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我国北方蛋鸡饲养体系研究进展

中国家禽 2009年第20期31卷 33-35页

作者：黄仁录陈辉臧素敏左玉柱河北农业大学动物科技学院河北保定071001

我国的蛋鸡业近年获得了快速发展，取得了举世瞩目的成就，蛋鸡养殖数量和鸡蛋产量都居世界第一位。尽管我国蛋鸡业发展方面数量上取得了很多的成绩，但养殖的技术含量却比较低，具体表现在蛋鸡单产水平低，生产周期短，饲料报酬率低，... 详细信息

我国的蛋鸡业近年获得了快速发展，取得了举世瞩目的成就，蛋鸡养殖数量和鸡蛋产量都居世界第一位。尽管我国蛋鸡业发展方面数量上取得了很多的成绩，但养殖的技术含量却比较低，具体表现在蛋鸡单产水平低，生产周期短，饲料报酬率低，死淘率高，另外还有不同程度的产品质量问题，如药物残留、病原微生物污染等，蛋鸡产业面临换代升级，为此农业部及时组建了国家蛋鸡产业技术体系，组织全国的同行专家对产业发展中关键技术关节进行研究。

关键词：鸡场蛋鸡饲养体系蛋鸡产业网状内皮增生传染性法氏囊病蛋鸡养殖混合感染

携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2023年第2期45卷 178-184页

作者：郭晓旭张帅刘莹赵云环王传文李妍范京惠左玉柱河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001

为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗... 详细信息

为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化*** BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/mL。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后以50μg/只分别免疫小鼠,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d采血制备血清,采用ELISA方法检测小鼠血清中的BCoV IgG特异性抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4,结果显示,将两种VLP乳化后免疫小鼠产生的BCoV IgG抗体(P<0.01)和两种细胞因子水平(P<0.05)均显著高于对照组,且可溶性表达的VLP诱导产生的抗体水平和细胞因子水平更高。本研究首次制备了含BCoV S蛋白抗原表位的VLP,两种不同表达形式的重组蛋白均形成VLP,且在小鼠体内均能够产生免疫应答,为BCoV亚单位疫苗及相关生物制品的制备奠定了基础。

关键词：乙肝病毒核心抗原牛冠状病毒病毒样颗粒分子伴侣质粒

牛型布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2010年第8期40卷 842-845页

作者：左玉柱范京惠刘媛秦建华河北农业大学动物科技学院河北保定071001

采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到布鲁氏菌外膜蛋白(OMP31)基因,将其连接入pMD18-T克隆质粒并进行序列测定;测序正确后,将该基因插入pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rossetta(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋... 详细信息

采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到布鲁氏菌外膜蛋白(OMP31)基因,将其连接入pMD18-T克隆质粒并进行序列测定;测序正确后,将该基因插入pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rossetta(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋白,并用Western-blot分析表达蛋白的免疫反应特性。结果显示,扩增了OMP31的全基因,基因全长723bp,共编码241个氨基酸。成功构建了布鲁氏菌OMP31基因的原核表达载体pET-OMP31,并且在大肠杆菌中表达了OMP31蛋白,经Western-blot鉴定,该蛋白可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应。证实布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因已成功表达,为布鲁氏菌病血清学诊断方法的建立及亚单位疫苗的研究提供了基础资料。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白OMP31 克隆原核表达

猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞自噬及其机理

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中国兽医学报 2022年第7期42卷 1350-1355,1456页

作者：刘莹袁广富张增贤张毅王晶郭禹赵云环范京惠左玉柱河北农业大学动物医学院河北保定071001 宁晋县农业农村局河北宁晋055550 邢台市动物疫病预防控制中心河北邢台054000

首先利用间接免疫荧光方法、Western blot及Image J灰度值分析,研究猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染细胞后及通过紫外线灭活后的病毒对自噬相关蛋白LC3的蛋白表达及转化水平的影响;其次利用自噬促进... 详细信息

