最后,使用皮尔逊积矩相关系数对初始检索结果进行快速预判断,自动过滤初始检索结果,对于需要重排序的影像则采用特征学习匹配算法——图神经网络SuperGlue进行匹配重排序。所提方法在公开的夏季和冬季遥感影像数据集分组进行实验,实验结果表明:未重排序条件下,初始检索结果第一张影像平均准确率达到了58.27%,部分特征较好地区准确率达到了85%,对不同时相遥感影像也有很好的适应性,平均检索一张影像耗时3.7 s,可为无人机景象匹配导航的初始定位提供参考。

关键词：遥感软分配影像检索聚合景象匹配

化肥减量配施紫色光养细菌对花生的增产作用和土壤细菌群落的影响

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应用与环境生物学报 2024年第2期30卷 262-270页

作者：彭双王一明华清清巫攀邱崇文林先贵江苏开放大学环境生态学院南京210017 中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室南京210008

微生物肥料在现代农业生产中具有很大应用潜力,可在提高作物产量的同时减少化肥使用,从而创造环境友好型农业生产体系.通过田间长期试验对分离的一株紫色非硫细菌Rhodopseudomonas palustris ISP-1的5年花生增产效果进行研究,并探讨浇... 详细信息

微生物肥料在现代农业生产中具有很大应用潜力,可在提高作物产量的同时减少化肥使用,从而创造环境友好型农业生产体系.通过田间长期试验对分离的一株紫色非硫细菌Rhodopseudomonas palustris ISP-1的5年花生增产效果进行研究,并探讨浇灌菌液(R1)和叶面喷施(R2)两种追肥方式对花生产量、花生仁品质和土壤细菌群落的影响.经过5年的连续施用,R1和R2处理分别使花生产量平均增加12.5%和17.9%,追肥时喷施菌液在植株的叶面比直接浇灌在植株根部增产效果更好.R1和R2处理显著促进了花生植株的生长,提高了花生仁中的蛋白质含量.在施肥第5年花生收获期,R1和R2处理土壤中的残留养分与对照处理相比无显著差异.R2处理显著改善了土壤pH并增加了细菌生物多样性,但R1和R2处理对细菌的丰富度和群落结构均没有显著影响,仅Verrucomicrobia门细菌丰度显著增加.细菌基因功能预测分析发现R1和R2处理的土壤细菌群落中参与磷吸收和转运的基因总相对丰度显著降低,而无机磷溶解和有机磷矿化的基因分别增加了2.71%和3.20%.偏最小二乘路径建模(PLS-PM)分析表明,施用*** ISP-1菌液对花生产量和花生仁养分含量有显著的直接影响,而施用菌液导致的土壤细菌多样性增加、部分细菌群落结构以及细菌磷代谢功能的变化对花生增产的作用相对较小.本研究表明施用*** ISP-1可以促进花生植株生长,提高花生仁蛋白含量,并在长时序年的田间试验过程中维持较高的花生产量,展示了紫色光养细菌作为生物肥料的应用潜力.(图6表3参44)

关键词：化肥减量紫色光养细菌沼泽红假单胞菌土壤细菌群落花生产量

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基于生态系统服务簇的珠江源区生态功能分区

水生态学杂志 2024年

作者：吴福荣税伟马永强巫殷攀郭梦洁杨春宇王子凡福州大学环境与安全工程学院福州大学区域与城乡规划研究中心福州大学数字中国研究院(福建) 福建农林大学安溪茶学院

识别生态系统服务簇，进行珠江源生态功能分区，为珠江源区土地利用格局优化、生物多样性保护、生态修复以及土地资源精准管控提供理论指导与技术支撑。研究基于InVEST模型和食物供给模型对珠江源区2010—2020年的生境质量、土壤保持、... 详细信息

识别生态系统服务簇，进行珠江源生态功能分区，为珠江源区土地利用格局优化、生物多样性保护、生态修复以及土地资源精准管控提供理论指导与技术支撑。研究基于InVEST模型和食物供给模型对珠江源区2010—2020年的生境质量、土壤保持、水源供给、碳储量和食物供给5项重要生态系统服务进行评估，运用Python平台实现轮廓系数算法并确定最佳聚类数，通过SPSS软件进行K-means聚类分析识别生态系统服务簇，并基于XGBoost机器学习算法，结合SHAP模型解释法探讨了生态系统服务簇的影响因素。结果表明：（1）珠江源区自然生态系统服务功能总体上呈现退化趋势。生境质量、碳储量和水源供给高值区占据珠江源区大多数地区，土壤保持呈现南北两侧高于中部的空间格局，食物供给与土地利用分布较为一致。（2）生态保育区乡镇数占比不断上升，分布在珠江源区北部和东南部的山地丘陵；城镇发展区乡镇数占比保持不变，位于珠江源区中部麒麟区；供给服务区乡镇数占比变化不大，分布在珠江源区中部和西南部平原。（3）坡度、生产总值和人为影响指数对生态系统服务簇的形成有着较为重要的影响，自然环境因素仍是生态系统服务的决定性因素。

