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利用病毒诱导的基因沉默技术探讨番茄PG与乙烯关系

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利用病毒诱导的基因沉默技术探讨番茄PG与乙烯关系

作者：左琦天津大学

学位级别：硕士

病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)是近年来应用于植物研究中最广泛的RNA沉默技术之一,它采用外源病毒所驱动的同源防卫机制来沉默植物体的单个基因,通过构建携带有植物功能基因cDNA片段的病毒载体并侵染寄主植物体,诱导植物发生基因沉默从... 详细信息

病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)是近年来应用于植物研究中最广泛的RNA沉默技术之一,它采用外源病毒所驱动的同源防卫机制来沉默植物体的单个基因,通过构建携带有植物功能基因cDNA片段的病毒载体并侵染寄主植物体,诱导植物发生基因沉默从而出现目标基因功能丧失或表达水平下降的表型,进而在较短的时间内研究该基因的功能,是一种从反向遗传学方向快速分析、鉴定植物基因功能的技术。本研究以绿熟期的立春番茄为研究对象,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,根据NCBI发表番茄PG基因序列,以野生型番茄cDNA为模板扩增出两端带有酶切位点的PG基因片段,并将其连接到烟草脆裂病毒载体上。将重组病毒载体转化至农杆菌GV3101中后,以真空渗透的方式使用农杆菌侵染番茄离体果实以实现PG基因沉默。通过Real Time PCR等技术从分子和生理两个角度对PG、ACS及乙烯进行测定。同时利用相同方法对番茄ACS2基因进行沉默,抑制番茄乙烯的生成后对番茄PG活性进行测量。从而观察、探讨番茄中PG和乙烯的关系。研究发现,与未处理的样品相比,经过PG、ACS2基因沉默的样品中PG、ACS的表达量和活性均偏低;病毒诱导的PG、ACS2基因沉默对绿熟期离体番茄果实成熟过程中系统II乙烯的合成有明显抑制作用;由于当番茄果实中ACS2基因被沉默时,番茄果实乙烯的生成也受到抑制,由此可以推测,番茄果实中PG与番茄果实ACS2或ACS基因家族及乙烯是相互影响的。针对番茄PG基因被沉默时,ACS2基因的表达受到抑制、番茄ACS2基因被沉默时,PG基因的表达受到抑制的现象,还提出了PG基因和ACS2或ACS基因家族存在共同的控制元件,且该控制元件与两个基因均为控制-反馈模式的猜想。

关键词：番茄多聚半乳糖醛酸酶乙烯 ACC 合酶病毒诱导的基因沉默

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预应力起重臂塔机结构的设计及研究

预应力起重臂塔机结构的设计及研究

作者：左琦山东建筑大学

学位级别：硕士

我国今年疫情中起到关键作用的“火神山”和“雷神山”两所医院的快速落地建成既体现了我国的凝聚力和综合国力,看到了我国快速装配式建筑的发展情况,早在几年前国家就大力推动装配式建筑的普及和发展,要将新建的建筑中装配式的比例增加... 详细信息

我国今年疫情中起到关键作用的“火神山”和“雷神山”两所医院的快速落地建成既体现了我国的凝聚力和综合国力,看到了我国快速装配式建筑的发展情况,早在几年前国家就大力推动装配式建筑的普及和发展,要将新建的建筑中装配式的比例增加,在实际的施工建设中限制装配建筑进步的是塔机起重性能不足和吊装精度差,从而影响了装配式建筑的发展。应运而生的预应力起重臂塔机还不足以满足快速装配的全部要求,本课题基于原预应力塔机结构进行改造升级,在保证安全的前提下使原有的预应力塔机在起升能力、控制变形量、控制成本和应对特殊工况等方面有较大提升。本文的主要研究内容如下:（1）提出了一种改进原有预应力起重臂塔机的结构和方法,在能够减小吊点处位移量增大吊载能力的同时,也能弥补原结构预应力起重臂塔机不能应对突然卸载工况的情况,为预应力起重臂塔机的优化设计提供了一种新的思路。（2）对三种塔机的基本原理进行分析,得出新的预应力起重臂塔机改进理论,并依据新总结理论对原结构进行改进,并重新计算确定新结构塔机的各种参数如起重力矩曲线等,并分析了改进结构的预应力起重臂塔机塔身的受力情况。（3）通过参数化建模对改进结构预应力起重臂塔机、原结构预应力塔机以及TC6018平头塔机三种塔机进行有限元分析,在考虑两种危险工况的情况下,按照三种塔机不同的力矩曲线中的载荷对三种不同的塔机模型进行静力分析,在确保安全的情况下对比分析了三种结构的塔机起重能力的大小和吊载处变形量大小。（4）将改进前后的两种结构在钢丝绳断裂等突然卸载的特殊工况下进行有限元分析并对比了危险截面承受的最大应力和变形量进而比较两种结构的预应力起重臂塔机的在应对突然卸载工况的能力大小。同时通过受力分析和有限元计算,总结出改进结构预应力拉杆的位置与吊点处位移变形量和最大应力的关系,对改进结构拉杆的位置进行了优化,得到了最优结果,使得改进后的预应力起重臂塔机能够更好地适应快速装配建筑。

