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桃蚜浓核病毒结构蛋白的原核表达纯化及抗血清制备

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桃蚜浓核病毒结构蛋白的原核表达纯化及抗血清制备

中国植物病理学会2024年学术年会

作者：何梦君王优左登攀王云张宗英王颖韩成贵中国农业大学植物病理学系农业农村部作物有害生物监测与绿色防控重点实验室

浓核病毒是一类感染昆虫等无脊椎动物的单链小分子DNA病毒,在虫体内大量复制增殖。由于该病毒的结构蛋白启动子具有很强的转录活性且转染到宿主细胞后,易拯救出感染性的病毒粒子,因此在作为表达载体用于生物防控方面表现出很大的潜能。... 详细信息

浓核病毒是一类感染昆虫等无脊椎动物的单链小分子DNA病毒,在虫体内大量复制增殖。由于该病毒的结构蛋白启动子具有很强的转录活性且转染到宿主细胞后,易拯救出感染性的病毒粒子,因此在作为表达载体用于生物防控方面表现出很大的潜能。桃蚜浓核病毒(Myzuspersicae densovirus,MpDV)属于细小病毒科(Parvovirdae)双义浓核病毒属(Ambidensovirus),主要通过水平和垂直传播在宿主种群间扩散。经病毒检测及序列比对,实验室饲养的桃蚜种群中携带的MpDV全长为5 507 bp,与烟蚜浓核病毒(Myzus persicae nicotianae densovirus,MpnDV)的序列相似度高达98.49%,并且二者表现出相似的蛋白编码特征。正义链和负义链均包含2个ORF,分别编码非结构蛋白和结构蛋白。为了进一步监测MpDV在桃蚜体内的表达和分布,我们通过原核表达纯化得到了足量的结构蛋白并制备了高效价和高特异性的多克隆抗血清。首先通过分析蛋白序列,选择OFR3编码的结构蛋白520-721位氨基酸作为免疫原,成功构建表达载体pDB-His-MBP-ORF3,继而转化大肠杆菌Rossetta表达菌株,利用IPTG经低温诱导和超声破碎后,取上清经过镍柱亲和层析柱纯化得到分子量约为66 kDa的融合蛋白。将纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清。为了进一步验证抗血清的特异性,利用膜饲喂的方法分离并得到了不携带MpDV的桃蚜种群。Western blot检测结果表明,携带MpDV的单头蚜虫能发生强烈的血清学反应,证明该抗血清具有较强的特异性,并且其效价测定结果为1:64 000。综上所述,本研究制备的MpDV抗血清为进一步研究MpDV在桃蚜不同组织的表达和分布以及深入探索昆虫病毒-宿主桃蚜-植物病毒三者之间的互作关系提供必要的检测手段。

关键词：桃蚜浓核病毒桃蚜结构蛋白原核表达抗血清制备

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云南重楼抗肿瘤活性成分研究

云南重楼抗肿瘤活性成分研究

作者：左予桐天津大学

学位级别：硕士

中药重楼为百合科植物云南重楼(Paris polyphylla Smith *** (Franch.) Hand.-Mazz.)和七叶一枝花(Paris polyphylla Smith ***(Franch.) Hara)两个变种的干燥根茎。主要分布于四川、云贵等地。它的药用历史悠久,且早已为民间用于抗癌... 详细信息