首先利用间接免疫荧光方法、Western blot及Image J灰度值分析,研究猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染细胞后及通过紫外线灭活后的病毒对自噬相关蛋白LC3的蛋白表达及转化水平的影响;其次利用自噬促进剂雷帕霉素及自噬抑制剂3-MA对PK-15细胞进行处理,通过qRT-PCR及病毒滴度测定研究细胞自噬在其病毒增殖过程中所产生的影响;最后通过qRT-PCR对自噬关键基因在病毒感染细胞时的动态变化及影响进行分析。结果显示,随着病毒感染时间的增加,细胞内的LC3-Ⅰ逐渐向LC3-Ⅱ转化,其LC3-Ⅱ/β-actin的比值明显增加;结合雷帕霉素作用后,细胞自噬极显著上调了TGEV mRNA转录水平及病毒滴度(P<0.01);与自噬抑制剂3-MA结合后,随病毒感染时间的不同,极显著下调了其病毒的mRNA转录量及病毒滴度(P<0.01)。而TGEV在感染细胞后极显著诱导了自噬关键基因(ATG-5及Beclin-1)mRNA转录水平的提升(P<0.01),并结合病毒增殖情况印证了细胞在受到TGEV感染后,其病毒增殖与自噬程度呈正向作用,说明病毒感染可诱导细胞自噬,促进细胞自噬会增加分离株的病毒滴度。结果表明,TGEV感染PK-15细胞后可诱导细胞自噬,并确定了自噬在TGEV感染中的重要作用。

关键词：细胞自噬 TGEV 病毒增殖自噬相关基因雷帕霉素 3-MA

2022年~2023年上半年河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2023年第12期45卷 1287-1294页

作者：顾文源张帅赵云环李思琪刘濮毓范京惠左玉柱河北省动物疫病预防控制中心河北石家庄050053 河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001

为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9... 详细信息

为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9%(41/229)。对鉴定的15株PRRSV ORF5基因进行测序、遗传进化分析、以及潜在的N-糖基化位点分析。结果显示,15株PRRSV ORF5基因序列的同源性为81.8%~99.8%,氨基酸序列的同源性为81.1%~100.0%;15株PRRSV均属于PRRSV-2型,其中的10株属于谱系1(Lineage 1),1株属于Lineage 5,4株属于Lineage 8;属于Lineage 5的HB-HD-2株为一株类RespPRRS MLV疫苗株。部分病毒株的GP5蛋白氨基酸序列毒力相关位点出现R13Q、R151I、R151K突变,属于Lineage 1的10株PRRSV GP5蛋白在诱骗表位出现V27A和V29A突变,在其它中和表位区及高变区也出现了不同程度的变异;糖基化位点分析结果显示,GP5蛋白在aa44~aa46、aa51~aa53位N-糖基化位点相对保守,在aa30~aa32、aa33~aa35、aa34~aa36和aa57~aa59发生了不同程度的突变。以上结果表明,当前河北省PRRSV流行株复杂多样,Lineage 1 PRRSV(NADC30-Like、NADC34-Like)正成为优势病毒株,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控形势仍较为严峻。本研究为掌握当前河北省PRRSV的遗传变异情况,以及PRRS疫苗开发和防控提供了新数据和信息。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化分析 N-糖基化位点 GP5蛋白

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猪流行性腹泻病毒的基因结构及其诊断技术

世界华人消化杂志 2013年第1期21卷 54-59页

作者：范京惠左玉柱任晓峰河北农业大学动物医学院河北省保定市071001 东北农业大学动物医学学院预防兽医系黑龙江省哈尔滨市150030

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、水样腹泻和脱水为特征,在亚洲地区尤其是我国养猪场的感染非常严重.猪流行性腹泻的流行病学特征、临床... 详细信息

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、水样腹泻和脱水为特征,在亚洲地区尤其是我国养猪场的感染非常严重.猪流行性腹泻的流行病学特征、临床症状以及病理变化与猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis of swine,TGE)非常相似,确诊需要借助实验室检测.近年来,随着分子生物学技术的发展和人们对PEDV基因结构及功能认识的深入,PED的诊断技术也取得了很大进展.本文主要对PEDV的基因结构、功能以及诊断技术方面取得的新进展进行综述,以期为PEDV基因的深入研究以及建立特异、快速、简便的诊断方法提供新的思路.