关键词：装配式建筑预应力起重臂塔机静力分析突然卸载工况

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酶解虾副产物制备ACE抑制肽

酶解虾副产物制备ACE抑制肽

作者：左琦上海交通大学

学位级别：硕士

虾仁加工过程中，产生了大量的虾副产物。为了提高虾副产物的资源利用率，本文拟利用酶法水解虾副产物制备ACE抑制肽。具体研究内容如下：首先搜集了60个公开报道的食源性ACE抑制肽，分析了氨基酸的疏水性对ACE抑制活性的影响，以及20... 详细信息

虾仁加工过程中，产生了大量的虾副产物。为了提高虾副产物的资源利用率，本文拟利用酶法水解虾副产物制备ACE抑制肽。具体研究内容如下：首先搜集了60个公开报道的食源性ACE抑制肽，分析了氨基酸的疏水性对ACE抑制活性的影响，以及20种氨基酸在C端、N端的出现频率，发现ACE抑制肽C末端氨基酸的疏水性与其ACE抑制活性之间呈正相关关系;芳香族氨基酸或脯氨酸在ACE抑制肽C末端出现频率较高。然后，分析了常用水解酶的酶切位点，最后选择α-胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶复合酶解虾副产物制备ACE抑制肽。其次，分析了虾副产物的蛋白质含量和氨基酸组成，虾副产物中蛋白质含量为59.94%，与ACE抑制活性相关的芳香族氨基酸和脯氨酸含量为14.24%。在一定温度、pH值和加酶量条件下，以蛋白质的水解度和ACE抑制率为指标，确定α-胰凝乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解时间均为4h，酶解产物ACE抑制的IC50值为1.645mg protein/mL。然后，对虾副产物酶解液进行分离、纯化。第一步用500Da和1000Da的透析袋进行透析，得到0～500Da (F1)与500～1000Da (F2)两个组分，透析后组分F1和组分F2的IC50值分别降为0.333mg peptide/mL和1.320mg peptide/mL;第二步采用凝胶层析对组分F1和组分F2继续分离：组分F1和组分F2都被分成了5个峰，组分F1中峰F1-G5的ACE抑制率最高，为49.24%;组分F2中峰F2-G2的ACE抑制率最高，为39.07%。分别选择峰F1-G5和峰F2-G2这两个峰进行后续分离。第三步采用RP-HPLC分离，RP-HPLC分离结果显示，峰F1-G5可以分为6个峰，其中峰F1-G5-H1和峰F1-G5-H4的ACE抑制率最高，分别为94.21%、95.88%;峰F2-G2可以分为4个峰，只有峰F2-G2-H1和峰F2-G2-H2有活性，ACE抑制率分别为32.86%、20.75%。然后对这几个峰分别收集浓缩，用质谱分析肽序列。质谱分析结果表明：这4个峰中共含有25个肽，这些肽分别由5～14个氨基酸组成。25个已知序列多肽中有22个多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸，与预期相符。最后，用胃肠道消化酶水解峰F1-G5-H1、峰F1-G5-H4、峰F2-G2-H1、峰F2-G2-H2这四个峰。结果表明，峰F1-G5-H1、峰F1-G5-H4和峰F2-G2-H2经过消化酶水解之后，ACE抑制率降低，说明这些序列比较长的肽段，容易被胃肠道消化酶水解成无ACE抑制活性的肽段，导致抑制活性下降;峰F2-G2-H1经过消化酶水解之后ACE抑制率上升，可能是因为水解产生了ACE抑制活性更高的肽。综上所述，用α-胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶复合酶解虾副产物能制备得到C末端为芳香族氨基酸或脯氨酸的ACE抑制肽，该研究丰富了ACE抑制肽的来源，为虾副产物的高效利用提供了新思路。

