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棉酚对多浪羊淋巴细胞核酸的影响及多浪羊IFN-γ克隆和表达

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棉酚对多浪羊淋巴细胞核酸的影响及多浪羊IFN-γ克隆和表达

作者：左文斌塔里木大学

学位级别：硕士

本实验将棉酚作用于体外培养的多浪羊淋巴细胞,采用Trizol法提取棉酚作用于不同时间体外培养淋巴细胞的DNA和总RNA,根据核酸电泳结果,揭示棉酚对淋巴细胞凋亡影响的规律。结果表明：0.071mmol/L的棉酚作用于体外培养的淋巴细胞DNA3h开... 详细信息

本实验将棉酚作用于体外培养的多浪羊淋巴细胞,采用Trizol法提取棉酚作用于不同时间体外培养淋巴细胞的DNA和总RNA,根据核酸电泳结果,揭示棉酚对淋巴细胞凋亡影响的规律。结果表明：0.071mmol/L的棉酚作用于体外培养的淋巴细胞DNA3h开始降解,4h淋巴细胞DNA出现梯状条带,5h出现完全降解,0.071mol/L的棉酚作用于体外培养的淋巴细胞RNA1h、2h时,28S、18S均出现了涂抹,3h、4h、5h时,18S已降解。以新疆多浪羊淋巴细胞为实验材料,使用Trizol法提取其总RNA,以GenBank中NM001009803的：nRNA序列,用primer premier5.0软件辅助设计了多浪羊IFN-γ的基因,然后以淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR,反转录扩增出IFN-γ的目的基因。将RT-PCR产物切胶回收纯化后连接到pMD-18T克隆载体上转化DH5α,过夜培养,挑选阳性克隆菌,制成30%甘油菌,送北京博大泰克生物基因技术有限责任公司进行DNA序列测定。测序结果表明目的基因的核苷酸大小为582bp,通过多序列比对发现第391位核苷酸发生了突变。 IFN-γ基因与pET-28c载体进行连接,酶切鉴定、PCR鉴定后确定,含有目的基因片段的原核表达载体pET-28c-IFN-γ构建成功。然后将重组原核表达载体pET-28c-IFN-γ转化到*** BL21中,用IPTG诱导表达,表达出约24.4KDa融合蛋白。同时根据SDS-PAGE显示对融合蛋白进行表达条件的优化,最佳诱导温度是37℃,最佳诱导时间为4.0h,最适IPTG诱导浓度为1.5mmol/L。通过Bandscans.O软件分析融合蛋白的表达量,融合蛋白占菌体总蛋白的14.2%。用融合蛋白pET-28c-IFN-γ免疫家兔,在免疫后45天,Western-blot和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28c-IFN-γ能被家兔的阳性血清所识别,表达蛋白pET-28c-IFN-γ具有较好的反应原性和免疫原性。

关键词：棉酚淋巴细胞核酸 IFN-γ克隆融合表达抗原性

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京杭运河大桥自振频率影响因素分析

硅谷 2008年第14期 94-95页

作者：左文斌中交第二公路勘察设计研究院有限公司湖北武汉430056

通过钢管的截面尺寸、横撑数量、传力结构的形式、拱肋刚度等方面对京杭运河大桥主孔自振频率影响的探讨,得出对同类桥梁设计具有参考价值的结论。

关键词：钢管混凝土拱桥自振特性分析

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30m现浇连续箱梁桥加宽拼接分析

华东公路 2008年第5期 16-20页

作者：左文斌中交第二公路勘察设计研究院有限公司湖北武汉430056

综观国内外高速公路扩建工程,其扩建方式不外乎分离新建和拼接加宽两种,通过对现浇连续箱梁桥加宽拼接分析。

关键词：高速公路桥梁扩建拼接

对高速公路扩建工程中原有桥梁可变作用的探讨

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硅谷 2008年第13期 67-68页

作者：左文斌中交第二公路勘察设计研究院有限公司湖北武汉 430056

综观国内外高速公路扩建工程,其扩建方式不外乎分离新建和拼接加宽两种,通过对高速公路扩建工程中原有桥梁可变作用的探讨,得出了对同类工程的桥梁设计具有参考价值的建议。

关键词：高速公路扩建原有桥梁可变作用

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滏阳新河特大桥病害成因分析及加固方案

湖南交通科技 2008年第2期34卷 95-99页

作者：左文斌中交第二公路勘察设计研究院有限公司湖北武汉430056

对滏阳新河特大桥病害的成因从设计、施工、运营管理3个方面进行了分析,并针对病害提出了加固、防治措施。

关键词：桥梁病害加固防治

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甘肃都市频道《都市第1线》:做有温度的电视节目

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视听 2017年第10期 167-168页

作者：左文斌甘肃省广播电影电视总台

近年来,类似江苏台《南京零距离》、甘肃台《都市第1线》等一大批民生类新闻栏目纷纷出现在各地电视媒体中,由于这种平民视角的播报方式很接地气,因而受到观众青睐。民生类新闻节目的生存之本就是用心关注百姓冷暖,用情抒写基层民生,用... 详细信息

近年来,类似江苏台《南京零距离》、甘肃台《都市第1线》等一大批民生类新闻栏目纷纷出现在各地电视媒体中,由于这种平民视角的播报方式很接地气,因而受到观众青睐。民生类新闻节目的生存之本就是用心关注百姓冷暖,用情抒写基层民生,用有温度的电视语言把人民群众遇到的热点、难点问题反映出来。与此同时,民生新闻也存在一些问题,值得深入思考。

关键词：《都市第1线》平民视角有温度民生新闻

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