关键词：猪流行性腹泻病毒基因结构诊断方法

维普期刊数据库评论

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维普期刊数据库

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丹顶鹤大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

中国兽医杂志 2009年第6期45卷 81-82页

作者：范欢陈帆温学锋季妍左玉柱保定动物园河北保定071001 秦皇岛野生动物园河北秦皇岛066100 河北农业大学动物科技学院河北保定071001

近年来大肠杆菌病在国内动物园的野生禽类中常有发生,对一些大型珍禽(如鹤类)的威胁有加剧趋势.由于兽医临床上抗菌药物被广泛应用,导致大肠杆菌耐药不断增加,治疗效果下降,并且不同地方流行的菌株对抗生素的敏感性差异极大.

关键词：细菌分离鉴定大肠杆菌病药敏试验丹顶鹤致病性大肠杆菌野生禽类抗菌药物敏感性差异

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河北省蛋鸡舍建筑类型及配套设施调查

中国家禽 2010年第5期32卷 1-7页

作者：黄仁录陈辉臧素敏左玉柱郑长山河北农业大学河北保定071001 河北省畜牧兽医研究所河北保定071000

为了详细掌握我国北方蛋鸡生产和环境控制的现状及具体参数,本研究团队对河北省养殖密集地区的鸡舍类型及基本结构情况,蛋鸡生产配套设施基本情况进行了详细的调查,结果显示,鸡舍外围结构以花墙式为主,占72%;鸡舍屋顶结构类型以平屋顶为... 详细信息

为了详细掌握我国北方蛋鸡生产和环境控制的现状及具体参数,本研究团队对河北省养殖密集地区的鸡舍类型及基本结构情况,蛋鸡生产配套设施基本情况进行了详细的调查,结果显示,鸡舍外围结构以花墙式为主,占72%;鸡舍屋顶结构类型以平屋顶为主,占77%;鸡舍材料以砖混结构为主,占53%。通风方式以自然通风利用率最高,清粪方式以人工清粪为主。说明样本调查区的分户散养模式下的鸡舍存在建筑及设施简陋,生物安全没有保障,不利于环境控制和疫病防治等特点。为实现蛋鸡产业升级,有必要对现有鸡舍进行改造。

关键词：环境控制鸡舍类型配套设施

河北省塞内卡病毒A VP2基因克隆和序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2022年第8期 69-71,81页

作者：王晶郭禹赵云环顾文源刘涛翟刚张帅王丙雷左玉柱范京惠河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省动物疫病预防控制中心石家庄050053 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001

为了解河北省塞内卡病毒A(SVA)VP2基因的变异及分子进化情况,试验设计了一对VP2基因扩增引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆测序,利用MEGA 7.0软件对测序获得的VP2基因序列和GenBank上的参考序列进行遗传进化分析,运用MegAlign 5.0软件进行... 详细信息

为了解河北省塞内卡病毒A(SVA)VP2基因的变异及分子进化情况,试验设计了一对VP2基因扩增引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆测序,利用MEGA 7.0软件对测序获得的VP2基因序列和GenBank上的参考序列进行遗传进化分析,运用MegAlign 5.0软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果表明:成功扩增并测序得到VP2基因序列,将该序列上传至GenBank,获得基因登录号为MZ031967,命名为SVA HB-BD株。该毒株与中国毒株核苷酸序列相似性为95.9%~99.6%;与原型毒株SVV-001(DQ64125-7核苷酸)相似性较低,为94.6%;与其他美国毒株(MN812946、MN812947、KC667560、MH704432、MN812938、MN812937、KU954086、NC011349)核苷酸相似性为93.0%~94.6%。SVA HB-BD株与2015—2016年分离毒株亲缘关系较近,处于同一分支,而与2017—2018年分离毒株亲缘关系较远。SVA HB-BD株与广东省分离毒株氨基酸序列相似性较高,并且在VP2蛋白中和表位位点高度保守。说明HB-BD株与中国毒株具有相同起源,并且在不断演变。

关键词：塞内卡病毒A VP2基因 PCR扩增序列分析遗传进化