关键词：定量构效关系 α-胰凝乳蛋白酶脯氨酸蛋白酶虾副产物 ACE抑制肽

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湖南省全科医生现状分析与发展对策研究

湖南省全科医生现状分析与发展对策研究

作者：左琦南华大学

学位级别：硕士

目的：全科医生作为全科医疗的主要实施者,是社区卫生服务的中坚力量,是初级卫生保健的最佳提供者,也是卫生保健系统的最佳守门人。但全科医生数量不足,质量不高,已经成为制约社区卫生服务发展的一大“瓶颈”。全面了解湖南省全科医生现... 详细信息

目的：全科医生作为全科医疗的主要实施者,是社区卫生服务的中坚力量,是初级卫生保健的最佳提供者,也是卫生保健系统的最佳守门人。但全科医生数量不足,质量不高,已经成为制约社区卫生服务发展的一大“瓶颈”。全面了解湖南省全科医生现状,寻求发展对策,造就一支高质量的全科医生队伍刻不容缓。本研究着眼于湖南基层,以造就合格的全科医生队伍为研究主线,调查全科医生现状,评估全科医生培训效果,发现存在的问题,提出解决问题的对策,为探寻全科医生队伍建设的模式、完善全科医生制度提供参考依据。方法：本研究在大量查阅文献的基础上,采用问卷调查法、个人访谈法、专家咨询法,以社区卫生服务机构为样本、以全科医生转岗培训班为实证,将定量研究与定性研究相结合,对湖南省全科医生现状和转岗培训进行探讨。结果：研究发现：湖南省全科医生队伍总体学历偏低、职称偏低、技术水平不高、高素质人员严重缺乏尚难适应社区卫生服务“六位一体”功能的需要;湖南省初步建立了全科医生转岗培训体系,基本能满足全科医生培训需求,培训工作取得了一定成效。但还存在目标不明确、考核欠严谨、制度待完善、管理需加强等问题。结论：建立全科医生制度是一个系统工程,需要政府牵头、多方合作,建议健全培养网络、完善质控体系、政府积极引导、加大公共财政投入、加强师资队伍建设、加强培训工作评估、充分发挥全科医学会作用,形成具有湖南特色的全科医学教育和培训体系,造就一支优秀的全科医生队伍,更好地满足三湘民众对医疗卫生服务的需求。

关键词：全科医生现状分析培训评估对策

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基于多种策略的语音质检系统的设计与实现

基于多种策略的语音质检系统的设计与实现

作者：左琦北京交通大学

学位级别：硕士

互联网时代的来临,利用随机抽取录音的方式进行检测的人工质检方法由于它自身的局限性越来越跟不上时代的发展,也无法满足企业的需要,所以智能语音质检产品应运而生。本文设计并实现了基于多种策略的语音质检客户端系统,为用户提供多种... 详细信息

互联网时代的来临,利用随机抽取录音的方式进行检测的人工质检方法由于它自身的局限性越来越跟不上时代的发展,也无法满足企业的需要,所以智能语音质检产品应运而生。本文设计并实现了基于多种策略的语音质检客户端系统,为用户提供多种策略来进行语音质检,并提供个性化的分数计算规则使录音的质检结果以分数的方式呈现,并在首页提供数据统计等功能,为用户节省人工质检的成本,并且满足用户个性化的需求。本文设计的基于多种策略的语音质检客户端基于JAVA平台开发并采用多模块分布式部署的设计思想,使系统可扩展性提高。系统使用Redis做数据缓存、使用My SQL进行数据存储、使用Rabbit MQ进行模块间通信。通过分析产品优势和用户特征,总结出系统的需求,该系统主要包括质检结果统计、质检策略集配置、录音质量检测、人工复核录音四大功能模块。作者独立设计并实现了以下四个模块:（1）质检结果统计模块:包括生成质检合格曲线图、关键词命中柱状图,实现质检合格统计数据、关键词命中数据导出报告等功能,重点实现了按照天、周、月三种时间维度生成质检结果统计图。（2）质检策略集配置模块:为用户提供正则模板、关键词模板等多种标签定制策略来满足用户多业务场景的需求,通过配置策略集实现多种策略质检的目的,以及提供了标签命中时的分数计算规则。（3）录音质量检测模块:实现按条件查找录音列表并向用户展示查找结果,提供录音质检功能,选择质检匹配策略集功能,导出录音列表文件功能。（4）人工复核录音模块:给用户提供质检报告查看功能、录音分派功能、复核录音文件功能、录音播放功能。通过对系统进行功能测试和系统测试,基于多种策略的语音质检客户端系统满足了项目需求说明书的各项要求并符合Beta版本功能要求。该项目满足系统上线标准,目前已经投入市场。根据系统使用用户所反馈的结果来看,该项目实现了录音的全面质检,增强了质检结果的直观性,满足了用户个性化的需要,给公司带来了一定的经济效益。