关键词：生态系统服务簇 InVEST模型 K-means聚类分析生态功能分区珠江源区

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知识产权司法保护专门化与企业数字创新

系统工程理论与实践 2024年第5期44卷 1501-1521页

作者：郑攀攀庄子银武汉大学经济与管理学院武汉430072 湖北大学商学院武汉430062

文章以2008–2020年A股上市公司为研究对象,创新性地构建企业数字创新指数,实证检验了知识产权法院设立带来的“知识产权司法保护专门化效应”对企业数字创新的影响.研究发现:1)知识产权法院设立对企业数字创新具有显著促进效应;2)知识... 详细信息

文章以2008–2020年A股上市公司为研究对象,创新性地构建企业数字创新指数,实证检验了知识产权法院设立带来的“知识产权司法保护专门化效应”对企业数字创新的影响.研究发现:1)知识产权法院设立对企业数字创新具有显著促进效应;2)知识产权法院设立主要促进企业数字商业模式创新;3)知识产权法院设立会通过优化数字创新司法环境、降低数字创新溢出损失及缓解企业外部融资约束等机制促进企业数字创新;4)知识产权法院设立对小规模、非国有及低竞争行业企业数字创新的促进作用更为显著;5)知识产权法院设立显著提升了数字创新(尤其是数字商业模式创新)企业的市场价值.

关键词：知识产权司法专门化数字创新文本识别

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生本主义视域下高中英语合作学习策略分析

校园英语 2024年第11期 178-180页

作者：巫胜铭宁化滨江实验中学

生本主义教育理念倡导教师建构学生本位主义教学模式，效度化合作学习活动的开展将确保每一个学生在参与高中英语小组合作学习的过程中有所获益。本文以生本主义教育理念的内涵界定及其教学应用价值为研究切入点，在探讨了生本主义教育... 详细信息

生本主义教育理念倡导教师建构学生本位主义教学模式，效度化合作学习活动的开展将确保每一个学生在参与高中英语小组合作学习的过程中有所获益。本文以生本主义教育理念的内涵界定及其教学应用价值为研究切入点，在探讨了生本主义教育理念下高中英语合作学习要素的基础之上，阐明了现阶段高中英语合作学习效度不足的原因，并指出生本主义教育理念下高中英语合作学习实施策略，以期为高中英语课堂开展高效合作学习活动提供借鉴。

关键词：生本主义高中英语合作学习效度进路

髋或膝关节置换术患者术后苏醒期谵妄的前额脑电特征

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临床麻醉学杂志 2024年第6期40卷 606-611页

作者：李珺叶晨玄钱景方攀攀刘学胜安徽医科大学第一附属医院麻醉科合肥市230022

目的分析髋或膝关节置换术后发生苏醒期谵妄(ED)患者的前额脑电特征。方法选择择期行髋或膝关节置换术的患者64例,男12例,女52例,年龄≥60岁,BMI 18.5~30.0 kg/m^(2),ASAⅡ或Ⅲ级。术后麻醉苏醒期间,采用重症监护室意识模糊评估方法(CAM... 详细信息

目的分析髋或膝关节置换术后发生苏醒期谵妄(ED)患者的前额脑电特征。方法选择择期行髋或膝关节置换术的患者64例,男12例,女52例,年龄≥60岁,BMI 18.5~30.0 kg/m^(2),ASAⅡ或Ⅲ级。术后麻醉苏醒期间,采用重症监护室意识模糊评估方法(CAM-ICU)和Richmond躁动-镇静评分(RASS)量表判断ED发生。根据苏醒期是否发生谵妄将患者分为两组:苏醒期谵妄组(ED组)和苏醒期非谵妄组(非ED组)。收集脑电监测仪中患者苏醒期原始脑电图数据,并截取苏醒前(停药后5~10 min)和完全苏醒后(拔喉罩后15~20 min)两个时间段的数据进行频谱分析。结果有28例(44%)患者发生ED。两组苏醒前与完全苏醒时脑电变化一致:频谱边缘频率(SEF)上升,β、γ波功率升高,α波峰值频率降低。与苏醒前比较,非ED组完全苏醒时θ波、α波功率明显降低(P<0.05),α波峰值功率明显降低(P<0.05),ED组完全清醒时α波功率和α波峰值功率差异无统计学意义。与非ED组比较,ED组苏醒前和完全苏醒时样本熵与排列熵均明显升高(P<0.05)。结论非ED患者在麻醉苏醒期间θ波、α波功率及α波峰值功率均明显降低,而ED患者在麻醉苏醒期间α波功率及α波峰值功率均无明显变化,同时伴有样本熵与排列熵的升高。

关键词：膝关节置换术髋关节置换术苏醒期谵妄脑电图