中药重楼为百合科植物云南重楼(Paris polyphylla Smith *** (Franch.) Hand.-Mazz.)和七叶一枝花(Paris polyphylla Smith ***(Franch.) Hara)两个变种的干燥根茎。主要分布于四川、云贵等地。它的药用历史悠久,且早已为民间用于抗癌药物。现已有楼莲胶囊、金复康口服液等几种复方成药市售,用于治疗多种癌症。在我国,它还是著名中成药云南白药、季德胜蛇药片、宫血宁胶囊等的主要组成药物。现代药理实验发现,重楼提取物对多种人体肿瘤细胞均有显著抑制作用。但近十年来,有关重楼化学成分研究的相关报道却很少,特别是化学单体水平上的抗肿瘤药理研究则更少,其药效作用物质基础也尚不明确,相关制剂无有效成分和特征成分的质量控制指标,所以对其进行系统的化学成分研究和药理活性筛选是十分必要的。我们采用硅胶柱层析、快速层析、凝胶渗透色谱、高效液相制备色谱等分离手段,对重楼乙醇提取物的不同极性提取部分进行了系统地研究,并利用活性跟踪方法,追踪分离有抗肿瘤作用的活性部位和活性成分,共得到23个化学单体,其中从乙酸乙酯萃取部分得15个长链脂肪酸类化合物,1个聚炔类化合物(1,为首次从本植物中获得)、β-蜕皮激素(2)和2个皂苷(4,7);从正丁醇萃取部分得4个皂苷(3,5,6,8)。用Hela(人宫颈癌细胞)、L929(小鼠成纤维细胞)两种细胞株,进行的体外药理活性筛选的结果表明,乙酸乙酯和正丁醇萃取部分的活性较强,石油醚萃取部分在较低浓度下未显示生物活性,同时乙酸乙酯萃取部分显示出比正丁醇萃取部分更强的生物活性。脂肪酸类化合物对KB(人口腔鳞癌细胞)和A2780(人卵巢癌细胞)细胞的抑制率均低于10%,则认为此类化合物无细胞毒活性。聚炔化合物具有一定的细胞毒作用,对Hela细胞的抑制率高于L929。皂苷类化合物显示出较强的细胞毒活性,且具有一定的选择性。在细胞毒实验结果基础上,讨论了细胞毒活性与化合物结构之间的关系。药理实验结果提示无论是薯蓣皂苷还是偏诺皂苷都具有一定的细胞毒作用,且17位上羟基的有无对细胞毒作用无明显影响,皂苷元C-3位连接糖链时,糖的数目及其连接位置对生物活性起着至关重要的作用。综上所述,除以往报道的重楼皂苷类抗肿瘤活性成分外,还存在着其它抗肿瘤化学成分,如聚炔类成分,且分布在乙酸乙酯提取物中。本论文通过对其有效部位和有效成分的初步药理学研究,基本上阐明中药重楼抗肿瘤作用的有效部位和部分有效成分,为深入研究其药效作用机理打下基础。

关键词：重楼有效部位聚炔类化合物皂苷抗肿瘤活性

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草麻黄根中一个新软木脂类化合物

药学学报 2024年第3期59卷 661-666页

作者：张博文李孟王小兰杨颖周诗琪陶思琦杨梦朱登辉徐雅桐冯卫生郑晓珂河南中医药大学药学院河南郑州450046 河南省中药开发工程技术研究中心河南郑州450046

采用硅胶柱色谱、薄层色谱和半制备液相等多种色谱学技术从草麻黄根中分离得到6个化合物。根据理化性质与波谱数据鉴定其结构,分别为(Z)-阿魏酸二十二酯(1)、(E)-阿魏酸二十二酯(2)、邻苯二甲酸-双(2′-乙基庚基)酯(3)、2,2′-氧代双(1... 详细信息

采用硅胶柱色谱、薄层色谱和半制备液相等多种色谱学技术从草麻黄根中分离得到6个化合物。根据理化性质与波谱数据鉴定其结构,分别为(Z)-阿魏酸二十二酯(1)、(E)-阿魏酸二十二酯(2)、邻苯二甲酸-双(2′-乙基庚基)酯(3)、2,2′-氧代双(1,4-二叔丁苯)(4)、邻苯二甲酸二异丁酯(5)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(6)。其中化合物1为新化合物,化合物2~4是首次从麻黄植物中分离得到。采用皮质酮诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC-12细胞)细胞损伤模型进行化合物活性筛选,结果表明,化合物1和5能显著改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤,并且显著升高细胞中5-HT7(5-hydroxytryptamine 7)受体蛋白的表达,具有潜在的抗抑郁活性。