关键词：语音质检 Spring Boot MySQL 系统设计

重思中国的人口新政策：与日韩低生育率和人口老龄化比较

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学海 2017年第1期 134-143页

作者：金益基左琦中国人民大学澳洲昆士兰大学地球环境科学学院环境管理系

自今年起,继施行了35年的独生子女政策后,中国开始实行了一个新的人口政策。这篇文章以日本及韩国的低出生率和人口老龄化问题为基础,提出了中国新"二孩"政策的影响。同处东亚的日本,韩国和中国具有社会文化共通性,且在不同时期也经历... 详细信息

自今年起,继施行了35年的独生子女政策后,中国开始实行了一个新的人口政策。这篇文章以日本及韩国的低出生率和人口老龄化问题为基础,提出了中国新"二孩"政策的影响。同处东亚的日本,韩国和中国具有社会文化共通性,且在不同时期也经历过低出生率及人口老龄化问题。许多专家指出,中国的"计划生育"的确在很大程度上降低了人口出生率,但是独生子女政策在减少人口出生率的同时对社会经济造成了一定的负面影响。从中国限制人口增长政策和日本、韩国并不成功的人口增长方案中汲取经验,本文提出,中国应实施"二孩"政策,甚至完全开放的生育政策来取代之前的人口政策。

关键词：中国日本韩国低生育率人口老龄化

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理事会制度下事业单位的财务管理工作

财务与金融 2008年第3期 41-43页

作者：左琦深圳市图书馆

事业单位进行的改革,打破了原有的行政管理体制,其管理形式将呈现多样性。在新的管理体制下,财务工作也要作相应的调整。单位的管理形式虽然不同,但在财务管理工作上有许多共同之处,诸如,财务管理工作的目标、内容、服务对象等等。法定... 详细信息

事业单位进行的改革,打破了原有的行政管理体制,其管理形式将呈现多样性。在新的管理体制下,财务工作也要作相应的调整。单位的管理形式虽然不同,但在财务管理工作上有许多共同之处,诸如,财务管理工作的目标、内容、服务对象等等。法定机构制度下的事业单位,是体制改革中的一种形式,这种事业单位在实现法人治理后,其财务管理工作较之以前有所不同,这些不同之处需要单位的管理层以及财务人员加以明确,才能正确指导日常的财务工作。

关键词：事业单位法人治理财务管理会计准则

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提前分支预测结构及算法研究

计算机研究与发展 2013年第10期50卷 2228-2238页

作者：靳文兵石峰左琦张杨北京理工大学计算机学院北京100081 北方自动控制技术研究所太原030006

在理论上,越来越复杂的分支预测算法和更大的存储结构会使分支预测精度不断提高,但当前复杂算法和庞大数据结构所引发的分支预测时延已无法满足流水线单周期运行要求.针对分支预测精度和时延的矛盾,设计提出提前分支预测结构(ahead bran... 详细信息

在理论上,越来越复杂的分支预测算法和更大的存储结构会使分支预测精度不断提高,但当前复杂算法和庞大数据结构所引发的分支预测时延已无法满足流水线单周期运行要求.针对分支预测精度和时延的矛盾,设计提出提前分支预测结构(ahead branch prediction architecture,ABPA).ABPA为流水线前端取指部件提供简单的分支预测表,以实现快速分支预测;复杂的预测算法和较大的存储结构均被移至流水线后端实现,从而保证了分支预测精度.对于一直难以准确预测的多目标间接分支指令,设计提出基于分支历史和目标路径的间接分支预测算法(indirect branch prediction algorithm based on branch history and target path,BHTP algorithm).提前分支预测算法采用改进的高精度分支预测算法和BHTP算法的混合.嵌入提前分支预测算法的分支预测引擎实现流水线后端的分支推测和目标预测,以及流水线前端的分支预测表更新.实验结果表明:采用ABPA结构和BHTP算法的分支预测系统平均精度达到94.27%.设计不仅实现了快速、高精度分支预测,更为分支预测的深入研究提供了条件.