关键词：麻黄根化学成分软木脂类 (Z)-阿魏酸二十二酯抗抑郁活性

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钢包烘烤器技术与研究进展

钢包烘烤器技术与研究进展

高校突发事件中大学生“围观”行为的引导策略

第35届中国过程控制会议

作者：赵毅王立鹏李聪雅左太英杜祥陈雪波辽宁科技大学电子与信息工程学院

钢包在钢铁冶炼生产过程中承担着盛接钢水的作用,在钢包烘烤过程中,控制系统对烘烤火焰的形态及温度起着决定性作用。这也就决定了内衬能达到的最高温度以及盛接钢水的温度,同时也会影响钢包的使用寿命。钢包烘烤的目的是将钢包内衬中... 详细信息

钢包在钢铁冶炼生产过程中承担着盛接钢水的作用,在钢包烘烤过程中,控制系统对烘烤火焰的形态及温度起着决定性作用。这也就决定了内衬能达到的最高温度以及盛接钢水的温度,同时也会影响钢包的使用寿命。钢包烘烤的目的是将钢包内衬中的水烘烤干净,将内衬的温度升高以及保持包内的温度,防止盛接钢水时造成内衬的损坏。钢包烘烤不仅能保证稳定的钢铁生产节奏和产品的质量,还对钢铁连铸生产具有重大意义。本文简述了钢包烘烤器技术和研究的发展过程:首先,针对钢包烘烤器的类型进行了分类;然后,通过对数学模型分析和控制方式,归纳了确保钢包温度能够稳定升温的温度控制方法;最后,在此基础上针对目前钢包烘烤加热过程技术的发展趋势和仍存在的不足,简要提出了未来可能得改进方法及可行方案。

关键词：钢包烘烤器数值模拟自动控制

来源： cnki会议评论

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湖北经济学院学报（人文社会科学版） 2024年第9期21卷 117-119页

作者：杨语桐陈媛媛李姝妤余飞飞王思绪陈嘉欣湖北经济学院新闻与传播学院湖北武汉430205

新媒体时代,公众对高校突发事件的关注程度越来越高。作为利益相关者,大学生“围观”高校突发事件的倾向性较强。根据高校突发事件中大学生评论、转发等具体“围观”行为,从解码偏差困境、正义伸张心理、理性消解态势三方面解读大学生... 详细信息

新媒体时代,公众对高校突发事件的关注程度越来越高。作为利益相关者,大学生“围观”高校突发事件的倾向性较强。根据高校突发事件中大学生评论、转发等具体“围观”行为,从解码偏差困境、正义伸张心理、理性消解态势三方面解读大学生“围观”行为的生成原因,分析大学生“围观”行为易带来的信任危机和舆论失焦问题,并从“对话平台搭建”“应对机制建构”“育人体系完善”三个方面提出对于大学生“围观”行为的引导策略。

关键词：高校突发事件网络围观网络舆论引导策略

项目制驱动的医工融合工程实践课程体系研究与实践

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实验科学与技术 2024年第4期22卷 41-46页

作者：陈依桐陈建朱鲁闯王杰伍剑波四川大学机械工程学院成都610065

医工融合是新工科建设的重要发展方向,医工融合工程实践课程体系建设是实现培养高层次医工交叉型人才的重要一环。该文基于新时代卓越创新人才培养需求,研究与实践项目制为驱动的医工融合工程实践课程体系。医工融合工程实践课程体系以... 详细信息

医工融合是新工科建设的重要发展方向,医工融合工程实践课程体系建设是实现培养高层次医工交叉型人才的重要一环。该文基于新时代卓越创新人才培养需求,研究与实践项目制为驱动的医工融合工程实践课程体系。医工融合工程实践课程体系以解决临床医学工程问题为目标、贯通式医工融合创新项目为驱动、医学工程创新思维为先导、全过程实践为主线、工程创新能力培养为核心、多元化双主体评价考核为闭环,通过医工学科交叉融合的创新实践教学模式,完成学生知识、能力、实践、创新、劳动等一体化培养,全方位提升学生的自主学习能力、实践能力、理论基础、团队协作、创新和沟通表达能力。

关键词：医工融合项目制工程实践评价考核

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浅谈中国传统钓法（十一）——标相的变化

不同入路神经内镜下血肿清除术治疗高血压脑出血的效果分析

垂钓 2024年第1期

作者：沈禹羲

来源：博看期刊评论

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长春中医药大学学报 2024年第9期40卷 1033-1037页

作者：余飞左延卿陈节高凤云铜陵市人民医院神经外科安徽铜陵244000 铜陵职业技术学院安徽铜陵244000

目的探讨不同入路神经内镜下血肿清除术治疗高血压脑出血的效果。方法选取82例高血压脑出血患者,根据手术方法的不同分为经额入路组和经颞入路组,各41例。经额入路组和经颞入路组分别经额叶、颞叶入路行神经内镜下血肿清除术,2组术后均... 详细信息

目的探讨不同入路神经内镜下血肿清除术治疗高血压脑出血的效果。方法选取82例高血压脑出血患者,根据手术方法的不同分为经额入路组和经颞入路组,各41例。经额入路组和经颞入路组分别经额叶、颞叶入路行神经内镜下血肿清除术,2组术后均随访3个月。比较2组术后3个月的疗效;术前,术后1周、3周的神经功能及意识状态,术前、术后24 h的炎症介质,术前、术后3 d的神经营养因子和随访期间的并发症发生情况。结果较经颞入路组,经额入路组术后引流时间更短,血肿清除率更高(P<0.05);较术前,2组术后1周、3周的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分逐渐降低,格拉斯哥昏迷评分法(GCS)评分逐渐升高(P<0.05);与术后1周比较,经额入路组术后3周的NIHSS评分、GCS评分均优于经颞入路组(P<0.05);较术前,2组术后24 h的血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);较术前,2组术后3 d的血清血清脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经生长因子(NGF)水平升高,且经额入路组高于经颞入路组(P<0.05);血清烯醇化酶(NSE)水平降低,且经额入路组低于经颞入路组(P<0.05)。结论经额和经颞叶入路神经内镜下血肿清除术治疗高血压脑出血均可发挥良好的疗效和安全性,且二者均对炎症介质的影响较小,但相比经颞叶入路,经额叶入路可缩短患者术后引流时间,提高血肿清除率,并可调节患者机体神经营养因子水平,改善患者神经功能及意识状态。

关键词：高血压脑出血经颞入路经额入路神经内镜血肿清除术神经功能炎症介质神经营养因子

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基于效率提升的风机叶片优化设计和应用

电力设备管理 2024年第2期 80-82页

作者：刘启栋严得鑫左仲林李炜明孙志远青海黄河风力发电有限责任公司

由于风电机组是一种高度柔性化产品,对风场环境和风速变化非常敏感,风场条件变化将导致风机效率发生巨大变化,如何根据风场条件来合理调整叶片设计参数是提高风电机组效率、降低制造成本的重要途径之一。本文通过优化叶片结构来降低材... 详细信息

由于风电机组是一种高度柔性化产品,对风场环境和风速变化非常敏感,风场条件变化将导致风机效率发生巨大变化,如何根据风场条件来合理调整叶片设计参数是提高风电机组效率、降低制造成本的重要途径之一。本文通过优化叶片结构来降低材料用量和提升风机效率,以某金风S43/600风力发电机组为例进行分析,讲解了叶片的优化设计方法,如气动性能优化、结构性能优化和新型材料应用等。

关键词：风机叶片优化设计效率提升