关键词：分支预测分支推测分支目标缓存间接分支指令指令流水线

重组人白细胞介素10对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞和NIH/3T3细胞syndecan-4蛋白表达的影响

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重组人白细胞介素10对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞和NI...

作者：左琦南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是导致心血管疾病的重要原因之一。日益增多的证据表明,AS是一种对血管损伤的过度炎症反应。血管损伤后,单核细胞、血小板和淋巴细胞粘附到血管壁,释放一系列细胞因子和肽类生长因子,与特异性... 详细信息

研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是导致心血管疾病的重要原因之一。日益增多的证据表明,AS是一种对血管损伤的过度炎症反应。血管损伤后,单核细胞、血小板和淋巴细胞粘附到血管壁,释放一系列细胞因子和肽类生长因子,与特异性受体结合后转导影响血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts,AF)表型和生长的信号,因此促进了晚期纤维增殖病变的发生。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是炎症反应的关键调节因子之一,可从多种不同的炎症细胞中释放,在AS发生发展中起着关键的作用。白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是近年来研究最为广泛的一种由体内产生的内源性的抗炎因子,在多种炎性疾病中发挥效应,其主要功能是限制和终止炎症反应。Syndecan-4是硫酸乙酰肝素(heparansulfate,HS)类的跨膜转运蛋白多糖syndecans家族的成员之一。Syndecan-4是存在于血管床的主要蛋白聚糖之一,它作为一种与生长因子结合的共受体(co-receptor),调控着多种细胞生物学效应,在细胞伸展、识别、粘附、迁移和增殖控制中扮演着重要的角色,同时也介导炎症反应。因此有必要研究syndecan-4在动脉粥样硬化发生发展过程中所扮演的一系列潜在功能角色及相关干预,从而为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。目的以重组人白细胞介素10(recombinant human Interleukin 10,rhIL-10)为研究对象,通过体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs和NIH/3T3细胞,应用MTS/PMS非放射性技术检测rhIL-10对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉VSMCs和NIH/3T3细胞增殖的作用,采用Western blotting蛋白免疫印迹分析方法观察rhIL-10对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉VSMCs和NIH/3T3细胞syndecan-4蛋白表达的影响,进一步从细胞和分子水平上阐述syndecan-4蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法1.细胞增殖的检测:实验一:应用96孔板体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,用终浓度为20ng/mL TNF-α、100ng/mL rhIL-10、200ng/mL rhIL-10、100ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α、200ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α分别作用24小时。每组浓度设6个副孔,同样实验条件重复6次,每组共36例实验数据,并设立对照组进行比较,以明确应用各药物刺激后的细胞是否比无刺激的细胞有变化。采用MTS/PMS法确定大鼠胸主动脉VSMCs的增殖状态。实验二:应用96孔板体外培养NIH/3T3细胞,用终浓度为20ng/mL TNF-α、100ng/mL rhIL-10、200ng/mL rhIL-10、100ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α、200ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α分别作用24小时。每组浓度设7个副孔,同样实验条件重复3次,每组共21例实验数据,并设立对照组进行比较,以明确应用各药物刺激后的细胞是否比无刺激的细胞有变化。采用MTS/PMS法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。***-4蛋白表达的检测:实验一:体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,用终浓度为20ng/mL TNF-α、100ng/mL rhIL-10、200ng/mL rhIL-10、100ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α、200ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α分别作用24小时,裂解细胞提取蛋白,考马斯亮蓝G-250染色法测定总蛋白浓度,利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定大鼠胸主动脉平滑肌细胞syndecan-4蛋白的表达情况。每组浓度重复实验3次,共3例实验数据,并设立对照组进行比较。实验二:体外培养NIH/3T3细胞,用终浓度为20ng/mL TNF-α、100ng/mLrhIL-10、200ng/mL rhIL-10、100ng/mL rhIL-10联用20ng/mL TNF-α、200ng/mLrhIL-10联用20ng/mL TNF-α分别作用24小时,裂解细胞提取蛋白,考马斯亮蓝G-250染色法测定总蛋白浓度,利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定NIH/3T3细胞syndecan-4蛋

关键词： syndecan-4 白介素10 肿瘤坏死因子α 血管平滑肌细胞 NIH/3T3细胞细胞增殖